注射用罗替戈汀微球延缓MPTP致神经元损伤作用探讨

本研究旨在通过模拟持续多巴胺能刺激(CDS)给药方式,评价注射用罗替戈汀缓释微球(Rotigotine Extended-release Microspheres for Injection,RoMS)对帕金森病(PD)小鼠神经元损伤的延缓作用.采用MPTP小鼠PD模型,并随机分为正常组、模型组、左旋多巴组、RoMS组、左旋多巴与RoMS联合给药组,在给药期间进行行为学检测,给药结束后,分析各给药组对氧化应激相关蛋白n NOS、Cyt-C及黑质酪氨酸羟化酶(TH)表达水平的影响.结果表明,RoMS和联合用药组可明显延长小鼠转棒、悬尾、强迫游泳时间,下调黑质中n NOS、Cyt-C的含量,增加TH神经元的表达.本研究说明,RoMS具有抗氧化应激,减轻多巴胺神经元损伤,改善运动障碍的作用,并且在联用低剂量L-DOPA时,可同时发挥协同增效和神经保护作用.     

苦参碱对MPTP诱导帕金森多巴胺能 神经元损伤的保护作用

目的观察苦参碱在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森(FD)小鼠中对多巴胺能神经元损伤的保护作用和机制.方法将25只C57BL雄性小鼠随机分为5组,由空白对照组(A组)、MPTP组(B组)和3种苦参碱(4,8和16 mg/kg)加MPTP治疗组(分别为C,D和E组)组成.记录攀岩测试和运动活动实验的结果.4 d后处死小鼠并进行解剖,检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的水平,应用免疫荧光分析酪氨酸羟化酶(TH)的水平,通过蛋白质印记分析腹侧中脑核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)的水平.结果苦参碱可以缓解PD相关联的典型行为,且随着增加苦参碱浓度,症状明显减轻.PD小鼠具有较低的SOD和GSH活性,且苦参碱部分扭转了SOD和GSH活性的变化.使用苦参碱的小鼠出现较高TH水平和TH阳性细胞的表达,Nrf2在PD小鼠中脑腹侧表达显著下降,而苦参碱能够扭转这种现象.结论通过促进在中脑腹侧抗氧化应激相关的Nrf2信号通路,苦参碱可以抑制PD多巴胺能神经元的氧化损伤.     

烟碱对MPTP引起的C57BL/6小鼠黑质纹状体多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的:1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)可引起实验动物产生类似帕金森氏病的症状和病理改变。本实验拟观察烟碱(Nicotine,Nic)对MPTP引起的小鼠黑质纹状体多巴胺能神经元损伤的预防和治疗作用。方法:C57BL/6小鼠分为2批。第1批注射MPTP后给予烟碱治疗(Nic0.1,0.5,1.0mg.kg-1,tid),第2批于注射MPTP前1d开始给予烟碱(bid)。连续用药15d后用荧光分光光度法测定纹状体的多巴胺(DA)含量。结果:与MPTP对照组比较,不同剂量Nic治疗组小鼠纹状体DA含量明显提高(P<0.05);于注射MPTP前1d开始给予烟碱的小鼠,其纹状体DA含量则显著提高,接近正常对照组的水平(90.69%～91.44%)。结论:实验结果提示烟碱对MPTP所致的神经损伤具有预防和治疗效果。     

酪氨酸羟化酶与帕金森病的关系研究

酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)是多巴胺(Dopamine,DA)生物合成途径的关键酶,帕金森病(Parkinson's disease, PD)是由于黑质纹状体DA严重不足导致的一种神经变性疾病.研究了TH主导的DA代谢调节与PD发生的相互关系,TH结构、DA代谢的调节以及TH在PD发生发展和治疗中的作用.     

