鲑点石斑鱼细菌病原的分离鉴定和致病性

对海南省三亚地区网箱养殖的发病鲑点石斑鱼 (Epinephelusfario)进行病原分离 ,通过常规细菌学鉴定和应用ATB半自动鉴定系统及VITEK_AMS_6 0自动微生物鉴定系统 ,并与有关的标准菌株为对照 ,鉴定为溶藻弧菌 (Vibrioalginolyticus)。小鼠毒性实验和不同方式感染鲑点石斑鱼实验的结果表明 ,该菌对小鼠有极强的毒力 ,不同感染方式感染鲑点石斑鱼表现不同程度的致病性。同时测定了溶藻弧菌对小鼠和鲑点石斑鱼的LD50 分别为 3 2× 10 5个 /mL和 2 1× 10 7个 /mL。进一步比较溶藻弧菌对青石斑鱼 (Epinephelusowoara)、真鲷 (Pagrosomusmajor)、平鲷 (Rhabdosargussarba)、黑鲷 (Sparusaurata)、红鳍笛鲷 (Lutjanuserythopterus)、黄斑蓝子鱼 (Siganusoramia)等一些常见海水养殖鱼类的致病性 ,该菌能导致不同海水养殖鱼类死亡并表现一定程度的症状。     

海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病病原的分离、鉴定、药敏分析及病理学研究

2016年,针对海南岛沿岸9个石斑鱼养殖场的石斑鱼皮肤溃疡病的调查发现,该疾病的发病面积广、死亡率高,对养殖产业的危害严重.从9个采样点3种患病石斑鱼样品的组织中分离得到了9株优势菌株,人工回感试验表明,其感染特征与自然病症一致,证明这9株菌均为皮肤溃疡病的致病原,在经过生理生化和16S r DNA序列分析后,这9株菌均被鉴定为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi).人工回感试验证实,菌株SY-1对珍珠龙胆石斑鱼的毒力最强,其14天每克鱼体重的半致死剂量(LD50值)为7.18×10~4cfu;药敏实验的分析表明,这9株病原菌对34种抗菌药物的药敏谱基本一致,但对氟苯尼考、强力霉素、四环素等药物高度敏感;病理学的研究表明,患病鱼的鳃丝、皮肤、肌肉、肝脏、脾脏、肾脏、肠道和脑等组织器官都发生了不同程度的病理变化,因此认为该病为全身性感染.本研究表明,目前海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病的致病原有较高的病原同一性,主要为哈维氏弧菌;而较早报道的溶藻弧菌、副溶血弧菌等致病菌的优势度大大降低了,其致病力有所下降,并且与海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病的相关度不大.     

对海南地区石斑鱼养殖中鱼蛭病的初步研究

近年来,在海南地区养殖的石斑鱼鱼体上寄生了一种鱼蛭,为了了解该蛭的种类、宿主和寄生偏好,对该蛭进行了形态学观察,并基于NJ法构建了COI、NDI和18s rDNA基因的系统发生树,调查和总结了该蛭的宿主和寄生偏好.基于COI、NDI和18s rDNA基因序列的系统发生树和比对分析显示,该蛭与在Borneo采集的菲律宾蛭的亲缘关系最近,为同一个种;此外,在海南地区发现了菲律宾蛭的9种海水鱼类宿主,这些宿主为豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)、棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)、点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)、斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)、鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)、珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂×Epinephelus fuscoguttatus♀)、驼背鲈(Cromileptes altivelis)、波纹唇鱼(Cheilinus undulatus)、六斑刺鲀(Diodon holocanthus)等,而且发现菲律宾蛭最喜欢寄生在豹纹鳃棘鲈上,其对5种石斑鱼的寄生偏好依次为:豹纹鳃棘鲈点带石斑鱼≥棕点石斑鱼珍珠龙胆石斑鱼龙胆石斑鱼.笔者推测:寄生在海南地区养殖石斑鱼体上的菲律宾蛭是通过石斑鱼贸易而进入海南的一个外来种,该蛭对海南地区其他海水鱼类的养殖不会直接造成损害,但该蛭的繁殖速度快,易引起石斑鱼烂身、消瘦、营养不良、严重减产等,更可能成为血液细菌、病毒、寄生虫等微生物传播的媒介,从而存在引发海水养殖鱼类大量发病的可能.     

