一种适用于胡杨叶片非变性蛋白质提取的方法

为探索适用于胡杨叶片非变性蛋白质的提取方法,以采自内蒙古额济纳旗天然胡杨林中胡杨成熟叶片为材料,采用咪唑法、Bis-Tris法、Tris-HCl法和新构建的Tris-SSAD法4种非变性蛋白质提取策略,分别用于提取胡杨叶片蛋白质样品;随后进行第一维非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(1~(st)-DE:Native-PAGE)。相比之下,只有Tris-SSAD法获得了清晰、条带数目较多的Native-PAGE图谱,且结合第二维变性凝胶电泳(2~(nd)-DE:SDS-PAGE)可成功分离出较多蛋白质复合体亚基或相互作用蛋白质分子,证明了Tris-SSAD法非变性温和提取特性。研究建立并优化了适用于胡杨叶片的非变性蛋白质提取方法,为后续进一步分析蛋白质与蛋白质相互作用及蛋白质复合体功能提供了实验基础。     

两种用于液质联用分析的蛋白质酶解处理效果比较

【目的】分析和评估两种蛋白质溶液酶解方法,为蛋白质组学研究中的大规模质谱鉴定分析建立一种稳定的样品制备技术。【方法】分别使用TEAB法(实验组A)和TFE法(实验组B)对牛血清白蛋白(BSA)进行还原、烷基化和溶液酶解,再用LTQ-Orbitrap高分辨率质谱仪采集BSA酶切肽段信息,比较两种方法得到的数据信息,分析肽段数目、可变修饰位点和蛋白质覆盖率。【结果】实验组A(TEAB法)获得36个肽段、39个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为59.31%;实验组B(TFE法)获得27个肽段、27个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为47.83%,实验组A的数据指标与实验组B差异显著。【结论】采用TEAB法酶切体系能实现蛋白质高效率酶切,达到获得较高肽段覆盖率的目的,可为蛋白质组学后期的质谱分析鉴定奠定实验基础。     

日本囊对虾性腺蛋白质双向电泳的样品制备方法的改进

采用一种能同时提取RNA、DNA和Protein的试剂(RDP试剂)进行日本囊对虾性腺总蛋白质的制备,并通过双向电泳(2 - DE)技术与传统的裂解液法比较提取效果.RDP法所得2- DE图谱清晰,条纹少,蛋白质点数多,而裂解液法存在横向和纵向拖尾,其碱性端蛋白质点大量缺失,说明RDP法能有效去除蛋白质样品中盐离子、脂...     

七种彩色马铃薯的蛋白质营养评价

为评价彩色马铃薯的蛋白质营养价值,以7个品种/品系的彩色马铃薯及2个普通品种马铃薯为材料,应用凯氏定氮法、全自动氨基酸分析仪法测定蛋白质含量和氨基酸组成,并使用模糊识别法、氨基酸比值系数(RC)、氨基酸比值系数分(SRC)、必需氨基酸指数(EAAI)和营养指数(NI)评价它们的蛋白质营养.结果表明:7个品种/品系的彩色马铃薯的蛋白质营养差异较大,干粉蛋白质含量范围为6.68%～12.96%,必需氨基酸占氨基酸总量的质量分数比例为28.71%～39.96%;部分彩色马铃薯蛋白质营养较一些普通马铃薯高,其中永康紫洋芋和375-19的蛋白质营养价值明显优于其他彩色马铃薯,是值得培育的品种/品系.实验提示彩色马铃薯具有较高的蛋白质营养价值和广阔的开发前景,也为彩色马铃薯品种的选育及资源的合理利用提供基础.     

白甲鱼幼鱼饲料中营养素适宜含量和最适能量蛋白比研究

用正交试验法L9(34)配制9种饲料,以增重率、饲料系数和蛋白质效率为评价指标,对白甲鱼幼鱼(3.32±0.47)g配合饲料中蛋白质、脂肪、总能、无机盐需要量及最适能量蛋白比进行了研究.结果表明各营养素对幼鱼的增重率、饲料系数及蛋白质效率的影响从大到小依次为蛋白质、总能、脂肪、无机盐,白甲鱼最适生长所需饲料中蛋白质、脂肪、总能、无机盐含量分别为38.07%,4.98%,12.35kJ/g,3.5%,最适能量蛋白比(E/P)为32.44kJ/g,其中蛋白质为影响幼鱼生长和鱼体成分的主要因素(P<0.05).     