运动干预对帕金森病大鼠黑质DJ-1的表达和抗氧化物酶的影响

探讨早期运动干预对帕金森病(PD)模型大鼠黑质多巴胺(DA)能神经元的抗氧化保护机制.选清洁级SD大鼠64只分为4组:假手术组(Control,12只)、假手术运动组(Control+Ex,12只)、PD组(PD,20只)和PD运动组(PD+Ex,20只).单侧前脑内侧束(MFB)注射6-OHDA建立PD模型大鼠,运动组术后24h开始进行持续4周跑台训练,11m·min~(-1) ,30min·d~(-1) ,5d·(7d)~(-1) .采用阿扑吗啡(APO)诱导旋转检测行为变化,应用PCR和Western blotting检测黑质DJ-1变化,比色法检测黑质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)指标.黑质DJ-1基因表达显示,PD+Ex组比PD组分别明显增加(P0.05);黑质DJ-1蛋白表达显示,PD+Ex组较PD组有明显提升(P0.05);PD组大鼠SOD、GSH-Px活力明显低于Control组(P0.01),MDA含量显著高于Control组(P0.01);PD+Ex组大鼠SOD、GSH-Px活力和MDA含量与Control组和PD组均有显著性差异(P0.05).表明早期运动干预能提高黑质DA能神经元DJ-1并增强抗氧化应激能力.     

Ifenprodil对自噬的调控机制及其在帕金森病中的作用

为探讨Ifenprodil在帕金森病(Parkinsan's disease,PD)中自噬抑制的缓解作用,采用体内和体外两部分实验对其机制进行研究。对6-OHDA-PD大鼠模型进行随机分组给药,通过旋转试验和圆筒实验观察Ifenprodil对PD大鼠行为学改善作用,免疫组织化学法(IHC)检测中脑黑质TH阳性细胞的表达情况;采用不同浓度的Ifenprodil对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞兴奋性神经毒模型进行治疗,MTT法检测细胞存活率,Western Blot法检测膜受体NR2B和NR2A,自噬蛋白lc3b、beclin-1和p62,凋亡相关蛋白bax和bcl-2的表达水平。结果显示,Ifenprodil可改善APO诱发的异常旋转行为,对黑质多巴胺神经元具有较好的保护作用,可在动物及细胞水平上调lc3b,beclin-1,bcl-2的表达,下调p62,bax的表达。结果提示,Ifenprodil对多巴胺神经元有较好的保护作用,其机制可能与调节NMDA受体亚基的表达,增强细胞自身的自噬作用相关。     

跑台运动通过增强星形胶质细胞Glu的摄取转运功能改善PD模型大鼠运动功能

本文选取雄性SD大鼠,随机分为4组:假手术组(Control)、假手术运动组(Control+Ex)、PD组(PD)和PD运动组(PD+Ex).于大鼠内侧前脑束注射6-羟基多巴(6-OHDA)建立单侧损伤PD模型,术后24h实施运动干预.在手术后第1周、第2周和第4周皮下注射阿朴吗啡(APO)评价PD模型可靠性.4周训练结束后进行圆筒与网格行为学测试,并利用高效液相色谱技术(HPLC)检测纹状体Glu浓度;采用免疫组织化学技术观察纹状体GFAP和GLT-1的表达水平.APO旋转行为测试和圆筒及网格行为测试结果显示,PD+Ex组大鼠行为功能较PD组显著改善(P0.05).PD+Ex组大鼠较PD组纹状体Glu浓度下降(P0.01),GLT-1表达显著上调,而GFAP的表达显著下调(P0.05).4周跑台运动干预可加速星形胶质细胞对Glu的摄取转运能力,降低纹状体Glu浓度,改善PD模型大鼠行为功能障碍.推测运动促进PD模型大鼠皮层-纹状体Glu能通路的突触可塑性可能也与星形胶质细胞对Glu的摄取转运功能有关.     

多巴胺D2受体PET成像在制备帕金森病大鼠模型中的作用

将23只帕金森病(PD)成功模型大鼠分别进行11C-Raclopride PET显像,ROI方法测量模型大鼠两侧纹状体/小脑比值并进行统计分析,比较两侧有无显著性差异。正常与模型大鼠分别进行TH免疫组化染色。结果表明,模型大鼠毁损侧纹状体放射性明显上升,两侧纹状体/小脑比值统计比较,p值为0.000,具有显著性差异;同时,模型大鼠TH染色黑质处阳性神经元数量减少。通过PET多巴胺D2受体成像在体显示PD模型大鼠毁损侧纹状体D2受体状态,再结合行为学观察可作为证实模型成功的标准之一,为基础研究和临床诊断PD提供了一种分子成像工具。     

