Bt毒蛋白基因重组大肠杆菌的杀虫活性研究

本文对Bt毒蛋白基因(cry1Aa)重组大肠杆菌(ECE52)的发酵条件及杀虫活性进行了研究,结果表明该菌在37℃下培养或发酵8～12h较为合适.经超声波破碎的菌体对家蚕4龄幼虫有较强的毒性,用62.5×10-6g/mL的菌体稀释液处理过的桑叶饲喂4龄家蚕幼虫12h,96h内死亡率达100%.当浓度分别为125×10-6g/mL、250×10-6g/mL、500×10-6g/mL时,供试幼虫在72h,48h,24h内全部死亡.饲喂后24h,48h,72h的LC50值分别为0.101×10-3g/mL、0.045×10-3g/mL、0.028×10-3g/mL.     

瑞香狼毒活性成分对东亚飞蝗的生物活性和病理学研究

采用活体生物试验方法进行活性跟踪,选取瑞香狼毒对东亚飞蝗毒杀活性最高的石油醚萃取部分,测定瑞香狼毒活性成分对东亚飞蝗的生物活性及其中肠消化道的组织病理学影响.结果表明:瑞香狼毒活性成分对东亚飞蝗具有拒食、触杀、胃毒活性及生长发育抑制作用,其中拒食活性最为显著,24h、48h拒食中浓度(AFC50)分别为317.63、113.20mg/L;96h触杀致死中浓度(LC50)、胃毒致死中浓度(LC50)分别为548.21mg/L、2486.19mg/L;生长发育抑制作用也十分明显,48h生长发育抑制中浓度(EC50)为39.75mg/L.东亚飞蝗中肠组织病理学变化研究结果表明,瑞香狼毒萃取物可破坏东亚飞蝗中肠的正常组织结构,引起其中肠柱状上皮细胞脱落坏死.     

球孢白僵菌Bb051230菌株对番石榴实蝇的毒力测定

利用球孢白僵菌Bb051230菌株不同孢子液浓度对番石榴实蝇成虫、幼虫和蛹进行毒力测定,结果表明:在4.0×108个/mL浓度下第8天成虫的累计校正死亡率为(89.66±5.34)%,致死中时间(LT50)(4.53±0.31)d,第8天的致死中浓度(LC50)为(2.687 2±0.325 8)×105个/mL;4.0×108个/mL浓度下第8天幼虫的累计校正死亡率为(91.83±4.02)%,致死中时间(LT50)(4.66±0.59)d,第8天的致死中浓度(LC50)为(2.329 7±0.418 5)×105个/mL;4.0×108个/mL浓度下第8天蛹的累计校正死亡率为(83.79±2.27)%,致死中时间(LT50)(4.89±0.44)d,第8天的致死中浓度(LC50)为(2.829 1±0.156 3)×105个/mL.     

蜡样芽孢杆菌NJSZ-13菌株对松材线虫产卵和繁殖的影响

【目的】 已有研究表明蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)NJSZ-13菌株对于马尾松具有促生作用,且菌悬液的促生效果最佳。为了进一步解析和评价该菌对松材线虫的生防机理,在虫液和卵液中加入NJSZ-13菌株,研究该菌株对松材线虫的杀线效果以及对其产卵、卵孵化和繁殖量的影响。【方法】 首先通过离心将蜡样芽孢杆菌NJSZ-13菌株分成菌悬液、发酵液和发酵滤液,并调配成原液、5、10、100和1 000倍的稀释液,其中菌悬液和发酵液的原液浓度为3×10⁸ cfu/mL,以无菌水和NB培养基为对照。①用浸渍法测定NJSZ-13菌株在24 h和48 h对松材线虫的杀线效果。②挑取10对生长良好的雌雄4龄幼虫于1.5 mL离心管,用NJSZ-13菌株处理24 h后将虫卵从离心管冲洗到35 mm培养皿中,统计各处理的产卵量。③在35 mm小皿中加入1 mL无菌卵液(约含400个卵)和NJSZ-13菌株,统计12、24和36 h的孵化虫数。④将100 μL线虫液(含500条松材线虫)与100 μL NJSZ-13菌株混合接入60 mm培养皿的灰葡萄孢中,在25 ℃培养箱培养5 d,用贝尔曼法分离线虫并计数。【结果】 ①NJSZ-13菌株的发酵液和发酵滤液原液处理24 h后的杀线率即高达100%,而其菌悬液原液处理48 h后的杀线率仅为81.47%。②NJSZ-13菌株原液能极显著地抑制松材线虫产卵,随着稀释倍数的增大,这种抑制作用逐渐减小。③NJSZ-13菌株的10倍稀释液处理松材线虫卵,在12 h时极显著地抑制卵的孵化,在24 h时仍达到显著水平,在36 h时仅发酵液和发酵滤液有显著的抑制作用。100倍稀释液处理12 h时,发酵液和发酵滤液相对于对照有显著差异,其他处理时间点均无显著差异。④NJSZ-13菌株原液和5倍稀释液处理松材线虫,其繁殖力与对照组有显著差异(P<0.05)。10倍稀释液处理松材线虫时,菌悬液对线虫繁殖力无明显的影响,而发酵液和发酵滤液与对照有显著差异。【结论】 蜡样芽孢杆菌NJSZ-13菌株的菌悬液、发酵液、发酵滤液均对松材线虫有杀线作用。其中,发酵液和发酵滤液的杀线效果更显著;NJSZ-13菌株能抑制松材线虫的产卵、卵孵化和繁殖,同样发酵液和发酵滤液的抑制效果较菌悬液明显。     

