Xenorhabdus nematophilus BP品系杀虫毒素基因的克隆与鉴别

构建了昆虫病原线虫共生菌Xenorhabdus nematophilus BP品系的粘粒文库并用生物测定的方法从中筛选到2个对棉铃虫初孵幼虫有口服抑杀作用的克隆cos83和cos76。为初步确定这两个克隆的毒素基因与已报道基因的差异程度，根据已发表的共生菌毒素基因序列资料设计了7对引物对这两个克隆进行PCR扩增并对扩增产物进行测序和分析。从毒力较强的cos83中，7对引物均扩增出与目标片段大小一致的产物，而从cos76中只有5对扩增到目标片段。测序结果显示，cos76的5个PCR扩增产物与cos83的对应扩增产物DAN序列同源性为100％。以cos83的7个PCR扩增产物所编码氨基酸序列进行BLAST分析，它们与X．nematophilus PMF1296和Photorhabdus luminencenc W14毒素相应区间的平均同源性分别为94％和58％，说明cos83毒素是共生菌口服毒素家族的一员但与同类的其它毒素有一定的差异，值得对其杀虫谱，作用机理等进行进一步的研究。     

人工培养条件下松格线虫提取物的毒性研究

将来源于黑松、马尾松的松材线虫分别用单异活体法和无异活体法人工培养后，以不同方法和不同溶剂对培养物进行提取，并用粗提浓缩液对３０ｄ以上生的黑松和马尾松幼苗做生物测定。结果表明，在人工培养条件下松材线虫无致萎毒素产生。     

人工培养条件下松材线虫提取物的毒性研究

<正>将来源于黑松、马尾松的松材线虫分别用单异活体法和无异活体法人工培养后,以不同方法和不同溶剂对培养物进行提取,并用粗提浓缩液对３０ｄ以上生的黑松和马尾松幼苗做生物测定。结果表明,在人工培养条件下松材线虫无致萎毒素产生     

上转换荧光-适配体免疫层析试纸条的构建及其在黄曲霉毒素B1检测上的应用

食品及农产品中,因真菌而产生的黄曲霉毒素B1是人们健康的一大威胁.因此,探寻一种简便快速检测黄曲霉毒素B1的方法对食品安全、农产品质量等方面具有重要意义.该文通过配体交换的方法,使用磷酸化的黄曲霉毒素B1适配体将油酸分子包裹的油溶性上转换纳米颗粒改性为水溶性纳米颗粒.在构建水溶性纳米荧光探针的同时,保留了适配体识别黄曲霉毒素B1的能力,结合免疫层析试纸条,采用小分子竞争法快速定量检测黄曲霉毒素B1.该检测方法的线性范围为5～100ng/mL,检测限为2.4ng/mL.将该方法用于花生中黄曲霉毒素B1的检测,其加标回收率为93.8%～111.6%.     

松针褐斑病菌毒素的专化性研究

用松针褐斑病菌毒素粗提液处理湿地松、火炬松、黑松和马尾松的切根苗,发现湿地松和火炬松对毒素最为敏感,其次为马尾松,黑松最不敏感。毒素生测的结果与松树在田间自然感染的情况有一定的相似性,但不完全一致。不同湿地松抗病无性系对毒素的反应存在着差别,其中３３ 号所受伤害较轻,１０ 号及３６ 号较重。结合毒素薄层层析半定量试验,利用寄主愈伤组织对毒素的反应,发现毒素对寄主愈伤组织的最低作用浓度应在１００ μｇ／ｍ Ｌ 以下。试验了５ 种杂草对毒素的反应,其中空心莲子草和稞草对毒素敏感。进一步研究利用毒素作为除草剂不失为毒素利用的一个新思路。上述研究表明该毒素为非寄主专化性毒素。     

肉毒毒素研究态势分析

基于Web of Knowledge文献数据平台核心合集(SCI)、TI和Innography,综合应用TDA、SPSS、Excel等软件进行分析,探索肉毒毒素研究领域的发展情况、研究趋势及动态前沿,以期为该领域的决策者制定相关发展策略提供数据支撑,为科研机构及所属人员提供参考。文献计量可视化分析结果显示,肉毒毒素研究主要分布在欧美国家,中国的主要研究力量是军事医学科学院等机构,肉毒毒素主要研究内容为方法检测、预防与应用、疫苗类型及作用机制机理。中国的肉毒毒素研究与国际先进水平尚存在一定差距,应加强基础理论研究以推动专利技术的发展,提高整体研究实力,为应对可能发生的生物恐怖事件提供必要的保障。     