耐海水芦荟粗多糖中游离蛋白的去除

分别对Sevag法和酶法去除耐海水芦荟粗多糖中游离蛋白质的条件进行了优化,并比较研究了Sevag法、酶法、三氯乙酸法(TCA法)和盐酸法去除蛋白的效果.结果表明,Sevag法除耐海水芦荟粗多糖中游离蛋白质的最佳条件是V氯仿∶V正丁醇为3∶1,振摇时间为5 min,水相与有机相之比为3∶1;使用蛋白酶K去除耐海水芦荟粗多糖液中的蛋白质时,最佳酶用量为4.5 U/mg.采用Sevag法去除粗多糖中蛋白质效果最佳,且操作简便,多糖损失量少.     

提取与分离方法影响海兔口腔神经节蛋白质组的分离效果

选用丙酮沉淀法和直接裂解法分别提取离蓝斑背肛海兔(Notarcus leachii cirrosus Stimpson, NLCS)口腔神经节(Buccal Ganglion,BG)全蛋白质,发现采用直接裂解法所获得BG蛋白质种类多于丙酮沉淀法.在第一向等电聚焦电泳 (IEF)中,分别选用pH 为3.0～9.0, 4.0～6.0和 5.0～8.0 的载体两性电解质,发现载体两性电解质pH 范围为5.0～8.0时分离效果最好.使用Melanie 4 Trial软件统计BG蛋白质斑点数目约为290点,适于开展BG蛋白质组学研究.     

L-精氨酸对提高蛋白质复性与纯化率的作用及其分析

分别以还原变性的溶菌酶(Lys)和大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的重组人酪氨酸激酶配体(Recombined human Flt3ligand,rhFL)为不同来源的变性蛋白,利用荧光光谱技术分析L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)作为小分子添加剂时,蛋白质折叠液相色谱(PFLC)法对变性蛋白质的复性效果,以及变性蛋白复性过程中的复性效率、荧光强度与蛋白构象变化的规律与关系,为解决包涵体蛋白质难于复性和复性效率低的问题提供可靠的数据.     

基于拉曼和试剂技术的蛋白质定量分析进展

基于拉曼技术和试剂技术的蛋白质研究是近些年发展的一种蛋白质定量分析手段.试剂技术是蛋白质实验室研究的最基本手段,它可以利用吸光强度或颜色深浅来判断未知体系中蛋白质的含量,进而建立一套标准来对蛋白质进行定量鉴定.目前,Folin-酚试剂法(Lowry)、考马斯亮蓝法(Bradford)和BCA法是主要用于蛋白质定量分析的技术.而大多数试剂具有显色效应,同时具有高的拉曼散射截面.因此将拉曼光谱法引入到蛋白质定量检验中具有检测灵敏度更高,分析速度快等优势.     

几种蛋白质或多肽放射性碘化方法的比较

在放射免疫和放射受体分析中,所要测量的蛋白质或多肽的浓度往往在 pMole 或更低的范围,因此要求放射性配体必需有高比放射性。多肽、蛋白质用 H~3或 C~(14)标记比较困难,最常用的是 I~(131)或 I~(125)标记。后者不仅经济便宜,测量操作简便,而且灵敏度也大大提高。多肽或蛋白质的碘化,要求被标记物的用量少,比放射性高,特别是要保持生物活性。比较熟悉的碘化方法为1.一氯化碘法,2.电解法,3.氯胺-T 法和乳过氧化物酶法。这些方法大多基于蛋白质分子中酪氨酸残基的亲电子碘化作用(为图1所示)。但这些方法存在的共同问题是亲电子碘化作用所要求的氧化条件导致了蛋白质的受     

综合机械化采煤工作面合理长度的确定

用工时消耗研究方法探讨了综合机械化采煤工作面合理长度的确定，并用极值原理证明了端部进刀方式比中部进刀方式有较高的经济效果。     

一种测定大豆蛋白质水解度的简易方法

介绍了一种新的测定大豆蛋白质水解度的方法,G-25色谱层析法。该方法利用快速蛋白纯化系统将大豆蛋白水解多肽溶液进行G-25色谱层析,根据蛋白峰和肽峰面积计算蛋白质的水解度,并与甲醛滴定法进行了比较。结果表明,G-25色谱层析法测定的大豆蛋白水解度略低于甲醛滴定法。该方法快速、简便,可以普遍适用于各种蛋白质水解度的测定。     

