糖尿病患者餐后高血糖与谷氨酸脱羧酶抗体、β2-微球蛋白和HbA1c的测定

目的 探讨糖化血红蛋白与慢性并发症的关系.方法 将50例Ⅱ型糖尿病患者根据HbA1c分为观察组和对照组,并测定餐后血糖HbA1c,β2-微球蛋白和谷氨酸脱羧酶抗体.结果 HbA1c及餐后血糖偏高组β2-MG高于对照组.结论 Ⅱ-DM肾病发病机制很多,长期高血糖是最重要的因素.HbA1c是血红蛋白非酶促糖基化的早期产物,与血糖升高有关,不仅是高血糖变化的判断指标,可能也参与了微血管的损伤过程,谷氨酸脱羧酶抗体是胰腺β细胞功能损伤的一个预测指标,结合HbA1c测定有助于对糖尿病的诊断与疗效监测.     

人类巨细胞病毒感染致1型糖尿病机制的初步探讨

目的通过对1型糖尿病患者的HCMV感染标志物、空腹血糖、空腹C肽、胰岛素自身抗体及抗胰岛细胞抗体的研究,初步探讨HCMV致1型糖尿病的机制。方法检测1型糖尿病患者的HCMV感染标志物（包括HCMV—IgG及其相对含量、HCMV—IgM及HCMV—pp65）、空腹血糖、C肽、抗胰岛素自身抗体及抗胰岛细胞抗体并进行统计学分析。结果HCMV感染与1型糖尿病患者抗胰岛素自身抗体之间无明显相关性,但与1型糖尿病患者空腹血糖、空腹C肽、抗胰岛细胞抗体存在明显的相关性,HCMV—pp65阳性的1型糖尿病患者中其空腹血糖明显高于该指标阴性者;抗HCMV—IgG阳性的1型糖尿病患者空腹血糖水平、抗胰岛细胞抗体均显著高于抗HCMV—IgG阴性者,而空腹C肽水平则明显低于抗HCMV—IgG阴性者,且抗HCMV—IgG抗体指数在4．1以上者,其抗胰岛细胞抗体阳性率显著高于抗HCMV—IgG抗体指数在4．0以下者。结论HCMV感染可能通过直接损伤胰岛免疫病理反应损伤胰岛细胞最终导致1型糖尿病的发生。     

老年T2DM患者胰岛自身免疫抗体的临床价值

目的探讨老年2型糖尿病(T2DM)患者胰岛自身免疫抗体与糖化血红蛋白(HbAlc)和C肽(C-P)水平变化的临床意义。方法选择2017年6月-2018年6月间在该院内分泌科住院已经确诊的老年T2DM患者231例,根据抗体检测结果将患者分为胰岛自身免疫抗体阳性组(n=36)和阴性组(n=195),分别检测两组的HbAlc、空腹C肽(FCP)、餐后2h C肽(2HCP)水平,并对检测结果进行统计学处理。结果 231例老年T2DM患者检出至少有一种抗体阳性者共36例,阳性率为15.58%,检出其中两种抗体均阳性者共5例,阳性率为2.16%,未检出3种抗体均为阳性的患者。胰岛自身免疫抗体阳性组HbAlc水平与阴性组比较,差异无统计学意义(P0.05);阳性组C肽水平较低,与阴性组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论部分老年T2DM患者出现GADA、ICA阳性,其胰岛功能衰退更明显;监测老年T2DM患者胰岛自身免疫抗体与胰岛功能的变化情况,对老人T2DM患者的血糖控制和减少并发症具有重要的临床意义。     

不同糖耐量人群尿C肽肌酐比值与胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗的关系研究

目的探讨不同糖耐量人群尿C肽肌酐比值与胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗的关系.方法选取内分泌科就诊患者,根据75 g葡萄糖耐量检查结果分为正常糖耐量组72例,糖调节受损组54例,Ⅱ型糖尿病组94例.行静脉葡萄糖耐量实验,检测0~10 min胰岛素水平,计算急性胰岛素反应(AIR3-5)、0~10 min胰岛素曲线下面积(AUC)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β);留取受试者清晨空腹第1次、第2次尿液样和24 h尿样本,酶法检测尿肌酐值,化学发光法检测C肽水平,计算C肽肌酐比值.结果糖调节受损组、Ⅱ型糖尿病组空腹血糖、餐后2 h血糖、空腹胰岛素、餐后2 h胰岛素、糖化血红蛋白、HOMA-IR均明显高于正常糖耐量组,差异具有统计学意义(P0.05);而肾小球滤过率在3组间差异无统计学意义(P0.05).糖调节受损组、Ⅱ型糖尿病组AIR3-5、AUC、HOMA-β、第1次尿C肽肌酐比值、第2次尿C肽肌酐比值、24 h尿C肽明显高于正常糖耐量组,差异具有统计学意义(P0.05).第1次和第2次尿C肽/尿肌酐比值与AIR3-5,AUC,HOMA-β呈负相关,与HOMA-IR呈正相关,其中以第2次C肽尿肌酐比值相关性最佳.结论尿C肽肌酐比值在Ⅱ型糖尿病及糖调节受损个体中明显升高,且与胰岛β细胞第一时相分泌功能、胰岛素抵抗有直接相关性.     