首乌制剂对MPTP引起的小鼠帕金森病的防治

实验选用成年ICR纯系小鼠，通过对小鼠主动运动以及脑内多巴胺（DA）含量的测定，观察首乌的醇提取物对MPTP引起的小鼠帕金森病的预防与治疗作用。实验发现，注射MPTP后，小鼠主动性活动明显减少，脑内DA含量明显降低，表现出帕金森病的特征。对这些小鼠再注射首乌制剂能促进小鼠的运动，脑内DA的含量得以恢复。若同时注射MPTP和首乌制剂，则小鼠主动性活动时间以及纹状体多巴胺的含量都明显高于单独注射MPTP组。实验提示，MPTP可引起ICR小鼠脑内多巴胺神经元损伤并产生帕金森病症状，而首乌制剂对MPTP的毒性作用有明显的预防作用和一定的治疗作用，这可能与首乌制剂抑制型单腔氧化酶的活性有关。     

丁苯那嗪调节TH和突触囊泡转运改善HD的机制研究

通过腹腔注射3-硝基丙酸（3-NP）建立亨廷顿舞蹈症（HD）大鼠模型，探究丁苯那嗪（TBZ）改善HD样症状的作用及机制。结果显示，TBZ缓解了3-NP诱导的HD大鼠体重下降和运动障碍，逆转了纹状体中亨廷顿蛋白（Htt）的表达和神经元丢失；同时TBZ调节了纹状体中神经递质的含量，抑制酪氨酸羟化酶（TH）和囊泡单胺转运体2(VMAT2)的表达，并保护突触免受损伤；TBZ通过同时调控突触囊泡转运和TH的表达以降低纹状体中多巴胺（DA）的释放和合成，保护突触功能和神经元，从而减轻HD样症状。     

更年期女性帕金森病动物模型的建立与评价

通过建立去卵巢帕金森病小鼠模型，应用免疫组织化学染色、逆转录一聚合酶链式反应及高效液相色谱法等多项技术对小鼠黑质多巴胺神经元数目、基因表达水平及纹状体多巴胺及其代谢物含量进行考察并评价。实验结果表明模型组小鼠上述检测指标较对照组均明显减少（P〈O．01）。发现本模型具有更年期女性帕金森病的基本的病理特点，可应用于临床研究。     

MPTP致C57BL/6小鼠帕金森病模型的复制及常用的行为学分析方法

目的介绍1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发C57BL/6小鼠的帕金森病(Parkinson disease,PD)模型的复制及常用的行为学分析方法。方法C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP(40 mg/kg),每天1次,连续注射7 d;同时每天进行小鼠的爬杆实验、悬挂实验、游泳实验和震颤麻痹评分;最后取材,用HPLC-ECD法测定纹状体内的多巴胺含量,用Lowry法测定纹状体内的蛋白总量,并计算多巴胺(ng)/蛋白总量(mg)的比值。结果爬杆实验结果表明,PD模型组小鼠爬杆所用的时间明显长于对照组,其分值低,对照组和PD模型组间有极显著性差异(P<0.01);悬挂实验表明PD模型组小鼠悬挂能力明显低于对照组(P<0.01);游泳实验表明PD模型组小鼠游泳能力明显低于对照组,小鼠肢体运动协调情况不好,组间有极显著性差异(P<0.01);震颤麻痹评分显示,PD模型组分值很高,震颤麻痹症状非常明显,较对照组有极显著性差异(P<0.01);多巴胺含量分析显示,PD模型组多巴胺(ng)/蛋白总量(mg)的比值明显低于对照组,有极显著性差异(P<0.01)。结论用MPTP诱发C57BL/6小鼠的帕金森病模型的复制方法以及爬杆试验、悬挂实验、游泳实验和震颤麻痹评分简单可靠,是用于帕金森病治疗研究的良好方法。     

