胆汁对体外培养人细粒棘球蚴原头蚴生长发育的影响

目的探讨胆汁对体外培养人细粒棘球蚴原头蚴生长发育的影响。方法将人细粒棘球蚴原头蚴分别加入纯胆囊胆汁组(Ⅰ组)、RPMI-1640+肝内胆汁(2:1)组(Ⅱ组)及RPMI-1640组(Ⅲ组)中体外孵育。0.1%伊红染色在倒置显微镜下观察原头蚴的形态变化、活动度、顶泡形成情况、头节外翻及成囊发育等生长情况。结果Ⅰ组中95%原头蚴在第9天其外观及内部结构完全破坏;其在胆汁的刺激下第1天活动度达60%,约过半数的头节外翻,随着作用时间的延长,在第7天活动度逐渐降低,原头蚴在第6天后其头节外翻处于停滞状态,大部分原头蚴死亡。Ⅱ组中80%原头蚴在第14天仍能观察到清晰的外观及内部结构;该组原头蚴的活动度在第7天开始下降;头节外翻率随培养时间的增加逐渐增加。Ⅲ组中的原头蚴第14天仍可观察到具有较好的外观及清晰的内部结构;活动度随培养时间的延长而逐渐增加;该组中的原头蚴在第4天开始出现顶泡并随时间的延长出现顶泡的原头蚴数量逐渐增加;头节外翻率逐渐增加。通过连续培养观察,Ⅰ组中的原头蚴无成囊发育;Ⅱ组培养的大部分原头蚴体积缩小,头节内陷,仅少量培养的原头蚴成囊发育,大部分原头蚴随培养时间的延长走向死亡;Ⅲ组中原头蚴逐渐向囊方向发育,且数量逐渐增多。结论 (1)纯胆汁不能在短时间内灭活原头蚴,但随着作用时间的延长原头蚴的活性降低;(2)胆汁可以抑制原头蚴的成囊发育,但在胆汁存在环境下仍有原头蚴成囊。     

AZD2014对体外细粒棘球绦虫原头蚴活性影响的研究

目的探讨双TOR抑制剂AZD2014在体外对细粒棘球绦虫原头蚴活性的影响。方法细粒棘球绦虫原头蚴分成6组进行体外培养,其中四组加入AZD2014使其浓度分别为200、100、50、25μmol/L;继续培养10 d,期间利用伊-红染色方法在倒置显微镜下观察原头蚴的活力,实验重复3次后,绘制原头蚴活力曲线;Western-blot检测100μmol/L的AZD2014培养原头蚴4 d后的p-Akt1、p-4EBP1、p-S6K1的表达量;Caspase-3试剂盒检测100μmol/L的AZD2014培养原头蚴4 d后的Caspase-3酶活性。结果 100μmol/L的AZD2014作用4 d后,原头蚴活性开始下降,存活率为(75.93%±7.28%);体外培养10 d后,100μmol/L组原头蚴活力仅为(24.03%±1.01%),200μmol/L组原头蚴活力为(2.40%±1.14%);100μmol/L的AZD2014培养4 d后,原头蚴蛋白因子p-Akt1、p-4EBP1、p-S6K1表达量明显下降;在100μmol/L的AZD2014培养原头蚴4 d后,其Caspase-3酶活性下降。结论 AZD2014在体外具有抗细粒棘球蚴原头蚴的作用,理论上,可做为临床上抗包虫的新型药物。     

