细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、CDK 4和pRb在宫颈鳞癌中的表达及意义

应用免疫组化方法检测100 例宫颈鳞状细胞癌及50 例非癌宫颈组织中Cyclin D1、CDK 4表达和pRb磷酸化状态,探讨了细胞周期调控相关蛋白CyclinD1、CDK4和pRb在宫颈鳞癌中表达及其意义.结果表明:Cyclin D1和CDK4在宫颈鳞癌组中阳性率分别为75%、87%,与非癌宫颈组相比,差异有统计学意义(P<0.05);pRb磷酸化在2组中差异有统计学意义(P<0.01).这提示Cyclin D1、CDK4 蛋白的高表达及pRb的高磷酸化可能与宫颈鳞癌的发生发展有关.     

人食管鳞癌及正常食管组织中Notch1基因的mRNA及蛋白的表达

采用RT-PCR方法,分别从人食管鳞癌及正常食管组织中扩增 Notch1基因,结果表明Notch1基因在人食管鳞癌及正常食管组织中均有表达.此外,通过免疫组织化学方法检测不同病理特征的35例食管鳞癌、16例原位癌及35例癌周正常食管粘膜上皮组织Notch1蛋白表达的变化,结果显示:Notch1蛋白在正常食管粘膜上皮组织和原位癌中的阳性率分别为82.9%、68.7%,二者无显著性差异(P＞0.05),但均显著高于食管鳞癌组织37.1%(P＜0.05),食管鳞癌Notch1蛋白的低表达与肿瘤的直径、分期和发生部位无关(P＞0.05),但与淋巴结转移有关(P＜0.05).这表明在正常食管粘膜上皮组织中Notch1蛋白高表达,而在食管癌鳞中Notch1蛋白呈现低表达或不表达.该研究为进一步探明Notch1基因的表达对食管癌细胞的发生、发展的影响奠定了良好的基础.     

原代培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响

目的探讨体外培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响。方法采取9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织和癌旁组织及C57/BL6J正常雄性小鼠的正常肝组织进行体外培养,苏木精-伊红染色法检测肝组织在12 d内的生长状态;考马斯亮蓝染色法检测组织中总体蛋白在48 h内的变化趋势;Western blot法检测48 h内培养组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平;RT-qPCR法检测48 h内培养组织中18s RNA、Cyclin D1、GAPDH、UQCRB的mRNA表达水平。结果体外培养6 d内,正常雄性小鼠肝组织、H-ras12V转基因雄性小鼠肝癌及癌旁组织的细胞形态变化相似,存活状态良好。体外培养6 d后,正常肝细胞和癌旁细胞逐渐减少,相比之下,肝癌细胞开始出现大量死亡,但出现少数克隆样细胞团。考马斯亮蓝染色检测结果显示,正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织的总体蛋白变化趋势相似,随培养时间的延长,在130~170 k D之间的蛋白条带丰度先升高再降低,40~130 k D之间的蛋白条带丰度逐渐增加。Western Blot检测结果显示,随着体外培养时间的延长,组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平呈逐渐下降趋势。RT-qPCR检测结果显示,Cyclin D1在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞和GAPDH在正常肝细胞、癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现逐级升高趋势;而GAPDH在肝癌细胞和UQCRB在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现先下降后又逐渐升高的趋势;18s RNA的mRNA表达水平在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中没有规律性趋势变化。结论成年小鼠肝组织及肝癌组织在体外培养期间,虽然肝细胞的形态学变化不明显,存活良好,但短时间内,众多基因在mRNA和蛋白的表达水平上发生了显著的变化,对实验结果将有较大的影响。     

p63在胃癌组织中的表达

目的:探讨抑癌基因p53蛋白家族成员p63蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达情况.方法:回顾性分析41例胃癌及37例癌旁组织,利用组织微阵列技术,构建88点组织阵列,并采用免疫组织化学技术S-P法检测该阵列中p63蛋白在胃癌及其癌旁组织中表达情况.结果:①p63蛋白定位于细胞核,呈弥漫分布的棕黄色颗粒;②胃癌组织中,p63蛋白表达于核大间变细胞中;p63蛋白在高分化型胃癌中阳性表达率为5.9%,在低分化型胃癌中的阳性表达率为41.7%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);③p63蛋白在胃癌癌旁组织中无表达,在胃癌中的阳性表达率为24.4%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:①p63蛋白的高表达可能参与了胃癌的发生;②p63与胃癌的分化程度有关,并可能参与了胃癌细胞的分化.     