帕金森病食蟹猴系统性模型构建与在体临床过程的动态评价研究

目的 应用行为学与分子影像学的方法在体动态评价帕金森病食蟹猴系统性模型的临床变化特征,为药物、干细胞等治疗的临床前研究提供稳定有效的PD灵长类动物模型。方法 7只10～15岁的健康食蟹猴连续静脉注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)0.2 mg/kg体质量,诱导系统性PD模型,持续观察PD症状进展3个月,随后给予左旋多巴干预。应用PD评分量表评价动物的临床症状严重程度,用EthoVision动物运动轨迹跟踪系统分析随意运动距离、运动轨迹的变化,用正电子发射断层显像技术(Positron emission tomography,PET)分子显像剂18F-AV-133评估纹状体多巴胺能神经元的功能状态。结果 所有动物在给予MPTP注射14 d后出现了典型的包括震颤、肌僵直、运动迟缓等PD症状,1个月临床评分达到峰值(21.43±5.35)。随后PD症状趋于稳定,连续观察至2个月(18.43±3.87)、3个月(18.14±3.53),与MPTP注射结束时(14.43±1.90)相比,临床评分均显著升高(P<0.05)。在3个月随意运动距离(809.77±401.15)cm较基线(8627.46±5751.04)cm显著降低(P<0.01)。18F-AV-133双侧纹状体平均特异性摄取率(Sur)在3个月时(0.16±0.03)较基线(1.66±0.58)显著降低(P<0.01)。在给予L-Dopa干预后可见PD症状显著改善,临床评分(12.86±3.63)较之模型期显著降低(P<0.05),而随意运动距离则显著增加(P<0.05)。结论 本研究构建的PD食蟹猴系统性模型临床症状持续稳定,纹状体多巴胺能神经损害,对L-Dopa干预有效,全程无自发性恢复,更近似地在体动态模拟了PD的临床特征,以期为PD未来研究提供实验依据。     

抗坏血酸定向诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经细胞及其机理研究

神经干细胞(NSCs)是神经系统发生的始祖细胞,具有自我更新和多向分化潜能.NSCs的研究不仅对阐明神经系统发育有重要意义,对神经系统疾病的治疗也提出了新的思路.研究NSCs定向分化的诱导因素和机制对NSCs的应用具有重要意义.本实验在体外神经干细胞培养鉴定和扩增的基础上,观察了抗坏血酸(AA)对NSCs定向诱导分化作用,并探讨了分化过程中相关基因表达的变化和可能的信号传递途径.结果表明AA诱导能明显促进多巴胺能神经细胞特异性酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运子(DAT)mRNA和蛋白表达;NSCs表达Ptx3和较弱的Nurr1,不表达TH,DAT和Shh;诱导后Ptx3表达无变化,Nurr1,Shh,TH和DAT表达增强.Erk阻断剂PD98059能阻断AA对Nurr1,TH,DAT mRNA的作用.提示Nurr1参与AA定向诱导,AA可能通过Erk1/2信号转导途径起作用.研究为获得足够的治疗帕金森氏病的多巴胺能神经元提供了新的思路,并对AA定向诱导的机制进行了初步研究,对更好地发挥NSCs移植治疗帕金森氏病具有重要意义.     

ADTIQ导致SH-SY5Y细胞凋亡和多巴胺转运体表达降低

新内源性神经毒素1-乙酰基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉(ADTIQ)生成与糖代谢密切相关,可能成为糖尿病并发PD的一个关键因素,但是其神经毒性还不清楚.针对ADTIQ的神经毒性,该研究采用SH-SY5Y细胞为模型,MTT法,Annexin V/PI双染法,Caspase 3/7活性检测细胞存活率和细胞凋亡,Western-blot检测多巴胺转运体(DAT)的表达量.结果表明,随着ADTIQ浓度增大,细胞的存活率逐渐下降,凋亡率增加,同时ADTIQ导致DAT表达降低.研究提示ADTIQ导致多巴胺神经元的凋亡与PD的发生息息相关,糖尿病引起ADTIQ增加,可能成为高糖损伤多巴胺神经元的一个重要原因.     

帕金森病研究进展

 帕金森病（PD）是常见的神经系统变性疾病,典型的PD病理表现为脑中黑质多巴胺神经元退行性变和路易小体沉积,但这些改变不能完全解释PD产生的临床症状,目前PD的发病原因及机制尚不明确,尚未建立系统的早期诊断及保护治疗方式。随着诊断及治疗技术的提高,生物学标记物、脑网络及神经调控等有望为PD早期诊断、机制探索及个体化治疗提供基础。本文综述了PD在生物学标记物、脑网络研究及神经调控治疗领域的研究进展。     