大肠埃希菌对细粒棘球蚴活性影响的体外研究

目的 研究细粒棘球蚴与特定浓度大肠埃希菌体外共培养的条件下活性、形态随时间的变化，以及部分参与通路。方法 将羊源性原头蚴重悬计数，分为空白组、0.5麦氏浓度大肠埃希菌组(实验组),并以12、24、48、72、96 h为时间节点，使用0.1%伊红染液按照体积1∶1的比例染色2 min后显微镜下观察并计算两组原头蚴的存活率；使用活性氧试剂盒在上述时间点检测两组原头蚴体内ROS水平；在12、48、96 h分别检测Caspase-3、9;Bax、Bcl-2、Nrf2蛋白的表达水平。结果 实验组原头蚴存活率随时间延长降低，在96 h降至为0%;两组原头蚴体内活性氧检测显示：实验组ROS水平明显提高，12 h最高，差异具有统计学意义(T=11.638,P<0.05),在72 h ROS水平与空白组相近；Western blot实验表明，凋亡蛋白Bax(T=4.997,P<0.05)、Caspase-3蛋白(T=6.118,P<0.05)、Caspase-9蛋白(T=3.435,P<0.05),实验组的蛋白水平大于空白组，有统计学意义。抗凋亡蛋白Bcl-2,实验组的蛋白水平小...     

纳米化阿苯达唑对细粒棘球蚴原头节生长的影响

目的观察比较阿苯达唑粉剂和纳米化阿苯达唑在体外对细粒棘球蚴原头节作用的影响。方法将阿苯达唑粉剂溶解于DMSO后与纳米化阿苯达唑分别配成3.13、6.25、12.5、25μg/m L浓度,按照所设分组体外培养,倒置显微镜下观察各药物处理组经伊红染色后原头节的形态及活力。ELISA试剂盒测定药物作用3、6 d后原头节体内抗氧化酶NQO-1的活性变化。结果将相同条件下阿苯达唑粉剂和纳米环阿苯达唑各浓度组原头节的活力较空白对照组降低。12.5、25μg/m L浓度组纳米化阿苯达唑酶活性变化高于阿苯达唑粉剂组。结论阿苯达唑粉剂和纳米阿苯达唑均有不同程度的体外抗细粒棘球蚴原头节作用;纳米化阿苯达唑在体外抑制细粒棘球蚴原头节生长作用优于普通阿苯达唑粉剂,有望成为治疗细粒棘球蚴病的一种新的剂型。     

促性腺激素对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响研究

通过使用改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入一个腔前卵泡等条件下,探索促性腺激素(FSH、LH)对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响,旨在摸索一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系.结果表明:随着浓度的增加,卵泡和卵母细胞的直径都不同程度的有所增长,在卵泡培养的同期相比,卵泡增长值最大组为FSH400+LH200组,而卵母细胞增长值最大组却是FSH400组.从添加物上看,各个实验组与对照组之间,卵泡直径和卵母细胞直径增长值都存在显著性差异(P0.05).随着培养时间的延长,FSH400+LH200组卵泡存活率、成腔率表现为最高,分别为68.6%,47%.从卵泡发生生发泡破裂率和第一极体排出率来看,FSH400+LH200组发生生发泡破裂率高于其他组,为17.6%,但第一极体排出率却低于FSH400组.因此,改良的TCM199无血清基础培养液中联合添加400mIU/mL FSH和200mIU/ML LH效果优于单独添加组的效果.     

冻融循环对大尺寸陶粒混凝土冲击压缩性能的影响

首次采用卧式Hopkinson束杆装置进行冲击压缩实验，研究了冻融循环试验过程中裂缝发展和动弹性模量变化的规律及冻融循环周次对陶粒混凝土大尺寸试样冲击压缩性能的影响.实验结果表明动态抗压强度随着冻融循环周次的增加而降低，随陶粒体积分数增加而降低，最大抗压强度随加载应变率的增加而增加.     

多电极阵列上长时间培养神经元网络的发育变化

体外培养海马神经元网络的自发活动对于发育研究及学习记忆机制分析具有重要意义. 为了研究体外培养网络自发放电随发育的变化，在多电极阵列芯片上长时间培养海马神经元网络，连续记录分析了培养14周的网络发育过程. 结果显示，网络整体放电频率从培养第1周到第8周逐渐增加，9—14周基本稳定. 对放电模式的分析表明，培养1周内出现自发、低频、不同步的锋电位；4—7周为同步簇发放电，7周出现同步簇发和随机放电混合的复杂模式；9周后为高频随机放电模式，稳定4周以上. 由此推测，高密度培养的神经元网络发育过程可以分为3个阶段，连接建立期、活动协同期和成熟期，同步放电是高密度培养神经元网络发育过程的一个重要现象，其模式表现形式随培养时间改变.     