斜带石斑鱼TLR5S基因结构及功能分析

Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)属于先天免疫系统中的一种模式识别受体(PRR),可分为可溶型和跨膜型2种.它可以识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP),从而启动信号转导.本研究从NCBI数据库中得到斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)可溶型TLR5(ECTLR5S)cDNA全长序列(Genbank登录号:GQ396667).其cDNA序列全长2 439bp,包括69bp的5′UTR,435bp的3′UTR和1 935bp的开放阅读框,共编码644个氨基酸,预测编码蛋白质分子质量为72.28ku,等电点为6.37.将ECTLR5S基因氨基酸序列与其他脊椎动物的TLR5S基因氨基酸序列进行比对,结果显示出很高的相似性,其中与牙鲆相似度可达69%.Real time PCR检测结果显示ECTLR5S基因在斜带石斑鱼不同器官中均有表达,其中在肝脏中的表达量最高,其次是脾脏、血淋巴、肾脏等.Realtime PCR检测ECTLR5S基因在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染3,6,12,24,48h后的肝脏中表达情况,结果显示ECTLR5S基因在3,6,12,24h时表达量显著上调(p<0.05),而在48h下降至初始水平.这些结果说明ECTLR5S基因可能参与到斜带石斑鱼抗弧菌感染的免疫反应中,并且肝脏是其发挥作用的重要器官.     

重庆市水产品中副溶血性弧菌分离株的毒力基因研究

目的:了解重庆市副溶血性弧菌分离株的毒力基因、血清型以及耐药性,为防治副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据.方法:采用PCR方法检测溶血素基因,并结合药敏试验以及血清分型进行综合分析.结果:323份水产品样品中共分离出的35株副溶血性弧菌,其tdh和trh基因携带率分别为14.29%、2.86%,血清群主要为:O3群、O5群、O1群;14株临床分离株主要为O1群、O3群.两组不同来源的菌株均对头孢噻肟、环丙沙星、诺氟沙星敏感,对氨苄西林均有较强的耐药性.结论:重庆地区水产品中副溶血性弧菌的毒力基因携带率较低,但是血清型呈现多样性,且耐药性较严重,因此存在发生副溶血性弧菌食物中毒的潜在危险.     

引起舟山地区凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病病原的分离与鉴定

2014-2019年期间,从舟山地区疑似发生急性肝胰腺坏死综合病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)对虾体内共分离到30株病原菌。通过16S r RNA基因及gyrB、rpoA等基因同源性检索分析对30株分离菌进行了鉴定;同时运用Nested-PCR方法筛选并鉴定了菌株pirABVP基因携带情况;选取代表性菌株,以浸泡感染方法进行了致病性试验。分离菌鉴定结果显示:从舟山地区凡纳滨对虾肝胰腺中分离到的病原菌主要以副溶血弧菌、坎贝氏弧菌及欧文斯氏弧菌为主;其中10株菌携带pirABVP毒力基因;本实验选取4株pirABVP基因阳性菌和1株pirABVP基因阴性菌进行了感染试验;致病性试验显示,携带pirABVP毒力基因的4株菌可使健康对虾发病,出现急性肝胰腺坏死病的典型症状,且持续暴露于病原菌的实验对虾的最高死亡率可达95%,比短时间暴露组死亡率高40%左右;发病虾肝胰腺及肠道组织出现了肝胰腺小管崩塌及肠绒毛脱落等严重的病理变化。研究表明,携带pVA1质粒的副溶血弧菌、欧文斯氏弧菌和坎贝氏弧菌等多种弧菌诱发了舟山地区对虾AHPND,养殖环境中的AHPND致病菌持续存在会导致对虾死亡率处于高水平状态。     

重组斜纹夜蛾核型多角体病毒的构建和初步筛选

斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nucleopolyhedroviruse,SpltMNPV)日本株(C3)(又命名为SpltMNPV Ⅱ)是Kamiya等从日本全国各地野外感病幼虫收集、分离到189个SpltMNPV克隆中繁殖率和毒力极强的一种新型病毒株.本研究在SpltMNPV Ⅱ的基础上构建了egt缺失的,多角体启动子启动的,BmK ITa1成熟肽和增强型绿色荧光蛋白(egfp)融合表达的重组移载体psk-△egt-pph-BmK ITa1-egfp,并通过共转染初步筛选出重组病毒感染的荧光细胞.成果为进一步研制高效重组SpltMNPV生物杀虫剂提供了可行性.     

