云芝漆酶同工酶的分离纯化及酶学性质

采用DEAE-Sephrose Fast Flow和Sephadex G-100两步柱层析,得到2种漆酶同工酶,分别命名为LccA和LccB.以ABTS为底物在适当条件下与酶带反应呈绿色谱带鉴定出漆酶谱带.LccA的纯化倍数和回收率分别为53.88和7%,LccB的纯化倍数和回收率分别为208.21和29%.用SDS-PAGE测定两漆酶的分子量分别为64.2 ku和60.7 ku;LccA和LccB的最适作用温度分别是40℃和50℃;最适反应pH值为3.5和4.0;其N-末端部分氨基酸序列为AIGPK和GIGPV,与其他真菌漆酶相比显示很高的同源性,以ABTS为底物的Km值分别为68.96μmol/L和76.92μmol/L.Cu2 对两同工酶都有明显的激活作用,Fe2 ,Ag 完全抑制两同工酶的活性.     

密孔菌固态发酵农业废弃物产漆酶活性的研究

分别以玉米秸秆、小麦秸秆和杨树木屑为原料,研究了一株密孔菌在发酵不同农业废弃物时漆酶的活性.结果表明,农业废弃物对密孔菌产漆酶具有良好的诱导效果,且以玉米秸秆的效果最佳,漆酶酶活可达40.92 U·mg~(-1).Cu~(2+)的存在或浓度变化显著影响密孔菌产酶,当添加0.02%Cu~(2+)时,菌株在小麦秸秆和木屑培养基上产酶活分别达到41.24 U·mg~(-1)和57.13 U·mg~(-1);当Cu~(2+)浓度为0.04%时,菌株在玉米秸秆培养基上分泌漆酶酶活达到峰值94.92 U·mg~(-1).p H值对密孔菌产漆酶有明显影响,在中酸性环境中菌株产漆酶酶活较高.菌株在小麦秸秆和玉米秸秆培养基上发酵产酶的最适温度较高,分别为35℃和40℃,且在整个发酵周期能维持较高较稳定的酶活水平.因此,密孔菌有很好产漆酶和降解农作物秸秆的能力,可用于农作物秸秆处理.     

糙皮侧耳菌漆酶同工酶谱分析

采用聚丙烯酰胺等电聚焦电泳（ＩＥＦ）方法,比较了１０株糙皮侧耳菌漆酶同工酶谱。结果表明：所有菌株酶带在ｐＨ４．２～４．４和ｐＨ５．２～５．３的范围内是恒定的,但多数菌株的漆酶同工酶有多条谱带,等电点（ｐｌ）值变化较大,这说明它们的漆酶同工酶基因的多样性,可能是不同侧耳菌品种之间杂交的结果。     

磷胁迫下大豆叶片及根部超氧化物歧化酶酶谱的研究

通过营养液栽培试验,研究了低磷胁迫下4种不同磷效率基因型大豆叶片和根部超氧化物歧化酶（SOD）同工酶的酶谱．结果表明,大豆叶片和根部SOD同工酶含量在低磷处理第10天、20天、30天均比对照高,酶谱染色加深和谱带条数的增加,说明低磷胁迫增加该酶活性,磷高效基因型酶活性升高的幅度大于磷低效基因型．     

镉离子胁迫下4种辣椒超氧化物歧化酶-同工酶酶谱及酶活性分析

以4种辣椒为材料,分析在不同胁迫浓度和胁迫时间镉离子胁迫下,4种辣椒超氧化物歧化酶(SOD)活性及同工酶酶谱的变化.结果表明,镉离子能显著影响酶活性的变化,不同镉离子浓度胁迫下不同材料酶活性变化不同, SOD酶活性最高为对照组的1.4倍(1号品种,100 mg/L胁迫3 d),酶活性最低的为对照组的60%(2号品种,150 mg/L胁迫6 d);镉离子还能影响同工酶酶谱,不同胁迫时间和浓度对同工酶的影响不同,对1号材料的影响最为显著,能诱导出2条SOD同工酶新谱带.     