瑞香狼毒对东亚飞蝗作用机理的初步研究

利用硅胶柱分离瑞香狼毒乙酸乙酯萃取物得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ段粗分物,并测定对东亚飞蝗毒杀活性最高的I段粗分物对东亚飞蝗的致死性及对其体内Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)/Mg~(2+)-ATPase、乙酰胆碱酯酶的抑制活性.研究表明:瑞香狼毒I段粗分物对东亚飞蝗具有较强的毒杀作用,在药物浓度为10mg/mL、72h对东亚飞蝗的校正死亡率为92.50%;同时,毒杀作用具有浓度和时间依赖性;而且瑞香狼毒乙酸乙酯萃取物I段粗分物对上述3种酶均有一定的抑制作用,且对Na~+-K~+-ATPase的抑制作用最强,在药物浓度为5mg/mL、96h对Na~+-K~+-ATPase的抑制率为40.38%;分析发现瑞香狼毒活性成分对东亚飞蝗的毒杀作用与对Na~+-K~+-ATPase的抑制作用之间具有显著相关性,据此推测,Na~+-K~+-ATPase可能是瑞香狼毒活性成分的主要作用靶标之一.     

一株绿僵菌的分离鉴定及对桃小食心虫的致病力研究

从山西临汾襄汾景毛乡果园罹病的桃小食心虫Carposina sasakii(Matsumura)(Lepidoptera:Carposini-dae)幼虫虫尸中分离纯化获得一株新菌株,命名为TSL06.通过对该菌株的培养性状、光学显微和扫描电镜下的形态特征观察,以及ITS基因序列分析,鉴定出TSL06菌株为绿僵菌属Metarhizium Sorokin的金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae(Metsch.)Sorokin.用该菌株的5种浓度孢子悬液对桃小食心虫幼虫进行毒力试验,结果表明,浓度为1.2×109孢子/mL的孢子悬液对桃小食心虫幼虫的校正致死率最高,达到86.08%.     

不同球孢白僵菌菌株对马尾松毛虫致病性评价

选择9个球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株对4龄马尾松毛虫Dendrolimus punctatus幼虫进行毒力测定.结果显示,菌株Bb1900对马尾松毛虫幼虫的校正死亡率达96.16％,侵染率达86.67％,在孢子浓度为1×107孢子/mL时的半致死中时仅为4.62 d,显示出对目标害虫的较强毒力,在马尾松毛虫的生物防治中将有重要的应用价值.     

不同菌株绿僵菌对粒肩天牛幼虫的致病力及林间防治效果

粒肩天牛是福建省杨树林的一种主要害虫,此次研究应用7株金龟子绿僵菌菌株对该天牛幼虫进行生物测定,旨在筛选出感染该虫的高致病力菌株,为生物防治提供新的资源。结果表明:感染Ma1291-2和Ma1775两个绿僵菌菌株14 d后,天牛幼虫的校正死亡率分别为89.47%和88.92%;Ma1291-2和Ma1775两个绿僵菌株对天牛幼虫的致死中时间(LT50)分别为5.62和5.82 d,孢子致死中浓度(LC50)分别为1.70×104个/mL和6.16×104个/mL。说明绿僵菌Ma1291-2和Ma1775两个菌株对该天牛幼虫的致病力强,不仅致死率高,且致死速度快,僵虫率高,应以浓度为1.5×108个/mL的孢子悬浮液进行林间防治,效果良好。     