乳腺癌血清中MMP-7自身抗体的检测

目的运用ELISA技术测定乳腺癌血清中MMP-7自身抗体,从而推测血清中MMP-7自身抗体对乳腺癌的诊断价值。方法建立最佳优化条件,用间接ELISA检测39例正常人血清、43例乳腺癌患者血清中MMP-7自身抗体的存在情况,进而对检测方法的诊断价值进行评估。结果乳腺癌患者血清MMP-7自身抗体水平明显高于正常人,P〈0.01;ROC曲线分析表明,当选OD450值=1.344为cutoff值时,MMP-7自身抗体用于诊断乳腺癌的敏感性为76.7%,特异性为82.1%。     

慢性心衰大鼠下丘脑室旁核谷氨酸脱羧酶对交感神经活动的影响

本文证实慢性心衰大鼠下丘脑室旁核(PVN)谷氨酸脱羧酶对交感神经活动的影响.冠脉结扎法诱导大鼠慢性心衰,在PVN微量注射谷氨酸脱羧酶抑制剂烯丙基甘氨酸,观察动脉血压、心率和肾交感神经活动的变化,结果显示假手术组和心衰组大鼠心率、血压和肾交感神经放电均有升高(P＜0.05),但心衰组升高幅度与假手术组相比显著减小(P＜0.05).Westemblot实验法观察PVN内谷氨酸脱羧酶蛋白表达量变化,结果显示与假手术组比,心衰组大鼠PVN内谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达下调(P＜0.05),但谷氨酸脱羧酶65 (GAD65)表达无明显变化(P＞0.05).结果提示心衰大鼠PVN的谷氨酸脱羧酶变化对交感神经的作用发生钝化,其机制可能与PVN内谷氨酸脱羧酶67表达量下调有关.     

新生儿溶血病血清学检查分析

通过对我院临床确诊的34例新生儿溶血病血清学检查回顾,对血清学诊断方法进行分析评价。确诊为高胆红质血症,新生儿溶血病患儿进行血型鉴定、直接抗球蛋白试验(DAT)、血清游离抗体测定试验、新生儿红细胞抗体释放试验检测。结果显示34例ABOHDN患儿中新生儿红细胞直抗试验阳性率85.29%,血清游离抗体试验76.47%,新生儿红细胞抗体释放试验100%。说明新生儿红细胞抗体释放试验是鉴定新生儿溶血病最敏感的一项试验。     

谷氨酸酶电极的研制

将产生谷氨酸脱羧酶(GDC)的大肠杆菌菌株(E,Coli.,AS.505),在37℃培养,所得细胞经抽提得到GDC粗品,将它固定于海藻酸钠上,配合CO_2选择性电极,制得谷氨酸酶电极。它具有下列特性:(1)电极对谷氨酸的线性响应浓度范围是1.0×10~(-3)—0.5tmol/L(8.3—6300mg)谷氨酸/L;(2)电极动态响应时间1分钟,即可达约90%响应值,静态响应时间约10分钟;(3)电极连续测定六十次以上仍有响应;(4)除L-赖氨酸及L-谷氨酰胺外,其余氨基酸均不干扰电极对谷氨酸的测定;(5)电极具较高的重演性。     

OSAHS合并T2DM与血浆UⅡ及Ghrelin的相关性

目的:探索尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)、生长素释放肽(Ghrelin)在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)合并2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者发病和疾病进展中的病理生理作用及相关可能性机制.检测OSAHS与T2DM的独立相关性.方法:选取健康人、单纯OSAHS患者、单纯T2DM患者和T2DM合并轻中度OSAHS患者各20人测定受试者的身高、体质量、空腹血糖水平、平均血氧饱和度、呼吸暂停低通指数(AHI)水平.采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血浆中UⅡ、Ghrelin水平.结果:试验组单纯OSAHS患者、单纯T2DM患者、T2DM合并轻中度OSAHS患者血浆UⅡ的水平分别为(233.31±46.02)、(217.88±41.57)、(233.86±49.02)ng/mL;对照组为(203.53±35.50)ng/mL,组间比较差异有统计学意义(P0.05).试验组单纯OSAHS患者、单纯T2DM患者、T2DM合并轻中度OSAHS患者血浆Ghrelin的水平分别为(34.99±8.02)、(35.50±5.81)、(36.35±5.16)ng/mL;对照组为(33.91±8.28)ng/mL,组间比较有统计学意义(P0.05).结论:单纯T2DM、单纯OSAHS患者皆有UⅡ和Ghrelin的升高,而OSAHS合并T2DM患者UⅡ、Ghrelin的水平更高.UⅡ、Ghrelin的增高可能是OSAHS和T2DM患者疾病发生、发展的重要因素.     