大豆过氧化物酶和酯酶同工酶对锰胁迫的反应

采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,研究了2个大豆品种(华春18和浙春3号)在不同时期、不同锰浓度(0,0.01,0.10,1.00,10.00,20.00 mg/L)处理下的过氧化物酶(POD)同工酶和酯酶(EST)同工酶的变化情况.结果表明,随着锰浓度的增加,华春18的2种同工酶的酶带数和活性变化较大,浙春3号的2种同工酶的酶活性和酶带数目比较稳定.此外,大豆在中等程度的锰胁迫下能适当产生一些补偿性的酶带,但酶活性已受到一定的抑制.2个大豆品种不同时期的POD和EST同工酶酶谱对锰胁迫的反应也有差异.不同品种大豆的同工酶酶谱的变化,与其对锰胁迫的抗性有关.     

皱疤坚螺在不同发育时期的酯酶(EST)同工酶比较

采用聚丙烯酰胺电泳法分析了皱疤坚螺(Camaena cicatricosa)不同发育时期3个组织的酯酶同工酶,得到19条基本谱带,其中有4条为公共谱带。实验结果表明:不同的组织之间酯酶同工酶存在差异。在相同组织的不同发育时期酯酶同工酶酶谱是相似的,但在谱带上也存在有细微的差异;肝的酯酶活性最大,足的酯酶活性最小。以酶谱为性状,对其进行了聚类分析,发现不同发育时期足和外套膜的相似性比较大,肝的酯酶同工酶酶谱出现了较大变化,而且依成体肝、亚成体肝和幼体肝的顺序与其它组织依次聚类。     

辣椒不同发育时期的同工酶研究

利用聚丙烯酰胺垂直板电泳技术对5个辣椒品种9个发育期的过氧化物酶同工酶、超氧化物歧化酶同工酶和酯酶同工酶进行了研究．发现不同发育时期3种酶的同工酶酶谱均有不同程度的变化．过氧化物酶同工酶酶谱在五层花序期最丰富，共有11条酶带，而在双叶期和四叶期，未检测到过氧化物同工酶酶带；超氧化物歧化酶酶谱在二层花序期最丰富，共有9条酶带，而在双叶期酶带数最少，仅为3条；酯酶同工酶酶谱在六层花序期最丰富，共有6条酶带，在六叶期和二层花序期酶带数最少，只有1条．通过分析这3种同工酶的总酶谱，找到了区分5个辣椒品种的标志性酶带．     

Cr6+对莼菜冬芽叶片过氧化物酶的影响

报道了莼菜冬芽叶中过氧化物酶( POD) 活性及同工酶酶谱随 Cr⁶⁺处理浓度及时间不同而发生的变化. Cr⁶⁺处理后,过氧化物酶同工酶谱多出 2 条酶带,酶带的出现及多少与Cr⁶⁺的浓度没有明显的相关性; 酶活性先升高后降低.     

雌雄构树过氧化物同工酶的比较研究

通过对成林及未知性别的幼株过氧化物同工酶谱的分析表明，酶谱从阴极到阳极均可分为３个区．成株雌雄株间的性别差异明显而稳定地反映在Ｂ区和Ｃ区；未知性别的幼株分为Ｃ区具有谱带和不具谱带两种酶谱类型，且与成株的酶谱有密切的相关性．可以认为，过氧化物同工酶可以作为构树早期性别鉴定的指标，用于幼株的早期性别鉴定．酶活性在性别间也有不同，表现为雌株高于雄株，与酶带数量及强度基本一致．     