鹅脱氧胆酸诱导细粒棘球蚴原头节凋亡作用机制的初步研究

目的初步探究鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)诱导细粒棘球蚴原头节凋亡的作用机制。方法采用鹅脱氧胆酸体外处理细粒棘球蚴原头节,0.1%伊红染色,倒置显微镜观察原头节的活力;Caspase-3试剂盒检测其酶活性变化;采用DCFH-DA染色法利用荧光酶标仪检测鹅脱氧胆酸作用2、4 d后原头节内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的荧光强度的变化;western blot技术检测Nrf2蛋白的表达;生物化学法测定细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)和硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase,TPx)酶活性的变化。结果体外应用500、1000、2000、3000μmol/L鹅脱氧胆酸能够抑制原头节体外生长,随着时间的延长,抑制作用逐渐增强;不同浓度鹅脱氧胆酸作用原头节24、48 h后caspase-3酶活性升高,随着时间的延长caspase-3酶活性增加越明显;不同浓度鹅脱氧胆酸作用原头节2、4 d后观察到原头节内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的水平升高(F=1631.77,P0.05),同时western blot检测发现Nrf2蛋白的表达降低(P0.05),并检测到抗氧化物酶谷胱甘肽过氧化物酶(F=756.033,P0.05)和硫氧还蛋白过氧化物酶(F=608.848,P0.05)的活性降低。结论鹅脱氧胆酸诱导细粒棘球蚴原头节凋亡可能是通过氧化应激途径起作用。     

溶剂非溶剂法制备四逆汤微囊研究

该课题组通过溶剂-非溶剂法将四逆汤制备成具有缓释作用的制剂,增加在胃肠道的停留时间,并考察四逆汤微囊体外表征和体外作用。通过溶剂-非溶剂法制备了四逆汤微囊,并通过单因素实验,确定微囊最佳制备方案。考察四逆汤微囊的体外释放。结果:最终确定囊材质量浓度为15%,囊芯与囊材的比为1:15,转速为400r/min,乙酸乙酯与水的体积比为1:5时微囊的包封率最高,可达82.57%;体外释放结果显示,载药微囊在胃液中少量释放,而在肠溶液中可以达到缓慢释放,最终释放率为57.7%。该实验采用溶剂非溶剂法制备了具有缓释效果的四逆汤微囊。     

阔口游仆虫Euplotes eurystomus无性分裂周期中大小核和细胞质的演化

E.eurystomus的无性分裂过程是以大核发生改组为起点的.“3”字形大核的两个末端几乎同时发生“改组带”(reorganization band),并向中间移动,直至相互融合、凝缩,最后经无丝分裂分开成两个仔大核.在大核进行改组不久,小核也开始变化.它首先离开原位朝大核中心位置移动,在移动过程中,原来小核里的结构由致密逐渐变得松散,并不易着色,而且体积膨大并由圆形变成椭圆形,随后出现着色深的线条状结构(染色体),逐渐分开趋向两极,最后分裂成两个仔小核.细胞质在无性分裂周期中明显的变化是不断地增加体积,在大核融合凝缩期间,细胞质的体积逐渐达到最大,以后出现分裂沟收缢,直至分裂成两个仔虫.此外,E.eurystomus在无性分裂过程中,其大核会出现生理意义不明,但可能是培养条件变化而引起的第二次改组现象.     

抗氧化剂对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响研究

通过使用改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入一个腔前卵泡等条件下,探索添加物抗氧化剂维生素C对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响,旨在摸索一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系.结果表明:随着浓度的增加,卵泡和卵母细胞的直径都不同程度地有所增长,其中50μg/m L浓度组在卵泡培养相同时间下,卵泡和卵母细胞的增长值相对于其他浓度组略大些,但各浓度组之间无论是卵泡直径增长值还是卵母细胞直径增长值都不存在显著性差异(P0.05).培养到第6天时,50和100μg/m L浓度组卵泡存活率最高,为59.5%,且50μg/m L浓度组第一极体排出率最高,为2.38%,但发生生发泡破裂率次于150μg/m L浓度组.可得结论:在改良的TCM199无血清培养系统中,添加50μg/m L维生素C有利于腔前卵泡卵母细胞的生长,而添加150μg/m L维生素C有利于生发泡破裂.     