p53、Rb、p16抑癌基因在胃粘膜上皮异型增生病变中表达的意义

目的：研究p53、Rb和P16 3个抑癌基因在正常胃粘膜→异型增生粘膜→胃癌发展过程中的表达状态及相互关系。方法：收集胃手术及胃镜活检标本共60例,镜下观察胃粘膜并选取不增生病灶、35例胃腺癌和32例正常胃粘膜中的表达情况。应用聚合酶链反应单链构象多态性分析技术（PCR-SSCP）对35例胃腺癌进行p16基因点突变检测。结果：p53阳性率在轻、中、重度异型增生病灶的分别为7.5%、35.1%、59.1%,胃癌组为68.6%,正常对照组中无表达。Rb蛋白阳性率在轻、中、重度异型增生病灶中分别为80.0%、89.3%、81.8%,胃癌组为57.1%,正常对照组为90.6%。p16蛋白在正常胃粘膜、异型增生粘膜和胃癌中普遍表达,3组间阳性率比较无显著性差异。p16基因PCR-SSCP分析示只有1例低分化腺癌出现异常单链泳动带。不同类型（隐窝型、腺瘤型、再生型）异型增生病灶组间、位于癌旁和良性病变旁的异型增生病组间p53、Rb和p16蛋白的阳性率无显著性差异。高-中分化、低分化、未分化胃癌组p53、Rb和p16蛋白的阳性率无显著性差异。结论：突变型p53蛋白的积聚在胃粘膜异型增生阶段已经开始,随着异型增生程度的加重逐渐增加,重度病变中p53表达率与胃癌组相似,提示p53基因突变是胃癌发生过程中的早期事件。Rb蛋白在癌变组中缺失率较异型增生显著,可能是胃癌发生过程中的较晚事件。推测在p53基因突变的基础上加以Rb蛋白的缺失最终导致胃粘膜上皮癌变。p16蛋白的表达在胃癌发生过程的3个阶段病变中无显著的变化,可能不起要作用。不同类型（隐窝型、腺瘤型、再生型）异型增生间、癌旁或良性病变旁的异型增生间,不同分化程度的胃腺癌组间这3种抑癌基因蛋白表达状态基本相同。     

应用多种单克隆抗体联合检测大肠癌的早期诊断探索

应用４种单克隆抗体、通过免疫组化Ｓ－Ｐ法，对大肠癌、大肠腺癌、癌旁粘膜和正常大肠粘膜进行标志．７２例大肠癌组织中阳性表达率分别为ＳＣ１２Ａ８７．５％；ＳＣ１６Ａ７６．３％；ＣＳＡ９１．６６％；ＣＥＡ９５．８％，与正常大肠粘膜阳性表达１３．３％比较，均有非常显著差异．２７例脉瘤组织中阳性表达率分别为ＳＣ１２Ａ５９．２５％；ＳＣ１６Ａ５９．２５％：ＣＳＡ７０．３７％；ＣＥＡ７０．３７％；和正常大肠粘膜比较有显著差异（Ｐ＜０．０５）；和大肠癌比较、除ＳＣ１６Ａ无显著差异（Ｐ＞０．０５）外，其它三种均有高度差异（Ｐ＜０．０１），对排除癌有一定意义．４９例癌旁粘膜阳性表达率分别为：ＳＣ１２Ａ５７．１％；ＳＣ１６Ａ４６．９％；ＣＳＡ６７．３％；ＣＥＡ５１％阳性细胞分布虽然主要在腺腔内缘．范围较局限．但这么高的抗原表达，支持了Ｆｉｌｉｐｅ等的“移行粘膜”学说     

