广东分离株HPV16型L2与重组E7融合蛋白原核表达载体的构建

分析广东分离株HPV16型的L2和E7基因结构,并对E7的4个功能区重新排列组合形成失去致癌作用但其抗原表位不改变,其命名为rE7,构建pET-28a-L2、pET-28a-rE7、pET-28a-L2-rE7、pET-28a-rE7-L2 4个原核表达质粒.采用PCR技术从广东分离株HPV16基因组中扩增L2基因;用重叠PCR技术人工合成rE7基因和L2-rE7、rE7-L2融合基因,并构建到原核表达载体pET-28a(+)上. 成功扩增广东分离株HPV16型 L2基因,经重叠PCR技术成功得到rE7、L2-rE7和rE7-L2基因并成功构建了原核表达的4个载体:pET-28a-L2、pET-28a-rE7、pET-28a-L2-rE7、pET-28a-rE7-L2. 广东分离株HPV16型L2基因与中国标准株有9处不同,同源性为99.37%,其编码氨基酸序列有8处突变. 成功合成失去致癌作用的基因rE7及构建4个原核表达载体.     

CD28分子的研究进展

目前大量实验已证明,CD28家族分子与B7家族分子结合后产生的共刺激信号,即第二信号在免疫应答的T细胞激活中起重要作用.CD28与B7两种分子的相互作用可产生一个特殊的协同刺激使TCR介导的抗原识别信号导致细胞的活化而不是无能,现就CD28家族分子的结构、配体、信号传导以及对免疫应答的调控作一综述.     

银汞合金充填和移除对尿汞含量的影响

对充填银汞合金及拆除银汞合金的患者定期检测尿汞,以了解人体内汞含量动态变化,了解银汞合金对人体健康的影响.分别于充填及去除银汞合金前1周以及充填及去除银汞合金后第1、7、14、28、42、56天收集患者尿样,检测尿汞,并以之前尿汞量作为自身对照.尿汞于充填及拆除后第1天明显升高,第7、14、28、42、56天尿汞量与充...     

再生细骨料湿度状态及掺量对混凝土工作性及抗压强度的影响

保持再生细骨料混凝土的总水灰比一致,变化再生细骨料的湿度状态(气干、烘干和饱和面干)及掺量,测出新拌再生细骨料混凝土初始坍落度和坍落度损失,以及3、7和28 d再生细骨料混凝土的抗压强度.研究结果表明:在总水灰比不变的情况下,当再生细骨料掺量一定时,随着其湿度状态从烘干到气干再到饱和面干的变化,混凝土的初始坍落度与坍落度损失减小,混凝土3、7和28 d抗压强度增大;当再生细骨料保持任一湿度状态时,随着其在混凝土中掺量的增大,混凝土的初始坍落度增大,坍落度损失减小,混凝土3、7和28 d抗压强度减小.     

不同再生骨料替代率混凝土抗压强度试验研究

分别对7 d、28 d、60 d龄期的不同再生粗骨料替代率混凝土进行了抗压强度试验,分析了再生骨料混凝土破坏形态及不同再生粗骨料替代率对再生混凝土抗压强度的影响,并对其原因进行了分析.试验结果表明28 d龄期的再生骨料混凝土强度能够达到标准要求,用再生骨料配置混凝土是可行的.     

饲料中D-葡萄糖含量对白鲟稚鱼的生长、脂肪合成酶及肝组成的影响

以不同含量的D-葡萄糖(0%,7%,14%,21%,28%和35%)饲料饲喂白鲟稚鱼8周.7%以上各组的能量贮留和体脂含量均显著高于0%实验组,但机体的蛋白组成及贮留却不受此处理影响.饲料中D-葡萄糖含量的增加,导致稚鲟的血糖、血浆三酰甘油脂以及4种主要肝脂肪合成酶活性的提高.28%和35%两组的肝脂肪合成酶活性比0%和7%两组要大2—3倍.肝体指数、肝重及肝糖元水平均随饲料中D-葡萄糖含量的提高而逐渐增加,饲喂葡萄糖饲料各组的肝糖元水平均显著高于0%组2倍以上.     