鲤鱼吻端和尾鳍细胞的生长形态及增殖能力比较研究

采用组织块贴壁法,对鲤鱼的吻端和尾鳍进行细胞的离体培养,观察所获得细胞的形态,并总结每种细胞的形态学特点,同时绘制F5代细胞的生长曲线.研究结果表明,在原代细胞培养过程中,鲤鱼吻端细胞生长较快,以上皮样细胞为主,而鲤鱼尾鳍细胞生长较慢,以成纤维细胞居多.传代培养发现,通过控制胰蛋白酶消化的时间,尾鳍组织经2～3代筛选后可获得较纯的成纤维细胞.从F5代生长曲线看出,鲤鱼尾鳍细胞增殖能力略强于吻端细胞,因此鲤鱼尾鳍组织是较适宜的成纤维细胞体外培养材料.     

原代培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响

目的探讨体外培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响。方法采取9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织和癌旁组织及C57/BL6J正常雄性小鼠的正常肝组织进行体外培养,苏木精-伊红染色法检测肝组织在12 d内的生长状态;考马斯亮蓝染色法检测组织中总体蛋白在48 h内的变化趋势;Western blot法检测48 h内培养组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平;RT-qPCR法检测48 h内培养组织中18s RNA、Cyclin D1、GAPDH、UQCRB的mRNA表达水平。结果体外培养6 d内,正常雄性小鼠肝组织、H-ras12V转基因雄性小鼠肝癌及癌旁组织的细胞形态变化相似,存活状态良好。体外培养6 d后,正常肝细胞和癌旁细胞逐渐减少,相比之下,肝癌细胞开始出现大量死亡,但出现少数克隆样细胞团。考马斯亮蓝染色检测结果显示,正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织的总体蛋白变化趋势相似,随培养时间的延长,在130~170 k D之间的蛋白条带丰度先升高再降低,40~130 k D之间的蛋白条带丰度逐渐增加。Western Blot检测结果显示,随着体外培养时间的延长,组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平呈逐渐下降趋势。RT-qPCR检测结果显示,Cyclin D1在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞和GAPDH在正常肝细胞、癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现逐级升高趋势;而GAPDH在肝癌细胞和UQCRB在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现先下降后又逐渐升高的趋势;18s RNA的mRNA表达水平在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中没有规律性趋势变化。结论成年小鼠肝组织及肝癌组织在体外培养期间,虽然肝细胞的形态学变化不明显,存活良好,但短时间内,众多基因在mRNA和蛋白的表达水平上发生了显著的变化,对实验结果将有较大的影响。     

小鼠腔前卵泡无血清体外培养的研究

目的:探索添加物维生素C和促性腺激素对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响及适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系.方法:通过改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入1个腔前卵泡等条件下体外培养腔前卵泡卵母细胞.结果:随着培养时间的延长,各组卵泡和卵母细胞的直径都不同程度的有所增长,其中FSH400+LH200组和VC50+FSH400+LH200影响均大于VC50和对照组,存在显著性差异(P0.05),但二者之间无显著性差异.FSH400+LH200质量浓度组卵泡存活率、发生GVBD率和第一极体排出率均最高,分别为68.6%、17.6%、9.8%.但VC50+FSH400+LH 200组卵泡成腔率最高,为48%.结论:在改良的TCM199无血清培养系统中,联合添加促性腺激素和抗氧化剂后,卵泡成腔率大有提高,卵泡存活率、发生GVBD率和第一极体排出率仅次于单独添加促性腺激素组.     