GOD/Lac生物燃料电池的构建与性能研究

使用葡萄糖糖氧化酶(GOD)和漆酶(Lac)分别做酶生物燃料电池的阳极与阴极,构成了GOD/Lac酶生物燃料电池.首先通过循环伏安法研究了酶生物燃料电池阳极催化剂GOD和阴极催化剂Lac在碳布基底电极上的直接电化学行为,结果表明:GOD与Lac在该修饰电极上均完成了一个直接、可逆的电化学过程,保持了自身的生物学活性,为成功构成GOD/Lac酶生物燃料电池提供一个必要条件.其二,采用葡萄糖作为GOD/Lac酶生物燃料电池的阳极燃料,氧气(O2)作为GOD/Lac酶生物燃料电池的阴极燃料,使用充放电仪测得该GOD/Lac酶生物燃料电池在38.5 mV处的最大输出功率密度为0.108μW·cm-2,电流密度为2.75uμA·cm-2.     

Immobilization and direct electrochemistry of copper-containing enzymes on active carbon

Two typical and important copper-containing enzymes, laccase (Lac)and tyrosinase (Tyr), have been immobilized on the surface of active carbon with simple adsorption method. The cyclic voltammetric results indicated that the active carbon could promote the direct electron transfer of both Lac and Tyr and a pair of well-defined and nearly symmetric redox peaks appeared on the cyclic voltammograms of Lac or Tyr with the formal potential, E^0‘,independent on the scan rate. The further experimental results showed that the immobilized copper-containing oxidase displayed an excellent electrocatalytic activity to the electrochemical reduction of 02. The immobilization method presented here has several advantages, such as simplicity, easy to operation and keeping good activity of enzyme etc., and could be further used to study the direct electrochemistry of other redox proteins and enzymes and fabricate the catalysts for biofuel cell.     

外源因子对平菇深层发酵玉米秸秆木质素酶系分泌的影响

研究了1%-4%的豆渣、1%-3%的(NH4)2SO4和酵母菌(酿酒酵母、热带假丝酵母、产朊假丝酵母)对平菇深层发酵玉米秸秆木质素酶系活性的影响.结果表明:与对照相比,所试浓度的豆渣、(NH4)2SO4均显著提高漆酶、锰过氧化物酶的活性.其中2%、4%的豆渣分别对漆酶、锰过氧化物酶活性的促进作用最大,是对照的1.8和8.4倍;3%、2%的(NH4)2SO4分别对漆酶、锰过氧化物酶活性的促进作用最大,是对照的1.46和7.05倍.在平菇接种的同时及其培养的第2天分别接种3种酵母菌,均显著提高锰过氧化物酶的活性,其中酿酒酵母的促进作用最大,接种的同时及其培养的第2天接种分别是对照的5.97、10.2倍;平菇培养第2天接种产朊假丝酵母可显著提高漆酶的活性,是对照的1.32倍.     

不同培养料对鸡腿菇胞外酶活性影响的研究

实验设计了6个不同鸡腿菇培养基配方,分别提取其在菌丝半袋、菌丝满袋、原基、幼菇、成熟5个生长阶段粗酶液,通过测定纤维素酶、漆酶和淀粉酶活性,初步揭示出不同培养基对鸡腿菇纤维素酶、漆酶、淀粉酶活力的影响及规律．结果表明：不同培养基配方对各种酶的活力大小有影响,但各种酶活性在不同基质中变化规律一致,基质成分对酶活性的变化规律无影响．     

Organic solvents enhanced spectrofluorimetric method for determination of laccase activity

A novel fluorimetric method for determination of laccase activity in organic solvents is proposed, based on the oxidation ofo-phenylenediamine (1,2-diaminobenzene, OPDA) catalyzed by laccase yielding 2,3-diaminophenazine. The optimal conditions for laccase in organic media areT=55°C, pH=6.5, 1.0×10⁻²mol/L OPDA, 1.25 mL ethanol, 1.25 mL 1,4-dioxane and 1.25 mL acetone. The linear range of the method proposed in ethanol, 1,4-dioxane and acetone media were 0.44–19.33, 0.11–20.85, 0.38–21.05 U with the detection limit of 0.088, 0.022, 0.076 U, respectively. The proposed method has been applied to the analysis of laccase activity of real samples with more accurate and sensitive than that of the previous method reported. Supported by the National Natural Science Foundation of China and the Special Founds of State Education Committee for Doctorate Research Huang Zuyun: born in 1963, Ph.D     