15种吡唑啉类似物对AW1神经细胞毒力测定与活体生物活性比较研究

利用MTT法测定15种吡唑啉类似物对RP-HzVNC-AW1(AW1)细胞的毒力,采用浸渍法测定这些化合物对东亚飞蝗(Locusta migratoria)3龄幼虫的触杀作用,并对其关联性进行比较.结果表明:15种吡唑啉类似物均对AW1细胞有增殖抑制作用,对东亚飞蝗都有触杀作用.结果显示,两类化合物中,1-苯基-3-(2-呋喃基)-5-取代吡唑啉类化合物(Ⅱ类)细胞毒力测定与活体生物活性关联性要好于1-乙酰基-3-(2-呋喃基)-5-取代吡唑啉类化合物(Ⅰ类),其中的Ⅱ5、Ⅱ8、Ⅱ9三种化合物对细胞的抑制率与对东亚飞蝗的校正死亡率均高于50%,抑制率分别为76.82%、75.41%和65.87%,校正死亡率分别为53.84%、52.91%和53.55%,细胞毒力与活体检测关联性很大.     

丁香酚对赤拟谷盗的生物活性

采用点滴法、熏蒸法等生物测定的常规方法测定了丁香酚(Syzygium aromaticum)对世界性仓贮害虫赤拟谷盗(Tribolium castaneum (Herbst))的生物活性作用.结果表明,丁香酚能抑制赤拟谷盗的生长发育,不同发育时期的赤拟谷盗卵对丁香酚的敏感程度不同;在(31±1) ℃,相对湿度为50%～85%的环境条件下,发育72 h左右的赤拟谷盗卵对丁香酚最敏感,6 μL/mL丁香酚即能完全抑制卵的孵化;丁香酚对赤拟谷盗的幼虫和成虫均有显著的触杀作用,其对幼虫和成虫的致死中浓度(LC50)分别为218.999 9 μL/mL和363.077 4 μL/mL,表明幼虫对丁香酚比成虫对丁香酚更敏感;丁香酚对赤拟谷盗成虫具有明显的驱避作用,对幼虫和成虫也有一定的熏蒸致死作用,用2 μL/mL丁香酚处理赤拟谷盗成虫3 h,对赤拟谷盗成虫的驱避率可达到93.3%,即可达到最高驱避级别V级.     

Biological aspects on the cultures of the entomophthoralean fungus<Emphasis Type="Italic">Pandora delphacis</Emphasis> grown on broomcorn millets

Among entomopathogenic fungi the Entomophthor- ales plays an important role in natural control of insect pests through induction of epizootics in insect popula-tions[1—3]. Since most species of the fungal group are 4 - characteristic with their special capability of actively dis-charging conidia to favor infection and dissemination in host populations, they are ideal targets for epizootiologi-cal study, being considered as important microbial control agents. Currently, 66 species …     

防治菜青虫的杀虫植物筛选及活性的初步研究

测试了25种有毒植物的95％乙醇提取物对3龄菜青虫的毒杀活性。结果表明，瑞香狼毒、巴豆对菜青虫具有较好的防治效果。在此基础上，以正己烷、氯仿、乙酸乙酯为溶剂对狼毒、巴豆的无水乙醇提取液作分级萃取，所得萃取液的生物活性测试结果表明：巴豆及狼毒的正己烷萃取物对菜青虫有较强毒杀作用和拒食活性，当样品稀释倍数为50倍，其48h内校正死亡率分别为88．9％和66．7％，72h内校正死亡率则分别达到95．6％和91．1％，72h的平均拒食率则分别达到87．5％和83．3％。     

东亚飞蝗（Locusta migratoria manilensis）卵巢和胚胎组织的原代培养

用东亚飞蝗４～５龄蝗蝻卵巢组织及孵化１２ｄ的胚胎组织，首次在我们改良的ＴＣ－１９９－ＭＫ和ＴＣ－１００培养基中，２８℃恒温培养，第１０ｄ可见大量透明的梭形细胞从卵巢块周围逸出，第１６０ｄ可见大量圆球状的胚胎细胞分裂成团，来自两种组织的细胞分别培养９０ｄ和３３０ｄ，均贴壁生长，但胚胎细胞贴壁不牢。从培养结果看，它们发展成连续细胞系的潜力很大。     