超微形态学观察氯化三乙基锡抗体外培养大鼠C6脑胶质瘤增殖作用

目的 探讨氯化三乙基锡(TETC)抗体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖作用及观察C6胶质瘤细胞超微形态学变化.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0,0.5,1.0,2.0mol/L TETC作用C6细胞24,48h增殖率.采用透射电镜观察C6细胞超微形态学变化.结果 0.5,1.0,2.0mol/L TETC在体外可抑制C6胶质瘤细胞的增殖,增殖率存在着剂量依赖和时间依赖下降关系.0.5,1.0,2.0mol/L TETC作用C6细胞48h后可见细胞收缩体积变小,胞浆浓缩,细胞核内染色质趋边凝集,排列于核膜内侧,细胞核浓缩碎裂凋亡坏死的超微结构变化.结论 TETC可抑制体外培养C6胶质瘤细胞增殖,其机制可能和凋亡坏死有关.     

轴压比对钢纤维高强混凝土框架节点抗震性能的影响

通过3个钢筋钢纤维混凝土框架边节点的低周反复加载试验和有限元分析,探讨了柱端轴压比对节点抗震性能的影响.结果表明,随柱端轴压比的增加,其对节点核心区混凝土的约束作用逐渐增大,减缓了抗剪承载力和刚度的退化,限制了节点核心区剪切变形,提高了节点核心区的抗剪承载力、延性和耗能能力.在有限元分析中,把钢纤维等效为微钢筋,按钢纤维体积率将其均匀分布在混凝土单元中,与试验结果对比验证了钢纤维与混凝土组成整体式模型方法的合理性.     

球和球柱体的二元随机填充研究

采用组合球模型和松弛算法,模拟了等体积及等直径的球和球柱体二元随机填充.模拟结果表明,无论混合物组份体积分数如何变化,混合填充率均呈现出随球柱体长径比先升后降的趋势,最高混合填充率均出现在球柱体长径比约为0.35处.模拟结果还表明,在等体积条件下,球与球柱体的混合填充率随球柱体体积分数的变化曲线均为近似线性;在等直径条件下,当球柱体长径比较小时,混合填充率变化曲线也呈近似线性;当球柱体长径比大于1.6时,混合填充率随球柱体体积分数的变化曲线逐渐转变为上凸曲线.本文还模拟了不等径球的二元随机填充和球柱体随机填充.其中,不等径球的二元随机填充率与现有填充率预测模型的预测结果一致,球柱体组合球模型与解析模型的随机填充模拟结果吻合.     

复播油葵瘦果籽粒灌浆规律研究初报

油葵瘦果的重量由皮壳和籽仁构成 ,复播油葵在石河子地区籽粒从开始灌浆到成熟持续 36～ 40天 ;皮壳的鲜重随灌浆时间的延长而降低 ,皮壳干重前期逐渐增加 ,成熟前开始下降 ;籽仁鲜重随灌浆时间的延长前期逐渐增加 ,最后一周开始下降 ,籽仁干重增长速度呈“慢—块—较快—慢”的增长规律     

Icotinib hydrochloride对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响

分别应用0(对照组)、5、10、20、40、80μmol·L-1icotinib hydrochloride(盐酸埃克替尼)处理体外培养的人涎腺腺样囊性癌(ACC-M)细胞,形态学观察icotinib hydrochloride作用12、24、48、72、96 h后ACC-M细胞的生长状态变化.用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的icotinib hydrochloride作用不同的时间下ACC-M细胞的增殖抑制率.结果显示,icotinib hydrochloride作用后ACC-M细胞体积变小,胞质皱缩,细胞间隙增大,胞内颗粒增多,贴壁细胞变圆、漂浮.Icotinib hydrochloride抑制ACC-M细胞增殖.     

城市土地利用空间结构分析的尺度效应

以蛇口工业区为例，采用土地利用信息图的方法、引入均质度的概念研究了城市土地利用空间结构，分五种网格尺度讨论了均质度随网格大小变化的规律，研究表明，土地利用的均质度随着划分的网格尺度的变化而相应变化，信息单元的尺度越小，土地利用的均质度也越小．其原因是网格越大，越能掩盖零散分布的细小土地斑块，强化了区域内主要的土地利用类型；相反，随着网格的缩小，小地块的信息就可以逐渐提取出来，提取的土地利用信息变得复杂。