拟南芥叶肉细胞原生质体分离及影响因素

通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶肉细胞原生质体分离条件的研究,探讨了酶解法制备拟南芥叶肉细胞原生质体的分离条件和影响因素.在不同纤维素酶质量浓度、山梨醇质量浓度、酶解液pH值、酶解时间下,测定了拟南芥叶肉细胞原生质体的产量.结果表明,在20 g/L纤维素酶、140 g/L山梨醇、pH=5.8的酶解液中,酶解时间为1.5 h,原生质体产量最高.同时,在相同分离条件下测定了拟南芥幼叶和老叶的原生质体产量,结果表明,幼叶原生质体产量显著高于老叶.     

植物原生质体培养与遗传操作

一、植物原生质体培养和细胞融合的一些进展 1960年,E.C.Cocking用酶法从高等植物细胞中分离得原生质体,为高效地从高等植物中分离原生质体打开了局面。迄今已能从几乎所有的植物薄壁细胞中分离得生活的原生质体,并对种类日渐增多的植物原生质体进行培养。据不完全统计,迄今世上已能使近百种植物由原生质体培养成植株。在我国,除早年已由胡萝卜、菸草和矮牵牛等原生质体再生植株外,近年对园艺、药用、经济植物和禾谷类植物的十个科约24种植物,用原生质体培养物再生了植     

植物原生质体分离和培养中几个问题的探讨

以植物根、茎、叶、叶柄作为原生质体的分离材料，经过分离收集在一定条件下才能培养获得完整的原生质体，原生质体培养基的渗透压应与酶液的渗透压相等．     

禾谷镰孢菌原生质体的制备和再生研究

为建立禾谷镰孢菌（Fusarium gromineanum Schwabe）转化体系，选用禾谷镰孢菌株F128为受体，分别用裂解酶、蜗牛酶、崩溃酶、纤维素酶、几丁质酶消化该菌细胞壁，都可获得一定数量的原生质体。其中产生原生质体效率最高的是崩溃酶，而且以5g／L浓度产生的原生质体数量最多，消化3．5－4．5h即可获得相当数量的原生质体，菌量的加入以每毫升酶解液中加入20mg湿菌性产生的原生质体最多。所制备出的原生质体的再生方式至少有2种。     

烟草原生质体的制备和分析

植物原生质体作为一个良好的实验系统,广泛应用于植物分子及细胞学研究中.本研究以烟草NC89叶片为材料,采用酶解法制备烟草原生质体,经台盼蓝染色鉴定活性,结果显示,分离纯化后的原生质体产量为(12.7±1.6)×106 g-1,表明该方法能成功地制备高产率、高活力的原生质体,建立了一种烟草原生质体的简易制备方法.     

来自裸露细胞的植物

在霍亨海姆大学的植物发育生理学讲座上报告了由撞羽矮牵牛寻常叶游离的原生质体培养出完全能繁殖的植物。原生质体是植物细胞的内含物,人们如果用一定的酶进行处理,除去细胞壁,它就成为游离状态。于是细胞内含物没有任何保护,进行基因处理,变更遗传信息便成为可能。游离的遗传物质,也就是任何植物的 DNS(脱氧核糖核酸)就能从细胞内含物中取得。现在证明,由原生质体可重新发生新的能繁殖的植物,因此通过外来基因处理,使遗传信     

烟草叶肉原生质体分离和纯化研究

实验比较了从烟草K326叶片分离叶肉原生质体的若干影响因素.结果表明,质壁分离的时间、酶液浓度、渗透压及酶解时间是影响原生质体产量和质量的决定性因素.研究结果对建立高效的烟草原生质体再生系统及其遗传操作有参考价值.     

皱叶莴苣_菜心_胡萝卜及其它几种植物原生质体分离方法的初步探索

近年来,原生质体的分离和培养已获得较大的突破,如烟草、胡萝卜、马铃薯、矮牵牛、石刁柏等多种植物已能从原生质体再生成完整的植株,有些作物已从原生质体诱导出愈伤组织,如水稻、玉米等.分离的原生质体,不但能诱导再生成完整植株,还能通过原生质体的融合或摄入外源核酸或细胞器,使具有不同类型遗传特性的原生质体形成杂交细胞,进而打破有性杂交不亲和性的界限,开辟植物遗传育种的新途径.由此可见,原生质体的制备和培养研究是植物体细胞杂交工作中的首要环节.本文对华南栽种的几种作物,初步探索了其原生质体分离的适合方法.     