酶联免疫吸附法检测雨生红球藻粉中微囊藻毒素含量

建立酶联免疫吸附法检测雨生红球藻粉中微囊藻毒素含量方法,并进行了方法学验证,标准曲线为y=-0.4004x+0.5217,R2=0.9995,检测范围0.1ng/mL—2ng/ml,平均加样回收率为95.2%,结果表明该方法快速、准确、可靠。运用该方法对10批20个样品进行了微囊藻毒素含量检测,结果表明雨生红球藻粉中微囊藻毒素含量远远低于食品限量要求,可以安全食用。     

高效液相色谱对玉米大斑病菌毒素的分离与制备

建立了以高效液相色谱分离制备玉米大斑病菌2号小种毒素的方法,研究了以Nova-PakC18分析柱、制备柱对检测波长、流动相、pH值对分离和制备的影响.结果表明5-羟甲基-2-呋喃甲醛的检测限为0.017 mg/L,其他组分的相对偏差为0.09%～1.9%.在0.005～0.10 g/L范围内,标准毒素的线性回归良好,相关系数和回收率分别为0.971 3和98.2%.该方法快速、准确且重现性好,适于毒素的分离制备.     

固相支撑液液萃取——气相色谱串联质谱法测定血液中的沙蚕毒素

建立了一种全新的血液中沙蚕毒素的固相支撑液液萃取—气相色谱串联质谱的分析方法.通过固相支撑液液萃取柱对样品进行分散及固定,用乙酸乙酯进行洗脱,然后运用气相色谱—三重四极杆串联质谱仪进行测定.该方法沙蚕毒素的检测限为0.12μg·L-1,平均回收率为95.3%,线性范围为出20~2 000μg·L-1.该方法具有简便、快速,准确、灵敏度高等特点,为检验血液中的沙蚕毒素物提供了新的分析方法.     

酵母菌对饲料中黄曲霉毒素B_1的降解和脱除作用研究

研究了含有活性酵母菌、酵母菌细胞壁及水合铝硅酸盐等酵母霉菌毒素降解剂对霉变饲料中黄曲霉毒素B_1的降解和脱除效果.结果表明:随着酵母霉菌毒素降解剂添加量的增加,对黄曲霉毒素B_1的体外吸附率逐渐升高,而且试验用鸡粪便中黄曲霉毒素B_1排出率也逐渐升高,当加入的毒素降解剂质量浓度为0.25 mg/m L时,对黄曲霉毒素B_1的体外吸附率效果最好,达到98.21%,黄曲霉毒素B_1的排出率达到86.07%.试验结果表明该毒素降解剂对霉变饲料中的黄曲霉毒素B_1脱除和降解效果显著,可有效预防动物食用霉变饲料中毒.     

松针褐斑病菌毒素活性的生物检测

松针褐斑病菌毒素不仅能伤害湿地松、火炬松等寄主植物的幼苗、针叶、根及愈伤组织，对非寄主植物水花生、紫茎泽兰的叶片也有伤害作用。在试验的几种生测材料中，湿地松愈伤组织对毒素伤害最敏感，湿地松幼苗、幼针叶，火炬松幼针叶和紫茎泽兰叶片次之，湿地松幼根、老针叶，火炬松老针叶，水花生和小麦叶片最不敏感。根据生测材料的敏感程度及表现症状的特异性分析可知，用湿地松、火炬松幼苗和幼针叶作生测材料较好，比较针刺法、浸渍法和涂抹法等几种生测方法表明，用针刺法接种毒素效果最好，其反应速度快，用量少，症状明显。因此建议在松针褐斑病菌毒素的生物检测中，以湿地松或火炬松幼苗或幼针叶作为材料，采用针刺法。     

转Bt棉不同生长期及不同器官杀虫蛋白表达量的免疫学方法测定

转苏云金杆菌(Bacillus thuringensis)杀虫蛋白基因棉花(下称Bt棉)在不同生长期及不同器官上对棉铃虫杀虫活性存在明显差异。目前国内普遍使用生物测试法检测Bt棉对棉铃虫的杀虫活性,但无法定量检测Bt棉中杀虫蛋白的表达量。本实验室建立的酶联免疫学测定方法(ELISA),可定量检测棉器官内杀虫蛋白的含量。它具有检测周期短,操作简便的优点。用ELISA方法检测Bt棉杀虫蛋白的含量,结果表明,棉叶和花瓣杀虫蛋白含量最高,铃和蕾次之。在棉株生长的后期,各器官杀虫蛋白的含量则有大幅度的下降。     

链格孢菌毒素的分离及活性测定

对链格孢菌（Alternaria alternata(Fr.)Keissler)产生的对紫茎泽兰（Eupatorium adenophorum Spreng.)有致病作用的毒素进行了分离纯化,并用生物法测定了该毒素的致病活性。     

