原生质体诱变选育分解X光胶片的菌株

从厦门福达感光胶片厂的污水中分离到207株芽孢杆菌,其中一株显示了较强的分解明胶的能力.该菌经鉴定为巨大芽孢杆菌(Bucillus megaterium 207).用溶菌酶制备207菌的原生质体,经紫外线诱变获得一变异株(207—A5),产蛋白酶活力由830u/ml 提高到4731u/ml.     

枯草芽孢杆菌YYW-1蛋白酶缺陷株诱变与筛选

从羽毛废弃物中筛选出一株高效降解羽毛、产角蛋白酶和蛋白酶的革兰氏阳性芽孢杆菌,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus sublitis),命名为B.sublitisYYW-1。利用紫外线对菌株YYW-1进行诱变,筛选蛋白酶缺陷株,获得蛋白酶活性丧失的诱变株YYW-1-5,其蛋白酶活性残余22.7%,而角蛋白酶活性残余94.7%,没有明显的变化。     

鸟苷产生菌解淀粉芽孢杆菌的选育

出发菌GR001通过形态观察、生理生化实验、16S rDNA同源性序列分析及部分特异性基因序列分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以GR001为出发菌,通过化学诱变选育出一株遗传标记为腺嘌呤营养缺陷、6–巯基嘌呤抗性以及蛋氨酸亚砜抗性(Ade-+MSOr+6-MPr)的突变株GR600.以GR600为受体菌,采用原生质体转化法获得转化子GR607(Ade-+MSOr+6-MPr+kmr),鸟苷产量高达20.82,g/L.     

枯草杆菌GMS7突变株肌苷发酵研究

以肌苷产生菌枯草杆菌7171—9—1为出发菌株,经物理、化学诱变剂连续处理,获得一株腺嘌呤营养缺陷型并对8—氮杂鸟嘌呤、磺胺胍、链霉素有三重抗性的突变株GMS7,在最佳摇瓶发酵条件下,平均产肌苷为21.35g/L,最高可达23.21g/L,比原菌提高了1.4倍。此外从形态学角度,跟踪观测了肌苷发酵过程中菌体形态的变化,并探讨了各种因素对发酵产苷的影响。     

华北地区圈养大熊猫粪便中产纤维素酶芽孢杆菌菌株的分离与鉴定

为分离筛选大熊猫肠道中具有纤维素降解能力的芽孢杆菌菌株,首先对8份大熊猫粪便进行高温水浴处理,利用刚果红平板法进行初筛和复筛,DNS法测定酶活力.结果分离出126株菌株,其中8株菌株纤维素降解能力较强.结合形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析,鉴定8个菌株均属于芽孢杆菌属,其中1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),1株阿萨尔基芽孢杆菌(B.axarquienis),2株西姆芽孢杆菌(B.siamensis),4株甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus).实验表明大熊猫肠道中存在多种降解纤维素的芽孢杆菌,其中新发现的有大熊猫源的阿萨尔基芽孢杆菌和西姆芽孢杆菌,丰富了大熊猫肠道菌群的研究,并为高效生产纤维素酶提供新的菌种来源.探究了大熊猫消化道内高效的纤维素降解菌,有利于实现高纤维类饲料资源化利用.     

芽孢缺失对D-核糖产量的影响

利用原生质体紫外线诱变的方法处理转酮酶缺陷型短小芽孢杆菌,选育到一株丧失芽孢形成能力的转酮酶缺陷型短小芽孢杆菌,摇瓶培养D-核糖平均产量达到66g/L,较出发菌株提高38%.研究表明,芽孢生成缺陷有利于D-核糖的产生,筛选芽孢生成能力缺陷的菌株是选育D-核糖高产菌株的有效手段.     

高温大曲中两株产酱香菌的分离鉴定

为提高酱香型白酒风味,以高温大曲为原料,采用高温培养法和麸皮固体培养基固态发酵筛选出20株芽孢杆菌.通过对各菌株产香实验筛选出2株产酱香的芽孢杆菌(GX07和GX08),并结合菌株生理生化和16S rDNA基因序列对两株菌株进行鉴定.结果表明,GX07为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),GX08为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

一株万古霉素产生菌的分离及育种

从厦门集美的土壤样品中分离了一株发酵产物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B)26003和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CMCC(B)63501具有明显抑菌活性的放线菌菌株(XM0301).经形态、生理、生化鉴定和16S rDNA序列分析,为一株东方拟无枝酸菌(A mycolatopsis orientalis),高效液相色谱(HPLC)检测其发酵产生万古霉素.随后采用原生质体诱变和基因组改组提高其万古霉素的产量,经初筛、复筛获得万古霉素产量达到4 210μg/mL的高产突变株G2-73.     