新型敏感性水凝胶的研究：Ⅰ.阴离子单体对凝胶温敏性能的影响

合成了以丙烯酸（３－磺酸）丙基钾盐（ＳＰＡＰＳ）及甲基丙烯酸（３－磺酸）丙基钾直盐（ＳＰＭＡＰＳ０两种磺酸盐为阴离子单体的异丙基丙烯酰胺（ＮＩＰＡ）水凝胶,发现其溶一能具有良好的温敏性,且阴离子含量越大,敏感性越强,对应的敏感温度也愈高。     

采区巷道布置方式的选择

本文建立了采区巷道布置方式选择的层次分析模型,介绍了采区巷道布置方式的选择方法,并提出了评判各种采区巷道布置方式的指标体系和参数值的确定方法,可供实际工作参考。     

蛋白质对偶氮氯膦（Ⅰ）的荧光猝灭及其分析应用研究

在pH9.25 Britton-Robinson（B-R）缓冲介质中，牛血清白蛋白（BSA）对酸性染料偶氮氯膦Ⅰ（CPⅠ）的荧光有猝灭，使CPⅠ最大荧光峰从578nm红移至610nm，对荧光猝灭的实验条件进行了优化， 建立了蛋白质定量的线性方程△F = 20.8C-6.8（g/mL），线性响应范围0.04~30.0g/mL、检出限0.031g/mL（r=0.9956），并应用于样品中BSA含量的分析.对荧光猝灭机理进行了探讨，认为两者之间的猝灭是由于生成不发荧光的复合物，属于静态猝灭过程，求得不同温度下的形成常数及热力学函数H、G、S分别为-2.3KJ,-31.2KJ，98.6J，根据热力学函数确定了两者是通过静电作用力结合的.     

中国对虾配合饵料化学评价法的研究

本文对中国对虾配合饵料营养价值的化学评价法进行了研究。评价内容包括必需氨基酸指数(EAAI)、蛋白价(PS)、必需氨基酸比例和必需氨基酸供求比。通过各种分析结果及实际投喂试验的比较,认为利用几个化学指标综合评价,能反映饵料的营养价值,而且具有显著的应用价值,方法较简单,省工省时。     

铊（Ⅲ）—碘化物—碱性三苯甲烷染料在水溶液中的显色反应研究

研究了铊(Ⅲ)与碘化钾和孔雀石绿、灿烂绿及碘绿等三种碱性三苯甲烷类染料形成离子缔合物的显色反应.在较高浓度的磷酸介质中,在阿拉伯树胶存在下,铊与碘负离子形成的络阴离子与上述碱性染料均形成高灵敏的离子缔合物,其摩尔吸光系数分别为2.94×10~5,5.36×10~5和9.2×10~5L·mol~(-1)·cm~(-1),其中孔雀石绿体系灵敏度最高.用乙醚萃取并在掩蔽剂EDTA存在下,方法有较好的选择性,可用于合成水样和天然水中铊的测定.     

无相同类型标准样品下材质的光电光谱法测定

介绍无相同类型标准样品下铁基线材、高铬铸铁及高锰钢的光电光谱定量测定方法。该方法是通过选用分析材质同基体的任一套标准样品绘制校准曲线,采用自编的计算机校正程序,找出试样的光谱分析值和化学分析值之间的关系模型,并将模型拟合到指定的控制样品中,当进行材质测定时,只需在日常标准化操作后将拟合好的控制样品对校准曲线进行控样校正,就可以直接进行无相同类型标准试样的定量分析。该测定方法简单、实用,测定结果基本与化学分析值一致。     

双相不锈钢焊缝铁素体测定及影响因素分析

研究了采用计算机图象分析进行素体含量测定的方法，并对多种类型焊缝进行测定试验。研究结果表明，这种方法较传统的计点法及近年发展的扩展铁素体数法具有更大的优越性。     

蛋白质分析技术的发展趋势

在综述定量测定蛋白质的分析方法的基础上，着重阐述了染料、染料一金属配合物作探针的吸光光度法、荧光光度法以及近几年来兴起的共振瑞利散射法在蛋白质的测定中的应用和发展动态，便于读者参考。