CP慢性染毒对大鼠脑皮层乙酰胆碱酯酶活性的影响

为探讨CP慢性染毒对大鼠脑皮层乙酰胆碱酯酶活性的影响,将120只雄性大鼠随机分为4组,即对照组(花生油)、低剂量组(40 mg/kg CP)、中剂量组(80 mg/kg CP)和高剂量组(160mg/kg CP),每组30只.灌胃给药28次,每日1次,共28d,每日观察动物症状.给药14d、28d和给药结束后7d各组分...     

鼠李糖乳杆菌L7-13增菌培养基的优化

对分离到的鼠李糖乳杆菌L7-13进行增菌培养研究:采用单因素实验和正交试验的方法,通过对其吸光度和活菌数的测定来优化鼠李糖乳杆菌L7-13的培养基.结果表明:葡萄糖65 g/L、酵母粉15 g/L、牛肉粉28 g/L、大豆蛋白胨30 g/L、KH2PO43 g/L、无水乙酸钠3 g/L、柠檬酸铵2 g/L、Tween80 1.5 mL/L、MgSO4.7H2O 1.0 g/L、MnSO4.4H2O 0.5 g/L,培养28 h,所得鼠李糖乳杆菌L7-13的最大菌体密度约1010cfu/mL.此增殖优化培养基适于鼠李糖乳杆菌L7-13的生长繁殖.     

GST pull-down技术验证CIPK7蛋白激酶与CBL1蛋白的相互作用

采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组质粒,经诱导表达及纯化获得了可溶性GSTCIPK7和CBL1-His融合蛋白,GST pull-down试验证实了CBL1能够与CIPK7结合.CIPK7蛋白与CBL1蛋白之间存在直接的相互作用,为进一步研究蛋白激酶CIPK7的功能奠定了基础.     

荨麻青霉(Penicillium urticae)原生质体的制备与再生

对荨麻青霉原生质体的高效制备以及再生方法进行了探索.结果显示荨麻青霉较为适合的原生质体制备及再生条件的组合:菌龄为28 ℃恒温下培养20～22 h,DTT预处理0.5 h,以7 mg/mL的纤维素酶,7 mg/mL蜗牛酶,5 mg/mL溶菌酶为混合酶,0.6 mol/L的NaCl作为渗透压稳定剂,28 ℃恒温酶解3.5 h,PDA高渗双层培养基再生.该组合制备原生质体形成量达到1.59×107～1.89×107/mL,其再生率达到16.24%～19.25%.     

人A组轮状病毒结构蛋白VP7原核表达及其卵黄抗体效价的研究

为获得人A组轮状病毒重组结构蛋白VP7及其高效价的卵黄抗体,使用PCR技术扩增VP7 DNA片段并将其克隆到原核表达载体pET28a上形成重组质粒pET28a-VP7。将重组质粒转化基因工程菌E.Coil BL21(DE3),用0.5 mM IPTG诱导VP7重组蛋白的表达。通过包涵体纯化和蛋白复性后,将VP7重组蛋白与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡,收集鸡蛋。用水稀释-盐析法纯化卵黄抗体IgY。进一步应用SDS-PAGE、ELISA和点杂交技术,分析该卵黄抗体的纯度、效价和特异性。结果表明在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中能够实现VP7重组抗原的表达,将重组抗原VP7免疫产蛋鸡,提取纯化得到滴度为1:100 000的抗VP7卵黄抗体,且特异性的识别野生型A组轮状病毒。     

中、高掺量Ⅲ级粉煤灰混凝土抗氯离子侵入试验

测试中、高掺量Ⅲ级粉煤灰混凝土的7、28、90 d强度及抗氯离子侵入性能,并与同样配合比的等活性成分Ⅰ级灰混凝土及相同28d强度无掺灰混凝土进行比较.试验结果表明,用高掺量Ⅲ级灰同样可以配制出抗渗混凝土.在本试验条件下,其强度、抗氯离子侵入性能并不明显低于Ⅰ级灰混凝土.     