P-gp在肝细胞肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨P-gp在肝细胞肝癌（HCC）中以及癌旁肝组织的表达意义。方法采用免疫组织化学S-P法,检测30例HCC中P-gp的表达情况,以30例相应癌旁肝组织作为对照组,所得结果用统计学卡方检验及列联表等级相关分析进行比较。结果P-gp蛋白在HCC、癌旁肝组织中阳性表达率分别为83．3％（25／30）、30％（9／30）;HCC与癌旁肝组织表达差异有显著性（P〈0．05）。结论P-gp参与介导HCC多药耐药。     

食管鳞状细胞癌中VEGF和nm23表达和临床意义

 探讨VEGF和nm23基因产物表达与食管鳞状细胞癌（ESCC）临床病理指标及预后的关系,应用免疫组织化学Elivision法对食管癌组织和癌旁正常食管粘膜组织中VEGF蛋白和nm23蛋白进行检测。结果表明,90例食管癌组织中VEGF蛋白56例高表达,19例低表达,15例不表达,阳性率为83.33%,在28例正常黏膜组织中6例低表达,阳性率为21.42%,两者比较具有统计学意义（P<0.05）;90例食管癌组织中nm23蛋白24例高表达,23例低表达,43例不表达,阳性率为52.22%,在28例正常食管黏膜组织中23例表达,5例不表达,阳性率为82.14%,两者比较具有统计学意义（P<0.05）。无食管癌旁淋巴结转移组的nm23阳性表达率64%（32/50）较有转移组的表达率37.5%（15/40）高,有显著性差异（P<0.05）。VEGF和nm23的表达与分化程度、浸润深度无关（P>0.05）。由此表明,VEGF阳性伴nm23阴性表达的患者发生淋巴结转移的可能性大,VEGF和nm23在食管癌中的表达与食管癌的发生、发展、浸润、转移和预后密切相关,可作为临床预测浸润转移和估计预后的重要参考指标。     

应用组织芯片技术分析53BP1在结肠癌中的表达及意义

为了探究p53结合蛋白1(53BP1)与结肠癌发生发展的关系,制备了53BP1多克隆抗体,经蛋白免疫共沉淀(IP)、免疫印迹杂交(WB)、免疫荧光染色(IF)和免疫组织化学染色实验(IHC)验证了抗体的特异性.应用临床结肠癌组织标本,通过免疫组织化学染色实验检测,结合临床病例研究53BP1在结肠癌发生发展中所起的作用.经过比对发现31例结肠癌病患的癌组织与癌旁组织中53BP1的表达存在差异,结合ONCOMINE数据库检索结果,发现53BP1蛋白分子在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织,这种表达差异与肿瘤大小和TNM分期显著相关.在直径大于等于4 cm的肿瘤中,癌组织的53BP1蛋白表达显著高于癌旁组织(P 0.05);在结肠癌早期(Ⅰ-Ⅱ期),癌组织的53BP1表达比例高于其他分期(P 0.05).这些研究结果表明,53BP1蛋白高表达可作为结肠癌早期(Ⅰ-Ⅱ期)的潜在标志.     

甲状腺癌组织端粒酶激活与p16基因失活的关系

目的探讨甲状腺癌细胞增殖、分化与端粒酶激活及抑癌基因p16失活（缺失突变）之间可能存在的关系。方法应用TRAP、多重PCR、免疫组化法检测42例甲状腺癌与16例癌旁组织端粒酶活性、P16基因外显子2缺失、P16蛋白表达。结果甲状腺癌组端粒酶活性90．48％,高于癌旁组织（P〈0．01）;甲状腺癌p16基因外显子2纯合缺失率28．57％,相应癌旁组未检出（P〈0．01）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率40．48％,高于癌旁组（P〈0．05）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率高于p16基因外显子2缺失率。结论端粒酶激活与p16基因失活以及P16蛋白表达下调可能是甲状腺癌变过程中的重要分子事件,甲状腺癌中p16基因失活可能是端粒酶激活的一种途径。     