工程菌产酶制备GABA测定条件的优化

基于Berthelot显色反应,采用正交设计法优化了测定大肠杆菌工程菌谷氨酸脱羧酶转化L-谷氨酸生成γ-氨基丁酸含量的条件.实验确定的最佳测定条件为:2.0mL 0.2mol/L pH6.0的醋酸缓冲液(内含0.1mmol/L的PLP,0.2mol/L的L-谷氨酸,稀释70倍),再依次加0.2mmol/L的硼酸缓冲液(pH9.0)1.0mL,0.5mL 6.0%重蒸苯酚和5.0mL 10%次氯酸钠,沸水浴加热10min后,迅速冰浴20min,待溶液出现蓝绿色后,加入60%(v/v)乙醇溶液4.0mL在640nm测定吸光值,绘制出标准曲线来计算GABA的含量.结果表明,该方法简便实用,相对误差小,适合实验室样品的快速检测.     

HMG＿（14）单克隆抗体杂交瘤株的建立

以北京鸭红细胞提取的ＨＭＧｓ（ＨＭＧ＿１，ＨＭＧ＿（２ａ），ＨＭＧ＿（２ｂ），ＨＭＧ＿（１４），ＨＭＧ＿（１７））免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其脏压细胞与Ｓｐ２／０（小鼠骨髓瘤细胞）融合，经选择培养，阳性筛选，克隆化以及冻存复苏，获得了三株稳定分泌抗ＨＭＧ＿（１４）的杂交瘤细胞株（１Ｃ＿（１２），１Ｏ＿３和２Ｆ＿２），经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定，与其它几种ＨＭＧ无反应，抗体为ＩｇＧ＿１亚型。腹水ＨＭＧ＿（１４）单克隆抗体经ＳｅｐｈａｄａｘＣＬ－４Ｂ亲和柱得到了纯化。     

抗爪蟾角蛋白单克隆抗体的研究

本实验以非洲爪蟾(Xenopus laevis)成体皮肤角蛋白免疫的BALB/c鼠脾细胞与小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG的作用下进行融合,经HAT选择培养、ELISA筛选、反复克隆化及冻存复苏,获得四株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。对其中一株杂交瘤细胞KD_(10)及其分泌的抗体进行了较全面的研究。     

欧洲鳗鲡抗体生成规律的初步研究

用山羊IgG注射欧洲鳗鲡背部肌肉后,采用山羊IgG-琼脂糖亲和层析柱对欧鳗血清免疫球蛋白（IgM）进行分离纯化,并通过SDS-PAGE电泳对纯化后的IgM进行检测,同时制备兔抗欧鳗IgM血清,运用间接ELISA检测正常欧鳗血清（第0天）以及山羊IgG注射欧鳗后第7、14、21、28、35、42天的血清抗体水平,同时利用荧光定量PCR测定了第0天至第28天的欧鳗肾脏、脾脏和鳃中IgM基因表达水平变化.结果表明：纯化后的欧鳗IgM经SDS-PAGE检测含有一条分子质量约68 ku的重链,以及分子质量分别为26 ku和28 ku的两条轻链,获得的兔抗欧鳗IgM血清效价达1/51 200;欧鳗血清抗体水平在第28天达到峰值,脾脏IgM基因表达水平在第14天达到峰值,肾脏和鳃均在第21天达到峰值,血清抗体水平以及三种组织器官IgM基因表达水平的变化规律均为先升高、达到峰值后再降低.     

德国小蠊Bla g 2的原核表达及其多克隆抗体的制备

利用RT-PCR技术扩增德国小蠊Blag2基因,将其克隆进pET-41b载体.在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Blag2蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,得到相对分子量约74kDa的融合蛋白.通过亲和层析法纯化表达的GST-Blag2蛋白,并以此表达产物制成油乳剂疫苗免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体.间接ELISA法测得抗体效价达到1∶300000.Western印迹表明抗体有较高的特异性,可分别与GST-Blag2融合蛋白和德国小蠊变应原浸提液反应.Blag2在大肠杆菌中的成功表达及其多克隆抗体的制备,为德国小蠊过敏患者的诊断和治疗提供了帮助.     

工程菌表达马铃薯钙调素(PCM 6)的抗体制备及鉴定

PCM6是马铃薯钙调素亚型中与其他植物钙调素在氨基酸序列上最为保守的一种，利用大肠杆菌表达系统，表达并纯化了这种蛋白，以纯化的重组马铃薯CaM(PCM6）蛋白为抗原，免疫新西兰兔，获得了高效价（1：16000）抗体，免疫印迹检测表明，制备的抗体与植物钙调素有特异性的免疫交叉反应。     

鲤鱼肌肉Ⅴ型胶原蛋白的分离纯化及其抗体制备

通过酸溶、胃蛋白酶酶解和氯化钠盐析等方法,从鲤鱼肌肉中纯化得到了V型胶原蛋白.SDS-PAGE电泳图谱分析发现,其至少由2条α链(α_1和α_2)组成,其中α1分子质量约为135 ku,α_2分子质量约为120 ku.通过圆二色光谱仪分析其二级结构,发现其具有胶原蛋白三股螺旋结构的典型特征,其热变性温度为30.5℃.将V型胶原蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,成功制备了多克隆抗体.采用免疫印迹法对该多克隆抗体的特异性进行分析,证明其仅与鱼类V型胶原蛋白产生反应,特异性良好.