斜带石斑鱼肝脂酶和脂蛋白脂酶基因克隆与序列分析

为从分子水平研究海水鱼类肝脂酶(hepatic lipase,HL)和脂蛋白脂酶(liportein lipase,LPL)基因在脂质代谢过程中的作用及其分子系统进化地位,采用RT-PCR及RACE法从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)肝脏克隆得到HL、LPL基因cDNA全序列.克隆获得斜带石斑鱼肝脏HL基因cDNA全长2 261 bp,其中5′非翻译区(5′-UTR)为186 bp,3′-UTR为590 bp,开放阅读框(ORF)为1 485 bp,编码494个氨基酸;LPL基因cDNA全长2 191 bp,其中5′-UTR为 144 bp,3′-UTR为 499 bp,ORF为1 548 bp,编码515个氨基酸.序列同源性分析表明,斜带石斑鱼HL、LPL基因与哺乳动物同源性均低于真骨鱼类罗非鱼、斑鳢和真鲷等,这与其亲缘远近关系相一致,表明HL、LPL在进化过程中都相对保守.构建系统发生树显示,斜带石斑鱼HL、LPL基因氨基酸序列与大口黑鲈、真鲷等共同占据进化树上独立的分枝,与较为原始的硬骨鱼类中华鲟在进化树上距离较远.本实验对斜带石斑鱼HL、LPL基因同源性、系统进化地位的研究,为进一步研究海水鱼类脂代谢调控机制,预防鱼类脂代谢疾病奠定了基础.     

人工育苗条件下点带石斑鱼仔鱼开口期摄食的观察

在人工育苗条件下 ,测定了点带石斑鱼育苗池中饵料生物的种类和密度 ,同时解剖观察仔鱼的消化管 ,测定其食物组成 ,并根据食料基础和食物组成的测定数据 ,分析点带石斑鱼仔鱼开口期对不同饵料的选择性 .结果表明 ,点带石斑鱼仔鱼于 3d龄开始摄食 ,摄食的第 1d只能选择小球藻和一些贝卵为食 ,对贝卵的选择性指数为 0 .374 0 ,小球藻的选择性指数为 0 .0 144 ;摄食的第 2d ,开始摄食轮虫和桡足类无节幼体 ;开口的第 5d开始摄食桡足类幼体 .点带石斑鱼仔鱼白天摄食 ,夜间不摄食 ,对食物的消化速度很快 ,仅 1个多小时胃内的食物就可以完全排空 .     

我国2020年下半年SARS-CoV-2病毒株的基因突变分析

基于2020年6月1日—12月1日GISAID网站(http:∥platform.gisaid.org)公布的来自中国(不含台湾地区)的全部21条病毒基因组序列,以2019年12月公布的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)参考株NC_045512和MN996528进行各基因组错义突变位点分析,计算突变频率,寻找各突变最早出现的时间和地点,GISAID网站内搜索相似病毒株.结果显示:我国2020年下半年公布的北京市、浙江省、辽宁省大连市、云南省、山东省青岛市五地全部21个病毒株中共有18处错义突变,集中分布于Spike(S)、ORF1ab和Nucleocapsid(N)基因.S蛋白的D614G突变和NSP12(RdRp)蛋白的P323L突变具有最高的突变频率;除北京市的病毒株中发现的一个新突变位点外,其他位点突变均主要出现于欧洲或北美洲.根据突变位点分类,病毒株均属于欧洲的G支系,其中云南省的病毒株属于GH支系,与来自于泰国等亚洲的病毒株相似;山东省青岛市、辽宁省大连市、浙江省、北京市的病毒株属于GR支系,与来自欧洲的病毒株相似.综上,2020年下半年我国SARS-CoV-2病毒株主要为外源输入病毒株,在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)防控策略上要在各运输环节严防外源输入;病毒新突变在严格的防控措施下未发生扩散,进一步说明我国采取的防控措施非常有效.     