5种中草药提取物对菇蝇的毒杀活性

采用药膜法,以清水为阴性对照,测定了5种中草药提取物对菇蝇的毒杀活性,结果显示:在供试的5个浓度下,百部和苦参对菇蝇的毒杀活性显著,在50 mg/mL质量浓度下,处理12 h后,百部、苦参对菇蝇的毒杀活性分别是85.00%和81.67%,处理24 h,均达到了100.00%.川楝子、龙胆草、透骨草次之.通过LC₅₀的测定,结果显示,百部、苦参24 h毒杀LC₅₀分别是13.790 mg/mL和18.668 mg/mL.田间防效试验表明:百部和苦参提取物对菇蝇具有良好的药效,用药3天的防效分别达到73.66%和71.27%,用药7天后维持在75.00 %左右,与清水对照相比防效显著.建议在生产中轮流使用50 mg/mL的百部提取物和75 mg/mL的苦参提取物,在菇蝇发生初期及时喷雾防治.     

巴东醉鱼草杀虫活性成分的初步分离及活性追踪

采用杀虫活性追踪和化学分离相结合的方法对巴东醉鱼草95%乙醇提取物的石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物进行活性成分分离,在5mg/mL的体积质量分数下,石油醚萃取物经一级柱层析所得馏分AG的活性最高,对3龄粘虫24h,48h和72h拒食率分别达58.44%,79.77%和71.52%,对5龄菜青虫24h和48h拒食率分别达89.03%和72.73%;乙酸乙酯萃取物经一级柱层析所得馏分BB对3龄粘虫24h,48h和72h拒食率分别达97.34%,100%和100%,对3龄小菜蛾24h和48h拒食率最高分别达97.33%和99.46%.实验结果表明,经过一级柱层析后,石油醚萃取物杀虫活性物质主要分布在AG段,乙酸乙酯萃取物杀虫活性物质主要分布在BA,BB和BC段.     

产纤溶酶菌株的发酵条件优化

筛选了1株产纤溶酶能力较强的芽孢杆菌,对其液体发酵条件进行了优化,结果表明菌株产酶最佳的各组分质量浓度为木糖20 g/L,大豆蛋白胨30 g/L,Na2HPO41 g/L,MgSO41 g/L,CaCl20.1 g/L,吐温40为2 g/L.种龄16 h,接种量3%,发酵周期3 d,起始pH为7.0,摇床转速200 r/min,发酵温度37℃,在此条件下发酵液纤溶酶活性(相当尿激酶活力单位)高达862.2 U/mL.     

正交设计法在白三叶组织培养中的应用

以白三叶的叶片为外植体,采用正交设计法,对愈伤组织生长和细胞悬浮培养的培养基进行了优化筛选。实验结果表明,白三叶叶片愈伤组织生长的最佳培养基配方为ＭＢ＋０．５ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ＋０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋２ｍｇ／Ｌ甘氨酸＋１００ｍｇ／Ｌ肌醇＋３％蔗糖＋０．７％琼脂;细胞悬浮培养的最佳培养基的配方为ＭＢ＋４ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ＋０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋２ｍｇ／     

植物源杀虫剂"查虫清"对5种害虫的生物活性及对3种天敌的毒性测定

报道一种由天然植物产物配制而成的植物源杀虫剂"查虫清"对5种害虫的生物活性及对2种蜘蛛和草蛉的毒性作用.结果显示:"查虫清"对菜蚜、小菜蛾,假眼小绿叶蝉和菜青虫主要表现为拒食作用,拒食中浓度(AFC<,50>)分别为12.03、15.05、55.07、35.37 mg/mL."查虫清"对茶尺蠖2龄幼虫主要表现为毒杀作用...     

The role of β18-β19 loop structure in insecticidal activity of Cry1Ac toxin from Bacillus thuringiensis

The β18-β19 loop in domain Ⅲ of Cry1Ac toxin is unique among Bacillus thuringlensis Cry proteins. In this study, the role of the loop structure in insecticidal activity of Cry1Ac toxin was investigated. Alanine scanning mutations within the loop were initially generated and most mutants were over-expressed and reduced toxicity at different degrees, except mutant N546A that showed almost 2 times enhanced toxicity against Helicoverpa armigera larvae. Further mutagenic analysis of N546 revealed that a charged amino acid in this position would cause very unfavorable influence on insecticidal activity. In addition, the deletion of N546 led to protein instability because of destruction of the loop integrity. Besides, mutant W544F was much more toxic than W544Y, indicating that hydrophobic nature of the position was important for maintaining the stability and activity of Cry1Ac protein. These findings are the first biological evidence for a structural function of β18-β19 loop in insecticidal activity of the Cry1Ac toxin.