Organic solvents enhanced spectrofluorimetric method for determination of laccase activity

A novel fluorimetric method for determination of laccase activity in organic solvents is proposed, based on the oxidation ofo-phenylenediamine (1,2-diaminobenzene, OPDA) catalyzed by laccase yielding 2,3-diaminophenazine. The optimal conditions for laccase in organic media areT=55°C, pH=6.5, 1.0×10⁻²mol/L OPDA, 1.25 mL ethanol, 1.25 mL 1,4-dioxane and 1.25 mL acetone. The linear range of the method proposed in ethanol, 1,4-dioxane and acetone media were 0.44–19.33, 0.11–20.85, 0.38–21.05 U with the detection limit of 0.088, 0.022, 0.076 U, respectively. The proposed method has been applied to the analysis of laccase activity of real samples with more accurate and sensitive than that of the previous method reported. Supported by the National Natural Science Foundation of China and the Special Founds of State Education Committee for Doctorate Research Huang Zuyun: born in 1963, Ph.D     

Chaetoomium globosum与Panus rudis共培养发酵合成漆酶

研究Chaetoomium globosum与Panus rudis在共培养条件下的漆酶合成.平板对峙培养时,菌丝体生长呈僵持状态,接触区漆酶表达量提高;摇瓶发酵实验表明,C.globosum与P.rudis共培养时,漆酶活力达4 360 U.L-1(ABTS法),是P.rudis单独培养的14倍,而C.globosum单独培养时无漆酶分泌;改变初始发酵时添加的C.globosum菌丝体量,或者延长发酵时间,漆酶同工酶谱发生改变.     

漆酶催化降解氯酚类有机污染物

采用漆酶为催化剂,研究2,4－二氯酚、4－氯酚和2－氯酚的催化降解机理,探讨了反应时间、pH值、反应温度、氯酚浓度以及漆酶浓度对其降解效果的影响和最适降解条件。结果表明,漆酶催化氧化2,4－二氯酚的能力最强,其降解率10h内达到94%,4－氯酚为75%,2－氯酚为69%。2,4－二氯酚发生反应的最适pH值在5.2～6.0之间,4－氯酚在5.5附近,2－氯酚在4.5～5.5之间。漆酶对氯酚的降解率随着漆酶浓度、反应温度的升高而增大,但随着氯酚浓度的升高,不同氯酚的变化趋势并不相同。漆酶降解2,4－二氯酚的反应属于一级反应,反应活化能约为44.8 kJ·mol^-1。另外,利用戊二醛交联壳聚糖制成载体来固定化漆酶,固定化漆酶的活性虽低于自由漆酶,但稳定性明显增强,连续6d用其降解2,4－二氯酚,6h降解率始终在60%以上。     

酪氨酸酶催化的3,4二羟基苯基丙氨酸氧化反应的动力学分析

对酪氨酸酶催化的3，4二羟基苯基丙氨酸氧化反应进行了动力学分析．用L—DOPA和D—DOPA作为底物，对底物浓度和反应速度测量的结果用Lineweaver—Burk法作图，根据计算所得的米氏常数（Km）表明此酪氨酸酶对L—DOPA表现出更高的亲和性，而催化反应的效率也更高．     

用Asmus法测K_m值

在酶的动力学研究中,K_m能看作为表观电离常数,它在生物化学中是用米氏方程测定,只要酶和底物结合生成一个有色中间络合物,则K_m能用Asmus法测定,本文在酪氨酸酶催化多巴的反应中,用Asmus法计算K_m值,其结果与米氏方程式相一致。