几种海水养殖鱼类化学组成的比较

对广东地区主要海水养殖鱼类青石斑鱼Epinephelus awoara、黄鳍鲷Sparus latus、银鲳Pampus argenteus、美国红鱼Sciaeunops ocellatus的全鱼及肌肉化学组成进行了测定.比较了几种鱼的肌肉水分、蛋白质、脂肪和灰分含量的差异,同时进一步检测了这几种鱼肌肉结构氨基酸的组成,为今后的营养研究提供必要的数据.     

三亚临春河红树林生态系统中鱼类营养级的分析

为了解该三亚市临春河红树林生态系统中鱼类营养级的状况,本研究采用稳定同位素技术系统水体中的鱼类进行了分析。结果发现5种鱼类：沙鲮鱼（Sillago.sp）、多鳞鳝鱼（Sillagosihama）、黑边石斑鱼（Epinephelus fasciatus）、天竺鲷鱼（Apogon.sp）、赤点石斑鱼（Genus Epinephelus.sp）,组织的氮同位素值分别为5.82‰、11.60‰、12.62‰、17.72‰、和12.76‰,对应的营养级分别为1.77、3.47、3.77、3.80和3.81。结论,三亚河沿岸红树林生态系统中,主要存在2个营养级。其中,沙鲮鱼处于相对较低的营养级,属于初级消费者。多鳞鳝鱼、黑边石斑鱼、天竺鲷鱼、赤点石斑鱼位同一营养级,属于次级级消费者。     

Differentiation of Epinephelus moara from E. bruneus by improved nest-tetra-primer-specific PCR

Epinephelus moara and E. bruneus are closely related species in the genus Epinephelus (Perciformes, Serranidae). Their morphological similarity, changing color pattern at different stages and living conditions make them difficult to be differentiated. To identify these two species, an improved nest-tetra-primer-specific PCR assay was developed. Three specific molecular markers, the control region NC1 (394 bp), species-specific internal region ND2-M (268 bp) and ND2-B (122 bp), were identified in the mitochondrial ND2 gene from these two grouper species. Five markers were also discovered in the ITS1 regions of their nuclear ribosomal DNA, which were the control regions NC2 (588 bp) and NC3 (563 bp), and species-specific internal regions rDNA-M (426 bp), ITS1-M (488 bp) and ITS1-B (304 bp). This method provided a highly specific, precise, reliable and rapid molecular marker technique to discriminate between the two grouper species, as well as a new way of DNA identification to differentiate closely related species in fishes.     

赤点石斑鱼7个地理群体的AFLP分析

 应用AFLP技术对赤点石斑鱼Epinephelus akaara 7个地理群体进行了遗传多样性及遗传分化的分析。结果显示：不同群体的遗传多样性差异较大,大亚湾群体和舟山群体遗传多样性最低,湛江群体最高;通过UPGMA聚类,7个群体88个个体明显分成3支,三亚群体单独聚为一支（Clade A）,湛江群体的部分个体聚类为一支（Clade B）,湛江群体剩余个体和其他5个群体的个体聚为一支（Clade C）。其中在分支C中存6个小的分支,这6支中个体间基本以地理群体进行聚类。研究结果为赤点石斑鱼种质资源保护和遗传改良提供了遗传学依据。     

海水鱼类寄生本尼登虫的ITS1 序列

从不同的海水鱼上采获一批本尼登虫(单殖纲、分室科、本尼登亚科)，其中部分标本经形态学研究后仍不能定种．本文采用PCR扩增及DNA序列测定的分子生物学方法，对棘鳞鳗本尼登虫、玫氏新本尼登虫、新本尼登虫未定种1和新本尼登虫未定种2的rDNA基因的TIS1序列进行了研究．结果表明：新本尼登虫未定种1和新本尼登虫未定种2与玫氏新本尼登虫的TIS1序列非常相似，差异率为0．7％(小于1％)，应为同一个种．而本尼登虫与新本尼登虫间的差异在33％以上．本研穷弥补了本尼得类单殖吸虫形态分类的某些不足．     