担子菌LMPQ39和CSP菌丝原生质体分离和再生的研究

本文以蜗牛酶和纤维素酶的混和酶液作为脱壁酶，通过酶解试验比较了菌龄，酶解时间，酶解温度及酶液浓度等对担子菌ＬＭＰＱ３９和ＣＳＰ菌丝原生质体分离的影响，通过原生体再生试验，比较了渗透压稳定剂对ＬＭＰＱ３９和ＣＳＰ菌丝原生质体再生的影响，获得了１０＾５－１０＾８数量级的原生质体再生菌落，同时，本文还对ＣＳＰ原生质体再生过程的形态变化作了适当的描述。     

紫锥菊愈伤组织原生质体分离方法初探

紫锥菊提取物属于目前国际上流行的草本植物药,其主要运用于增强免疫力等方面.以加拿大狭叶紫锥菊愈伤组织为材料,研究影响其原生质体分离的因素,结果表明选用浅黄绿色、质地均匀且呈疏松颗粒状的紫锥菊愈伤组织易游离出原生质体;采用纤维素酶浓度为2.0%,果胶酶浓度为1.0%,半纤维素酶浓度为0.5%,甘露醇浓度为0.7 mol·L-1的酶液配方酶解时间为8 h时,原生质体的产量为每克鲜重含50.0×104个.由此归纳出一套完整的愈伤组织诱导,组织培养,原生质体分离纯化,原生质体鉴定及计数的方法.     

北冬虫夏草液体深层发酵最适营养的研究

通过摇瓶单因子和正交设计试验结果。液体培养的最佳营养条件为：葡萄糖２％，食用糖１％，酵母膏１％，蛋白胨１％，ＮＨ４Ｃｌ０．２％，ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．０５％，ＫＣｌ１０．１％，１００立升发酵罐结果，碳，氮源分别为食用糖３％，蛋白胨１．５％。     

A new petunia flower colour generated by transformation of a mutant with a maize gene

Petunia hybrida is one of the classical subjects of investigation in plants in which the pathway of anthocyanin biosynthesis has been analysed genetically and biochemically. In petunia cyanidin- and delphinidin-derivatives, but no pelargonidin-derivatives are produced as pigments. This is due to the substrate specificity of the dihydroflavonol 4-reductase of petunia, which cannot reduce dihydrokaempferol. The petunia mutant RL01, which accumulates dihydrokaempferol, shows no flower pigmentation. RL01 served as a recipient for the transfer of the A1 gene of Zea mays encoding dihydroquercetin 4-reductase, which can reduce dihydrokaempferol and thereby provided the intermediate for pelargonidin biosynthesis. Transformation of RL01 with a vector p35A1, containing the A1-complementary DNA behind the 35S promotor leads to red flowers of the pelargonidin-type. Thus a new flower pigmentation pathway has been established in these plants.     

Ｌogistic方程在柑桔原生质体耐热性测定中的应用

试验了山金柑（Ｆortunella hindsii Osb.cv.swingle)、Murcott桔橙（Ｃitrus reticulataBlance C.sinensis Osb.sv.murcott)、伏令夏橙（Ｃ.siensis osb.cv.valencia)、伏令夏橙和宁波金柑的体细胞杂种（Ｃ.sinensis F.Crassifolia swingle cv.Meiwa)４种柑桔原生质体及其叶片经高温处理后的原生质体活力、电解质渗出率（％）的变化,配合logsitic方程分别求出自的高温半致死温度（ＬＴ５０）,以此来衡量各品种耐热力的大小。发现原生质体的耐热力大小与叶片耐热力的大小有显著相关性,回归方程为Ｙ＝１．３００７＋０．９８８１(r=０．９７７１）。讨论了原生质体耐热力测定的生理基础。     

水稻叶肉原生质体的分离与培养

研究了秧龄、纤维素酶浓度、纤维素酶 纤维素酶和果胶酶的比例等因素对分离水稻叶肉原生质体的影响,建立了培养水稻无菌苗、用叶鞘分离水稻叶肉原生质体的方法,该方法解决了愈伤组织诱导困难,分离水稻原生质体的分离期长、费时、费力的问题,大大缩短了分离原生质体的时间,对水稻叶肉原生质体的培养条件也进行了初步的研究。     