抑癌基因ING1在鼻咽癌中的表达及突变分析

本研究运用免疫组化技术、逆转录 - PCR( RT- PCR) ,PCR- SS-CP技术对鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞系中 ING1的表达和突变进行检测 .结果发现 3 0例鼻咽癌标本中 ING1蛋白表达下调率为 70 % ( 2 1/ 3 0 ) ;ING1m RNA表达明显下调率为 4 6% ( 12 / 2 6) ,6例鼻咽癌细胞系中有 2例鼻咽癌细胞系表达明显下调 ,而 11例 ( 4 2 .5 % ) NPC组织及其它 4例细胞系表达与正常水平相当 ,另有 3例 ( 11.5 % )鼻咽癌组织过表达 ;单链构像多态性分析 ( SSCP)在鼻咽癌及鼻咽癌细胞系中均未发现突变 .结果表明ING1基因的转录及翻译表达水平与鼻咽癌的发生 /发展呈负相关 ,该基因的异常表达是鼻咽癌发生中的频发事件而与基因突变无关     

P53和P21WAF1/CIP1蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中的表达及意义

采用免疫组化方法检测80例维族宫颈癌组织和34例维族正常宫颈组织中P53和P21^WAF1/CIP1蛋白表达情况,探讨P53和P21^WAF1/CIP1蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中发生、发展中的作用以及相互关系.结果显示：宫颈癌组织中P53蛋白的阳性表达率为62.5%,明显高于正常对照组8.8%（P＜0.05）;P21^WAF1/CIP1蛋白阳性表达率96.25%,明显高于正常对照组38.23%（P=0.000）.说明 P53和P21^WAF1/CIP1蛋白的高表达与宫颈癌的发生、发展有关.     

口腔鳞状细胞癌中错配修复基因hMLH1、hMSH2、p53和PCNA表达的相关性及意义

探讨hMLHI、hMSH2、p53和PCNA在OSCC中的表达关系及可能存在的临床意义。运用免疫组织化学S—P法对56例口腔鳞状细胞癌巾hMLH1、hMSH2、μ53和PCNA的表达进行检测。4种基因产物在OSCC中的阳性率均高于正常口腔黏膜,其中,中一低分化癌中的阳性率均高于高分化癌;hMSH2、p53和PCNA的阳性率在有淋巴结转移者中高于无转移者。hMLHI与p53／PCNA表达,hMSH2与p53／PCNA,p53与PCNA表达均呈正相关性。hM—LH1、hMSH2、p53和PCNA的异常表达及其相互之间的调节可能与OSCC的发生发展有关;检测4种蛋白有助于判断OSCC的恶性程度和生物学行为．     

鼻咽癌细胞凋亡与血管生成的关系

摘要：为了探讨鼻咽癌（NPC）细胞凋亡及瘤内血管生成与患者预后的关系,采用TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）和免疫组化S-P法,分别检测20例正常鼻咽粘膜组织及73例NPC组织的细胞凋亡率（Apoptosis Rate AR）、瘤内微血管密度（MVD）及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。其中,NPC复发转移组24例,未复发组49例。结果表明,正常鼻咽粘膜AR显著高于NPC（P〈0．01）,NPC复发转移组的MVD及VEGF显著高于未复发组（P〈0．05）,而AR则显著低于未复发组（P〈0．05）,MVD与VEGF、MVD与AR呈正相关（P〈0.05）。在NPC发展过程中,细胞凋亡明显受到抑制,VEGF是血管生成的重要因子,并通过促进血管生成影响患者的预后,说明细胞凋亡与NPC患者的预后有关系。     

TGF-β1在口腔扁平苔藓及鳞癌中的表达

目的:探讨TGF-β1在口腔扁平苔藓、鳞癌发病中的作用及口腔扁平苔藓的癌变机制。方法:应用免疫组化法,检测TGF-β1在口腔扁平苔藓、口腔鳞癌中的表达,并用半定量评估法定量,采用SPSS13.0统计软件对数据进行等级资料的非参数检验。结果:30例口腔扁平苔藓主要呈弱阳性表达,固有层淋巴细胞呈散在阳性;30例口腔鳞癌中13例呈阴性表达,其余多呈弱阳性,二者均与正常口腔黏膜强阳性相比表达明显下调(P<0.05)。但部分口腔癌呈强阳性表达,主要分布在癌的纤维间质中。结论:TGF-β1表达下调激活淋巴细胞导致口腔黏膜局部免疫功能紊乱是引起扁平苔藓发病的重要因素。TGF-β1表达的量和分布的变化促进口腔鳞癌的生长与侵袭,且与口腔扁平苔藓癌变有关。     