大肠杆菌中插入表达信号肽提高吡咯喹啉醌产量的研究

本文将载体pET-22b的信号肽基因pelb插入pET-28a-pqq的T7启动子和pqq基因之间,得到重组工程菌E.coli-BL21(pET-28a-pelb-pqq),发酵生产吡咯喹啉醌（PQQ）。结果表明PQQ最高产量可达40.73mg/L,比对照菌E.coli-BL21(pET-28a-pqq)提高了24.36%。此外,工程菌和对照菌前3h发酵的单位菌体产量及单位菌体产率均较高,且此后呈下降趋势。而E.coli-BL21(pET-28a-pelb-pqq)在21h后的PQQ产量及生物量均增加,推测PQQ产量与菌体生物量之间存在同促关系。     

在预后和治疗中基因组研究前景无限

2011年6月至7月中旬,仅仅7个星期的时间,至少出现20篇关于单核苷酸多态性(SNP)的论文,该SNP位于19号染色体IL28B基因附近,IL28B编码Ⅲ型干扰素.这种论文发表速度令人震惊.引发这一现象的始作俑者是目前位于热点论文榜第6位的论文,2011年3-4月,其在热点论文数据库中的总被引达279次.     

Ser28磷酸化组蛋白H3在哺乳动物有丝分裂细胞中的动态分布

利用特异性抗Ser28磷酸化组蛋白H3抗体,应用间接免疫荧光标记技术,标记人乳腺癌细胞 (MCF-7)和小鼠成纤维细胞(NIH 3T3),用激光共聚焦显微术研究这两种哺乳动物细胞中Ser28磷酸化组蛋白 H3在有丝分裂过程中的动态分布,以研究Ser28磷酸化组蛋白在细胞有丝分裂过程中的作用.结果表明,Ser28 的磷酸化作用是这两种细胞有丝分裂期的特有事件.组蛋白H3的Ser28磷酸化信号首先出现在早期的核外周, Ser28磷酸化在中期达到高峰,并扩展到染色体的所有部分,后期和末期逐渐减退,随着胞质分裂的完成而消失. 实验结果表明,组蛋白H3 Ser28的磷酸化与有丝分裂染色体的凝集和解凝集过程有着时间和空间上的相关性. Ser28磷酸化使得组蛋白H3氨基末端的正电荷数降低,这可能是导致染色质变构凝集的原因之一.有丝分裂期 间组蛋白H3在Ser28位置磷酸化过程与Ser10相比有明显的差异,因此在动物细胞中,组蛋白H3氨基末端这 两个不同丝氨酸残基的磷酸化可能有不同的生物学功能.     

血清对大鼠角膜感觉神经损伤修复的影响

目的:探讨血清对大鼠角膜感觉神经损伤修复的影响.方法:SD大鼠40只随机分为两组:实验组和对照组,每组各20只.选取大鼠右眼制作大鼠角膜神经损伤模型,实验组和对照组于损伤后分别用大鼠血清和生理盐水点眼,每日3次.分别于造模后2d、4d、7d、9d、11d、14d、28d采用自制角膜知觉测定计测量麻醉后大鼠双眼的角膜知觉,分别于造模后7d、14d、28d采用ELISA法检测大鼠角膜乙酰胆碱含量.结果:对照组2天、4天、7天的作用力均明显高于实验组,说明血清有促进角膜神经损伤修复的作用,但组间差异只有第7天的具有统计学意义(t=-2.459,P=0.028).实验组大鼠角膜知觉差不多在受伤后7天就基本恢复,对照组差不多在9～14天才恢复.对照组7天、14天的角膜乙酰胆碱含量低于实验组,但组间差异只有第7天的具有统计学意义(t=2.684,P=0.028).结论:血清可促进大鼠角膜感觉神经损伤修复.     