两种不同花色矮牵牛快繁体系的建立

为了建立紫红花和紫花矮牵牛诱导不定芽途径,以这两种矮牵牛为材料,在MS基本培养基基础上,添加不同浓度的6-BA和IBA激素,共设计了9种培养基组合,对两种花色矮牵牛叶片进行快繁研究．试验结果表明：不同品种矮牵牛快繁的激素组合是有差异的,紫红花矮牵牛叶片诱导不定芽的最适培养基为MS4-1．0mg／L6-BA4-0．2mg／LIBA,紫花矮牵牛叶片诱导不定芽最适培养基为MS＋2．0mg／L6-BA＋0．5mg／LIBA．为今后以紫红花和紫花矮牵牛为受体进行遗传转化获得转基因植株的无性快繁建立有效再生体系．     

新西兰青霉(Penicillium novae-zeelandiae)原生质体的制备与再生研究

利用酶对新西兰青霉菌的菌丝进行酶解获得原生质体,探究了影响原生质体制备和再生的因素,包括酶种类,酶浓度,菌丝培养时间,酶解时间和温度,pH,二硫苏糖醇(DTT)预处理等.结果显示最佳酶解条件为:菌丝体培养48h,用0.05mol·L~(-1) DTT预处理0.5h,以0.8mol·L~(-1)氯化钠作为稳定剂,31℃条件下经Lywallzyme(10mg·mL~(-1))酶解4h,原生质体数量达到4.75×107 g~(-1),再生率为18.0%.     

卡介苗菌株和结核分枝杆菌H37Ra菌株原生质体的制备研究

分别以卡介苗菌株(BCG)及结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株(H37Ra)为受体菌,制备上述两种菌株的原生质体,同时通过优化细菌菌龄、酶解浓度、酶解温度以及酶解时间等影响因素,探索出制备原生质体形成及再生的最优条件。结果显示:摸索出制备BCG和H37Ra菌株的原生质体条件:在对数生长期的两亲本菌株,经0.01 mol/L EDTA,0.01%β-巯基乙醇溶液预处理;酶解浓度为12 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间为5 h,可制备出活性较高的两种菌株的原生质体。由此可知,成功制备了BCG与H37Ra菌株的原生质体,并能在高渗固体培养基上再生。本实验为进一步研究该两种菌株原生质体融合试验奠定了基础。     

萱草(Hemerocallis hybrida)再生植株过程中根的诱导

利用1／2MS培养基作为基本培养基，附加不同浓度的NAA作为外源激素，分别对萱草愈伤组织块和无根再生进行根的发生诱导试验，结果：愈伤组织上均不易生根，而无根再生苗根的诱导效果较好，特别是在含有0．075mg/L NAA的培养基上，生根数量和生根率均最佳，为工厂化生产提供了相关的技术资料。     

Light-regulated and organ-specific expression of a wheat Cab gene in transgenic tobacco

Many of our most important crop plants are monocotyledons, including wheat, corn, rice and barley. No routine transformation system for monocotyledons has been reported, such as the Ti-mediated gene transfer system for dicotyledons facilitated by Agrobacterium tumefaciens. Indirect evidence suggests that Ti-plasmid DNA is transferred into and expressed in A. tumefaciens-infected wound tissues of plants from Liliaceae and Amaryllidaceae, but these observations have not been extended to monocotyledons of greatest agricultural importance. Regeneration of monocotyledons is usually blocked at the callus-stage, further complicating the possibility of exploring the regulated expression of their genes, and thus preventing identification of the regulatory domains of monocotyledonous genes in a homologous nuclear background. To circumvent these difficulties, we investigated whether monocotyledonous genes can be expressed and correctly regulated in dicotyledons. We have introduced a wheat gene (whAB1.6) encoding the major chlorophyll a/b binding protein (Cab) of the light-harvesting complex into the genomes of tobacco (Nicotiana tabacum SR1) and petunia (Petunia hybrida) via a Ti-DNA-mediated gene transfer system which allows the transformed cells to regenerate into whole plants. Here we report for the first time the light-regulated and organ-specific expression of a monocotyledonous gene in transgenic dicotyledonous plants.