杂色鲍( Haliotis diversicolor Reeve) 消化腺细菌的初步研究

从正常杂色鲍（无病症，腹足吸附力强）的消化腺分离到5个细菌菌株：1－1－3，3－1－1，4－1－1，5－3－3，5－4－3。经VITEK－AMS－60自动鉴定系统鉴定，前4株均为溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus），后1株为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida)。溶藻弧菌4个菌在形态、生理生化鉴定上虽有差别，但基本上是一致的。5－4－3恶臭假单胞菌与其它4株 差别较大。溶藻弧菌4菌株对卡那霉素等12种药物敏感，对青霉素G等7种药物有耐受性，恶臭假单胞菌对卡那霉素等8种药物敏感，对青霉素G等15种药物有耐受性。     

大通湖围栏放养鱼类指环虫感染抽查

2011年5月份,两次对湖南大通湖围栏放养鱼类(草鱼、鳙鱼和团头鲂)指环虫的感染情况进行抽样检查.结果表明:3种放养鱼类指环虫感染率均为100%,草鱼和鳙鱼的感染强度相对较低,为1～4;团头鲂的感染强度相对较高,为1～5,个别达7;草鱼寄生鲩指环虫Dactylogyrus ctenopharyngodonid,鳙鱼寄生鳙指环虫D.aristichthys和太湖指环虫D.taihuensis,团头鲂寄生斧茎指环虫D.petruschowskyi和北京指环虫D.pekinensis.团头鲂为斧茎指环虫的宿主新记录;太湖指环虫和北京指环虫在大通湖均为首次发现,可能是从其它地方引种带入.     

鲑点石斑鱼,大弹涂鱼在不同光照强度下网膜运动反应的比较

鲑点石斑鱼(■ )具网膜运动反应。引起鲑点石斑鱼视网膜黑色素颗粒明显迁移的照度阀值上限为10~(-1)1×,而视链细胞明显伸缩的照度阀值上限为10~(-2)l_x以上。大弹涂鱼(Boleophthalmus peetinirostris)视网膜在完全暗适应及不同照度(10~(-2)、10~(-1)、10~0、10~1、10~2、10~3lx)下明适应后,并不产生网膜运动反应,推测系通过瞳孔运动反应调节明暗视。     

浮游藻类群落结构动态与城市小水体水质的关系

比较了上海市徐汇区4个小水体3—5月浮游藻类群落结构和叶绿素a含量与水质的关系．康健公园内一条内河和上海师范大学内两个池塘种植水生高等植物和养殖鱼类，藻类数量少，叶绿素a含量低，修正的卡森营养状态指数TSIM(chl)处中营养状态，水质较好．桂林公园内一个池塘未种植水生高等植物和养殖鱼类，藻类数量多，叶绿素a含量高，修正的卡森营养状态指数TSIM(chl)处重营养状态，水质较差；并且4月由裸藻门的绿色裸藻(E．viridis)引起水华，水质恶化，处异常富营养状态．     

Identification and characterization of microsatellite markers for yellow grouper Epinephelus awoara and bluelined hind Cephalopholis formosa

0Introduction Groupershaveconsistentlyprovedhighlyvulnerable toanythingotherthanhighlevelsoffishingpressure.This islargelyduetotheirbiologicalcharacteristics.Yellow grouperEpinephelusawoaracanbeseeninHongKong livefishmarket[1].Manygrouperspeciesoncerecorded as“common”inHongKongarenowrarelyseen[2].Blue linedhindCephalopholisformosaisoftenmisidentifiedin thepetfishliteratureandsoldasC.boenakfromIndo westPacific.Cephalopholisispartofasub family(Epinephelinae)andfurthersub division(Tribe E…