5-HT_(2C)受体对帕金森病模型大鼠外侧缰核谷氨酸能神经元电活动的影响

为探讨帕金森病(PD)模型大鼠外侧缰核(LHb)中谷氨酸能神经元的电活动变化及其对5-羟色胺2C(5-HT_(2C))受体刺激的反应,阐明LHb和5-HT_(2C)受体在PD神经生物学机制中发挥的作用,通过6-羟多巴胺(6-OHDA)损毁单侧黑质致密部(substantia nigra pars compacta,SNc)建立PD模型,采用细胞外记录的方法,观察假手术组与单侧SNc损毁组大鼠LHb中谷氨酸能神经元的电活动。结果显示:与假手术组大鼠相比,损毁组大鼠LHb中谷氨酸能神经元的电活动增强,表现为爆发式放电活动增强(P0.05);LHb中局部注射5-HT_(2C)受体激动剂Ro60-0175后,两组大鼠的神经元放电频率虽均升高(P0.05),但损毁组大鼠LHb中谷氨酸能神经元放电频率升高持续时间显著长于假手术组,且给药前后神经元的放电形式更趋向于爆发式活动(P0.05),变异系数明显升高(P0.05)。结果提示单侧SNc损毁使LHb中谷氨酸能神经元爆发式电活动增强,可能与PD相关抑郁行为发生有关,5-HT_(2C)受体参与了对LHb中谷氨酸能神经元电活动的调节。     

SH-SY5Y与U87细胞共培养条件性培养基可降低N-甲基-salsolinol介导THP-1细胞的凋亡

 神经免疫在帕金森病(PD)的致病机理中发挥重要的作用,PD 患者的外周血淋巴细胞的数量发生了变化,提示外周免疫系统在PD 的发生发展中发挥一定的作用。但是外周单核细胞(PBMC)在其中发挥的具体作用尚不清楚。外源性神经毒素(MPTP)类似物,内源性神经毒素(NMSal)可能是导致PD 发生的一种因素。研究采用NMSal 损伤的SH-SY5Y与U87 细胞共培养的条件性培养基培养外周单核细胞THP-1,探讨NMSal 损伤的多巴胺能神经元细胞对外周单核细胞的影响。结果表明,该条件性培养基可以降低NMSal 毒性诱导的THP-1 细胞的凋亡、氧化应激水平(MDA 和H₂O₂)、线粒体的损伤和凋亡相关蛋白FADD、Bax 和caspase3 的表达和活化水平。PD 病人中损伤的多巴胺能神经元与星形胶质细胞的相互作用可能会影响PBMC,进而影响PD 病情的进展。     

SH-SYSH-SY5Y与UU87细胞共培养条件性培养基可降低N-甲基-salsolinol介导THP-THP-1细胞的凋亡

神经免疫在帕金森病(PD)的致病机理中发挥重要的作用,PD患者的外周血淋巴细胞的数量发生了变化,提示外周免疫系统在PD的发生发展中发挥一定的作用。但是外周单核细胞(PBMC)在其中发挥的具体作用尚不清楚。外源性神经毒素(MPTP)类似物,内源性神经毒素(NMSal)可能是导致PD发生的一种因素。研究采用NMSal损伤的SH-SY5Y与U87细胞共培养的条件性培养基培养外周单核细胞THP-1,探讨NMSal损伤的多巴胺能神经元细胞对外周单核细胞的影响。结果表明,该条件性培养基可以降低NMSal毒性诱导的THP-1细胞的凋亡、氧化应激水平(MDA和H2O2)、线粒体的损伤和凋亡相关蛋白FADD、Bax和caspase3的表达和活化水平。PD病人中损伤的多巴胺能神经元与星形胶质细胞的相互作用可能会影响PBMC,进而影响PD病情的进展。     

电针对帕金森病模型大鼠纹状体多巴胺及代谢产物的影响

目的:研究电针对帕金森病大鼠纹状体多巴胺及代谢产物的影响并进行对比分析。方法:将6-OHDA注入中脑右侧黑质造成单侧黑质损毁的帕金森病大鼠模型,并随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组,检测其损毁侧纹状体区多巴胺及代谢产物的含量。结果:电针组与模型组相比,纹状体区多巴胺、多巴克及高香草酸均有不同程度的升高(P<0.05)。结论:电针能提高帕金森病大鼠纹状体区多巴胺的含量,对帕金森病有一定的治疗作用。