动物微生态制剂鸡肠源芽孢杆菌的分离与鉴定

试验菌种由宁夏固原山区完全自然生长的土种健康产蛋母鸡的盲肠和大肠中分离获得,共分离出8株革兰氏染色阳性杆菌株,对其进行茼落形态观察和描述,及革兰氏染色、芽孢染色和生理生化鉴定,确定4株为芽孢杆菌（Bacillus）,其中3株为枯草芽孢杆菌（B、subtilis）,1株为蜡状芽孢杆菌（B．cereus）,各项鉴定结果均符合相对应的芽孢杆菌属和种的菌落形态,及革兰氏染色、芽孢染色特征和生理生化鉴定标准;另4株初步确定为不产芽抱的革兰氏阳性杆菌．     

诱变选育木醋杆菌以提高细菌纤维素产量

针对野生型木醋杆菌纤维素产量较低的问题,采用化学、物理以及物理一化学相结合的手段诱变筛选得到多株高产纤维素的木醋杆菌诱变株.其中,经亚硝酸诱变处理获得的3株高产菌株的纤维素产量是原始菌株的2.2～2.8倍,而经紫外照射结合氯化锂诱变处理得到的2株菌株的产量大约是原始菌株的1.4倍.该结果为今后工业化大规模生产奠定了坚实的基础.     

D-核糖高产菌株的选育

以枯草芽孢杆菌为出发菌,经紫外线诱变处理,选育出莽草酸营养缺陷型突变株Ｂｓ－０９,其发酵产物经物理和化学鉴定为Ｄ－核糖。经碳源和氮源试验发现,该菌株在葡萄糖或山梨糖为碳源,酵母粉或玉米浆为有机氮源,硫酸铵为无机氮源,碳氮比为６的发酵培养其中生长良好。     

PGPR芽孢杆菌B-1菌株的鉴定及其应用效果

从国外产品中分离得到一株PGPR菌株,编号为B-1;观察了该茵株的形态大小和茵落形态,进行了生理生化反应,通过热变性法测定其G+C(鸟嘌呤-胞嘧啶)摩尔分数为47.2%,鉴定该菌株为短芽孢杆菌(Bacillus brevis);通过小麦水培实验研究了该菌株对小麦株高和鲜重的影响,地上部鲜重较对照增加10.64%,株高较...     

枯草杆菌JAS株α—淀粉酶的产生与其抗衣霉素的关系

为了研究Bacillus subtilis的产α-淀粉酶性状与其抗衣霉素性状之间的关系,进一步选择在诱变育种时能有效地筛选淀粉酶基因突变株的方法,我们对此作了初步探索.衣霉素敏感型的α-淀粉酶工业生产菌B.subtilis JAS经过紫外线诱变后,选得9株抗衣霉素突变株.通过对它们进行的多次发酵酶活力测定,发现其中3株是α-淀粉酶缺陷型、3株酶活力基本不变或降低,另外3株酶活力明显提高,其中1株酶活力是出发菌株的114%—123%.试验表明B.subtilis α-淀粉酶的产生与其抗衣霉素基因的表达有着密切关系.因此,在对该菌的诱变育种时,可以采用衣霉素为粗筛选择压力.     

中式发酵香肠菌种的分离筛选和初步鉴定

从烟台喜旺中式发酵香肠中分离筛选出适合当地特色的、具有自然发酵香肠风味的微生物菌株,采用系统分类鉴定方法对筛选出的菌株进行初步鉴定,鉴定结果表明:1MRS、4MRS为德氏乳杆菌德氏亚种,2MRS、3MRS为食品乳杆茵,5MRS为米酒乳杆菌;IMSA、2MSA为木糖葡萄球菌,3MSA、4MSA为模仿葡萄球菌,5MSA、6MSA、7MSA为松鼠葡萄球菌.此外,研究了其中几株茵的产酸、产酶等能力,发现这些菌株都具有优良的发酵性能.     