松材线虫携带细菌的鉴定和毒性研究

从松材线虫病致死的松材木质部和松材线虫体表分离到3个出现频率较高的细菌菌株，菌株Nji、Njt和Njw。经鉴定3种细菌分别为荧光假单胞菌I型（Pseudomonas fluorescens biotype I)荧光假单胞菌Ⅱ型（Pseudomonas fluorescens biotype Ⅱ）和泛菌属某种（Pantoea sp.)。用牛肉膏蛋白胨液体培养基振荡培养细菌，培养液直接处理黑松愈伤组织，测定各细菌的产毒能力。与对照（空白培养液）相比，3种细菌的培养原液都可对黑松愈伤组织产生明显影响，其中菌株Nih和菌株Njt可以在2d内使愈伤组织明显变色，菌株Njw处理变色较慢。表明菌株Nij和Njt培养液内有大量致萎毒性物质存在。     

松针褐斑病菌毒素的层析分离及紫外吸收特性研究

以生测为导向，采用柱层析和薄层层析相结合，从松针褐斑病菌发酵液中分离出3个致毒活性组分m，p和q。经薄层层析检验可知m，q在A，C两个展开系统中R，值一致，分别为0．57和0．75，且m，q展开后在254nm和365nm紫外光下都呈蓝色荧光，基本认为m和q是同一组分；p在365nm紫外光下为黄白色荧光，在A、C两个展开系统中R，值分别为0．46和0．66。层析分离的结果表明，松针褐斑病菌可能含两个或两个以上的毒素物质。对m和p两组分进行紫外扫描的结果显示，m，p分别在波长210nm和208nm处有最大吸收峰，在365nm和254nm紫外光下无吸收或吸收很弱。高效液相分析显示：m，p都不是纯物质，在210nm检测波长下，m有3个吸收峰，保留时间分别为2．41，3．80和16．68min，p有4个吸收峰，保留时间分别为2．46，3．75，12．00和17．25min。研究结果表明组分m和p可能含有相同或相似的化学物质，要获得纯物质还需进一步分离。     

玉米大斑病菌HT-毒素特异性组分与原生质膜蛋白互作研究

以玉米叶片原生质为研究对象,以ANS(1-苯胺基-8-萘磺酸)作荧光探剂,用荧光标记法研究了毒素与质膜蛋白的互作.在被ANS标记后的原生质悬浮液中加入不同浓度HT-毒素后,ANS荧光强度明显增加,呈现出了剂量—效应关系,表明HT-毒素与质膜上ANS某些受体发生了互作.本实验采用2种试剂,从2个角度表明了ANS受体和质膜上存在的毒素受体具有蛋白特性.初步推测HT-毒素特异性组分的原初作用位点在质膜外侧.     

稻瘟病菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织诱导的影响及抗性筛选

利用稻瘟病不同生理小种菌株的液体培养提取的粗毒素对水稻成熟胚进行处理,粗毒素液对水稻胚芽的生长和胚的诱导有严重的抑制作用,与对照相比差异性极显著;不同浓度的粗毒素提取液其作用效果不同,随着毒素浓度的增大或是作用时间性的延长,水稻诱导受到的抑制作用越强。水稻成熟胚组织培养中进行抗稻瘟病菌突变体筛选的毒素浓度在30%较好;浸泡水稻成熟胚以处理72h愈伤诱导和分化效果较好;在进行抗稻瘟病突变体筛选中,以用含毒素的培养基进行诱导愈伤的处理的筛选取效果较好。     

稻瘟病菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织诱导的影响及抗性筛选

利用稻瘟病不同生理小种菌株的液体培养提取的粗毒素对水稻成熟胚进行处理,粗毒素液对水稻胚芽的生长和胚的诱导有严重的抑制作用,与对照相比差异性极显著;不同浓度的粗毒素提取液其作用效果不同,随着毒素浓度的增大或是作用时间性的延长,水稻诱导受到的抑制作用越强.水稻成熟胚组织培养中进行抗稻瘟病菌突变体筛选的毒素浓度在30%较好;浸泡水稻成熟胚以处理72h愈伤诱导和分化效果较好;在进行抗稻瘟病突变体筛选中,以用含毒素的培养基进行诱导愈伤的处理的筛选取效果较好.     

肉毒毒素肠溶微球灭鼠剂的制备及性质研究

以肉毒毒素作为主体灭鼠药物,用丙烯酸树脂Ⅱ号为肠溶材料,通过相分离法制备肠溶微球;考察了微球的形态特征、包封率、载体回收率、抗酸能力、体外溶出度以及包封蛋白的活性保留度,并经拌饵投食试验,表明该制剂能有效地提高毒蛋白在肠胃中的稳定性,使其毒力(LD50)提高100倍以上,并且有较强的缓释作用．