人类白细胞抗原HLA—DP，DQ，DR在新疆哈萨克族食管癌中的表达及意义

探讨人类白细胞抗原（HLA—DP,DQ,DR）在新疆哈萨克族食管鳞癌发生发展中的表达及其临床意义。采用免疫组织化学技术链霉素-过氧化物酶（S-P）法检测66例新疆哈萨克族食管鳞癌和28例正常食管粘膜组织（癌旁正常组织）中HLA—DP,DQ,DR抗原的表达。新疆哈族食管鳞癌组织中HLA—DP,DQ,DR抗原的阳性表达率为36．4％,高于正常对照组的7．1％（χ^2=8．389,P〈0．05）;HLA—DP,DQ,DR抗原在食管癌中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤生长部位、淋巴转移、分化程度无相关性。HLA—DP,DQ,DR的表达与新疆哈族食管鳞癌的发生发展密切相关。     

Survivin基因在胃癌组织中的表达及其与凋亡的相关性研究

目的研究胃癌组织中Survivin基因的表达及其与凋亡的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测30例正常胃粘膜及120例胃癌组织中Survivin基因的表达;采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术,检测其凋亡指数。结果30例正常胃粘膜组织Survivin基因均不表达,胃癌组织中Survivin阳性率为62．5％（75／120）,二者有显著性差异（P〈0．01）;Survivin基因表达与组织分化程度和TNM分期密切相关（P〈0．05）。胃癌组织凋亡指数（AI）和TNM分期、组织分化程度密切相关（P〈0．05）。Survivin基因表达水平与凋亡指数呈显著负相关（P〈0．01）。结论Survivin基因在胃癌的发生发展过程中可能起重要作用。Survivin基因的表达可抑制胃癌细胞凋亡、促进胃癌细胞增殖。     

Morphological transformation of human keratinocytes expressing the LMP gene of Epstein-Barr virus.

The association of Epstein-Barr virus (EBV) with nasopharyngeal carcinoma (NPC) has been known for some time, but the precise role of EBV in this cancer is poorly understood, due partly to the lack of an in vitro system for studying NPC cells and the effect of EBV on epithelial cells. Biopsies of NPC tumours have revealed expression of the EBV latent membrane protein (LMP) in 65% of cases, suggesting that in at least some NPC tumours LMP may contribute to cell transformation. Here we address the question of the effect of LMP expression on epithelial cells. Transfection of an immortalized, non-tumorigenic keratinocyte cell line (RHEK-1) with the LMP gene causes a striking morphological transformation: the originally flat, polygonal colonies change to bundles of spindle-shaped cells that form multilayer foci, and cytokeratin expression is down-regulated. Our results suggest that LMP expression may be an important causal factor in the development of NPC.     

Comprehensive diagnostic value of P53, p21WAF1 and proliferating cell nuclear antigen for lung cancer

The expression of P53, p21WAF1 and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was detected in 114 samples of lung cancer patients (with 89 cases benign lung tissue as control) and the diagnostic value of these markers was evaluated. The results show the following: ➀ The positive expression rates of P53, p21WAF1 and PCNA in samples of lung cancer were 47.37%, 75.44% and 80.70%, respectively, which were significantly higher than that in the samples of benign lung diseases ( p < 0.001). The odds ratios were 39.15, 5.75, and 6.76, respectively. This indicates that the expression of P53, p21WAF1 and PCNA was helpful for the diagnosis of lung cancer. ➁ For the diagnosis of lung cancer, the positive likelihood ratio of P53 was 21.08, which were significantly higher than that of p21WAF1 (2.16), PCNA (2.11) and of all the combined tests. This shows that P53 expression was the most valuable for diagnosis of lung cancer. ➂ For the diagnosis of lung cancer, the negative likelihood ratio of P53/p21WAF1/PCNA parallel test was 0.057 1, which was lower than that of other single and combined tests. This indicates that P53/p21WAF1/PCNA parallel test has high diagnostic value for exclusion of lung cancer.