纤维素酶益生菌的选育及产酶条件

从土壤中筛选出一株产纤维素酶的细菌B1,通过形态观察、生理生化特征及16S rDNA同源性序列分析,鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus).经微波-硫酸二乙酯复合诱变筛选出正突变株B1-1,其纤维素酶酶活达到0.373 U/mL,经5次传代后,该菌株遗传性状稳定,且胃肠道耐受性良好;B1-1菌株最佳产酶条件为20 g/L麦芽糖,2.5 g/L硫酸铵,pH值为5.0,37 ℃下培养36 h.     

克氏原螯虾调理产品中主要腐败菌的分离鉴定

为了分离鉴定克氏原螯虾调理产品在4℃冷藏条件下的腐败菌菌相组成,将其在4℃条件下冷藏至货架期末(20 d左右),此时克氏原螯虾调理产品中菌落总数为7.05 logcfu/mL.采用传统分离纯化、菌落形态观察、生理生化鉴定与16S rDNA序列分析方法结合,对腐败菌进行分离鉴定.结果表明:在克氏原螯虾样品中共分离得到85株菌株,经镜检、生理生化鉴定以及16S rDNA测序得到5株典型优势菌,分别为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methlotrophicus)、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)、沃氏葡萄球菌(Staphylococccus wameri)和溶酪巨型球菌(Macrococcus caseolyticus).     

亚硝基胍与紫外诱变选育高效解钾菌株

为构建遗传背景差异较大、解钾性能稳定提高的候选菌库,选用课题组分离的蜡样芽孢杆菌L18（Bacillus cereus,KF494191) 为出发菌株,对其分别进行亚硝基胍（NTG）和紫外（UV）诱变处理,经四苯硼钠-季铵盐显色初筛,摇瓶发酵复筛,获得42株解钾能力显著增强的突变株,其中：诱变株L18-NTG-151和L18-UV-68发酵液钾质量浓度分别为126.74,121.69 mg/L,与出发菌株相比分别提高了63.64%和57.12%.结果表明亚硝基胍和紫外线诱变处理能显著提高蜡样芽胞杆菌的解钾能力.     

L-甲硫氨酸高产菌株的紫外线诱变育种

以一株具有M-海因水解酶系统产L-甲硫氨酸(L-Met)的芽孢杆菌MV0073为出发菌株，用含亮氨酸平板定向选育，经过6轮紫外诱变，筛选出系列L-Met高产突变株，其中菌株M604的L-Met产量最高．在相同培养条件下，M604的L-Met产量是出发菌株的3．14倍，且L-Met能以较高含量持续到发酵结束．M604连续传代6次，遗传性状比较稳定．     

产共轭亚油酸乳酸菌的选育和鉴定

采用紫外分光光度法测定共轭亚油酸的含量,从13株实验室保存的乳酸菌中筛选出8株具有转化亚油酸生成共轭亚油酸能力的菌株.其中As1.2686产量最高,发酵液中共轭亚油酸含量达到13.63 mg/L;其次是菌株B11693,共轭亚油酸产量为11.55 mg/L.选择B11693做进一步的菌种鉴定,将传统的形态学、生理生化鉴定方法和细菌16SrDNA分子生物学鉴定方法相结合,鉴定菌株B11693为短乳杆菌.     

CoA产生菌的诱变育种及发酵条件研究

研究了ＣｏＡ产生菌诱变育种及摇瓶发酵条件。以产氨短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃ－ｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ）ＡＳ１．８４４为出发菌株， 经单菌落分离获得了 ＢＳ１．８４４菌株，再经过紫外和 ＮＴＧ诱变，获得了对 ＴＭＴＤ具有抗性的 ＣＴ４００变异株， ＣｏＡ产量为 ５３５ ｕ／ｍＬ，比原亲株提高了 ２６９％。实验了不同的培养基组分，获得了最适培养基。采用两步补料法能显著提高 ＣｏＡ产量，比原一步补料提高 ３３％。不加热提取工艺能有效降低色素含量， ＣｏＡ得率略有增加。实验选用了 ４种阳离子型表面活性剂，以 ＣＰＣ对积累 ＣＯＡ效果最好。