烟草叶肉原生质体分离和纯化研究

实验比较了从烟草K326叶片分离叶肉原生质体的若干影响因素.结果表明,质壁分离的时间、酶液浓度、渗透压及酶解时间是影响原生质体产量和质量的决定性因素.研究结果对建立高效的烟草原生质体再生系统及其遗传操作有参考价值.     

烟草原生质体的分离纯化

研究从烟草叶片分离原生质体的若干影响因素.通过酶解法降解细胞壁释放出原生质体,利用离心和蔗糖漂浮法从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备的效果.结果表明:酶的种类、质膜稳定剂、渗透压稳定剂、pH及酶解时间是影响原生质体制备的重要因素.纤维素酶含量2%,果胶酶含量1%,2-N-吗啉乙烷磺酸(MES)浓度50mmol/L,Ca2+与甘露醇作为渗透压稳定剂,pH6左右,温度28℃,酶解时间4h时原生质体的分离效果最佳.     

酵母菌原生质体形成戌再生多因子综合效应分析

研究了酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂和处理剂对酿酒酵母Ａ００１与克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成时间与再生的综合效应，统计分析表明，在２％蜗牛酶，菌龄为数生长期时，影响原生质体形成的主要因素是酶解时间、酶解温度，且两者存在交互作用，影响原生质体再生的主要因素是渗透压稳定剂，确立了实验菌株原生质体形成与再生的最佳匹配条件。     

酵母菌原生质体形成与再生多因子综合效应分析

研究了酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂和预处理剂对酿酒酵母Ａ００１与克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成时间与再生的综合效应．统计分析表明，在２％蜗牛酶，菌龄为对数生长期时，影响原生质体形成的主要因素是酶解时间、酶解温度，且两者存在交互作用．影响原生质体再生的主要因素是渗透压稳定剂．确立了实验菌株原生质体形成与再生的最佳匹配条件     

担子菌LMPQ39和CSP菌丝原生质体分离和再生的研究

本文以蜗牛酶和纤维素酶的混和酶液作为脱壁酶，通过酶解试验比较了菌龄，酶解时间，酶解温度及酶液浓度等对担子菌ＬＭＰＱ３９和ＣＳＰ菌丝原生质体分离的影响，通过原生体再生试验，比较了渗透压稳定剂对ＬＭＰＱ３９和ＣＳＰ菌丝原生质体再生的影响，获得了１０＾５－１０＾８数量级的原生质体再生菌落，同时，本文还对ＣＳＰ原生质体再生过程的形态变化作了适当的描述。     

不同物理条件对南方紫花苜蓿原生质体游离的影响

以选育的XN-1型紫花苜蓿种子发育5~7天的无菌苗叶片为材料,研究了不同的材料预处理技术、渗透压稳定剂、质膜稳定剂等因子对其原生质体游离的影响,结果表明:以在CPW13g/L液中预质壁分离1h最为有效,可明显提高原生质体的完整性,完整产率达到14.02×106个/g;渗透压稳定剂以0.6mol/L葡萄糖最好;质膜稳定剂以0.1%2-(N-吗啉)-乙烷磺酸(MES)最好.     

柠檬酸生产菌Aspergillusniger的原生质体制备与再生

本文对柠檬酸生产菌ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒＣｏ－８２７菌丝原生质体的制备和再生进行了研究。对影响原生质体游离与再生的诸因素，如酶配比、菌龄、渗透压稳定剂和酶解温度等进行了优化，并进行了原生质体的再生培养。     

原生质体制备过程中各因素对酵母活力影响的研究

本实验以两株酵母菌为研究对象,通过正交设计,验证了原生质体制备过程中各因素对酵母细胞活力的影响.研究发现,在原生质体制备过程中渗透压稳定剂的种类、浓度对于原生质体的形成率和活力有着重要的影响.离子型的渗透压稳定剂如KCl可以提高细胞的形成率,而醇类稳定剂如山梨醇对于酶解后原生质体活力的保持有着较好的效果.     

猴头菌原生质体制备条件的研究

比较了不同酶液、酸碱度，渗透压稳定剂，菌龄和菌丝培养基成分等因素对猴头菌菌丝释放原生质体作用的影响。结果表明：在土豆培养基（ＰＤＰ）上静止浅层培养９６小时的菌丝，用２％的溶壁酶液，以０．６ｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４为渗透压稳定剂，在ＰＨ５．５的条件下酶解，获得的原生质体数最大。     

曲霉原生质体的制备与非对称灭活

为提高菌丝原生质体的释放量和活力,分别考查了碳源、菌龄、渗透压稳定剂、酶浓度、酶解时间及再生培养基种类对Aspergillus oryzaeHN3042和Aspergillus niger CICC2377原生质体释放和再生的影响,并研究了两个亲本原生质体的非对称灭活参数.确定了亲本原生质体的适宜制备参数.结果表明,以MPY液体培养基为菌丝培养基、0.7mol/L NaCl复合0.4mol/L山梨醇为渗透压稳定剂、以高渗豆汁固体培养基为再生培养基,原生质体有30%以上的再生率.通过非对称灭活曲线确定Aspergillus oryzae HN3042原生质体于15W紫光灯垂直距离13cm处照射15min,Aspergillus niger CICC2377原生质体于65℃水浴10min,可使亲本原生质体临界失活.