钛石膏掺量对碱激发胶凝材料强度与水稳定性的影响

为了实现超硫钛石膏-粉煤灰胶凝材料在道路工程中的应用,需要研究高掺量钛石膏胶凝材料的水稳定性.设计了膏灰比为3:7、4:6、5:5、6:4、7:3的5组配合比,制作试件240个,分别进行了标准养护及1d、8d或22d浸水养护,测定了7d、14d、28d无侧限抗压强度,计算了软化系数,并采用扫描电镜(SEM)和X射线衍射法(XRD)测试了材料的微观结构及化学成分.结果表明:钛石膏粉煤灰胶凝材料7 d强度增长缓慢,14～28 d强度增长显著,其中膏灰比为5:5时,胶凝材料14 d、28 d龄期抗压强度值最大,分别为4.4 MPa、5.3 MPa;浸水养护8 d、22 d,胶凝材料膏灰比为5:5的试件抗压强度最大,软化系数在0.82以上,因此膏灰比不宜超过5:5;胶凝体系中水化产物主要为钙矾石(AFt)、水化硅酸钙(C-S-H)、水化硅铝酸钙(C-A-S-H),28 d水化产物随养护龄期增多,材料强度提高.     

轻质绿化混凝土pH值优化的正交试验研究

利用正交试验探讨了水泥、耕植土、珍珠岩和外加剂等因素对轻质绿化混凝土pH值的影响.结果表明:各因素对轻质绿化混凝土pH值的影响具有明显的时间效应,28 d pH值的降幅最大,7 d前水泥、珍珠岩和外加剂的影响达到显著水平,而28 d后水泥是pH值和28 d抗压强度的主要影响因素,基本上与水泥用量呈线性关系,达到显著水平,并趋于稳定,珍珠岩用量的增加有进一步降低pH值的趋势.28 d后的综合最优水平组合为A1B1C2D3,在实际应用中应按工程实际合理选择各因素的用量.     

五味子、大枣、枸杞复合果醋配方设计及抗焦虑作用研究

目的研究五味子、大枣、枸杞复合果醋(SCV)抗焦虑作用的最佳配方设计,并探讨其抗焦虑的作用机制.方法将ICR小鼠随机分为空白对照组(蒸馏水)、阳性对照组(地西泮)及SCV 9个不同配方组,各组小鼠连续灌服7 d后进行高架十字迷宫实验,并采用酶联免疫吸附法检测外周血中γ氨基丁酸和谷氨酸水平.结果高架十字迷宫实验结果显示:与空白对照组比较,SCV第7组小鼠进入开臂次数百分比明显增加(P0.01),而第3,5,6,7,8及9组小鼠开臂停留时间百分比均明显增加(P0.05或P0.01).SCV第7组小鼠外周血中γ氨基丁酸水平明显升高,谷氨酸水平明显降低.结论 SCV抗焦虑最佳配方为100 m L SCV中含五味子果醋28 m L,大枣果醋7 m L,枸杞果醋28 m L,蒸馏水37 m L(各组果醋浓度为100%).此结果可为开发抗焦虑保健食品果醋提供依据.     

机制砂取代率及石粉掺量对人工砂砂浆流动度与力学性能的影响

通过使用不同机制砂取代率的人工砂、采用掺入石粉部分替代水泥的方法,研究人工砂砂浆流动度及力学性能的变化规律.研究表明:随着机制砂取代率的增大,人工砂砂浆的流动度优于天然砂砂浆,且其7、28 d抗压和抗折强度随着机制砂取代率的增大而增大.掺入5%的石粉可以提高人工砂砂浆的流动度及7 d抗压和抗折强度,28 d抗压和抗折强度降低幅度在10%之内.综合考虑人工砂砂浆的流动度及力学性能,建议采用机制砂取代率为66.7%及石粉掺量为5%的人工砂.