半乳糖化壳聚糖—氟尿嘧啶偶合物纳米给药体系的制备、表征及体外性能研究

以预先合成的半乳糖化壳聚糖—氟尿嘧啶偶合物(GC-FUA)为原料,采用离子交联法制备出了GC-FUA纳米给药体系,并结合单因素分析法筛选出其最佳制备条件为GC-FUA浓度2.0 mg/m L,TPP浓度1.0 mg/m L,p H值4.5,GC-FUA/TPP质量比12∶1.应用SEM、UV等表征该纳米给药体系多呈球形,大小较均一,且具有缓释性能;采用MTT法观察5-Fu、物理包封5-Fu GC纳米粒子、GC-FUA纳米粒子对Hep G2细胞的增殖抑制作用.结果表明三者对Hep G2细胞的增殖具有明显抑制作用,且呈剂量依赖性,GC-FUA纳米粒子作用较5-Fu和物理包封5-Fu GC纳米粒子明显增强.     

壳聚糖-5-氟尿嘧啶微球的制备

为了制备靶向型药物载体系统,采用超声乳化技术,以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为模型药物,液体石蜡为有机分散介质,Span 80为乳化剂,戊二醛为交联剂,对壳聚糖(CS)进行乳化交联,制备了壳聚糖-5-氟尿嘧啶(CS-5-Fu)微球.对超声频率为40 kHz时的制备条件进行了优化,优化条件为:戊二醛用量2 mL,CS浓度1.0%,5-Fu浓度1.0%.采用红外光谱和扫描电子显微镜等对该条件下所得产物的结构和形貌进行了表征,采用紫外-可见光谱对其药物释放性能进行了研究.研究结果表明,CS-5-Fu微球外形为比较规整的球形,粒径在1~4μm之间,分布均匀,包封率为46.7%.在pH=7.2的磷酸盐缓冲溶液中,CS-5-Fu微球在30 h内的累积释药率为60.4%,具有明显的缓释作用.     

5-氟尿嘧啶壳聚糖纳米微球的制备及表征

壳聚糖(CS)作载体,与三聚磷酸钠(TPP)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)发生离子交联反应,制备具有缓释效能的5-氟尿嘧啶壳聚糖纳米微球,并以微球载药量、颗粒大小为指标设计优化了其制备方法,考察不同因数水平对微球的载药量的影响。用傅立叶红外光谱表征了其结构,用激光散射粒径仪测得微球的平均粒径为143~212 nm。氟尿嘧啶壳聚糖微球最大载药量为48.3%,在pH 7.1磷酸盐缓冲溶液中对氟尿嘧啶的缓释作用明显,释放周期较长,药物含量越大,药物从微球中释放出来的速率越快,可作为靶向药物控释体系。     

纳米级载药微泡的制备及其超声介导下的抑瘤研究

具有超声造影剂和药物载体双重功能的聚乳酸(PLA)微泡存在着载药率较低以及不能有效地透过肿瘤组织等缺点.对此,以PLA和卵磷脂为药物载体,采用改良的超声复乳法制备载紫杉醇的PLA-卵磷脂纳米级微泡.考察了卵磷脂对载药微泡理化特性(包括:形态、粒径、载药量、包封率和体外释药特性)的影响,利用X-射线衍射分析(XRD)考察了药物在微泡中的状态,最后在超声介导下对荷瘤小鼠的抑瘤率进行了研究.结果表明,卵磷脂与PLA质量比为50∶250时可制备得到平均粒径615 nm、内部空心的纳米级微泡,药物包封率达(90.90±5.79)%,载药率为(8.26±0.53)%,紫杉醇以无定型状态分布在微泡的壳中.微泡的体外药物释放具有缓释、零级释放以及超声介导加快药物释放的特性,而通过对H22肝癌荷瘤小鼠的实验研究表明,相对于紫杉醇针剂而言,超声介导下载药PLA-卵磷脂纳米级微泡注射剂能减小对小鼠的毒副作用,提高抑瘤率.     

载药果胶基纳米粒子体外HepG2肝癌细胞的靶向性研究

具有良好的生物相容性且生物可降解天然多糖,一直作为药物传递体系,具有如下优点:可延长药物的生物半衰期,减轻药物的毒副作用.本实验旨在制备一种果胶基载5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)纳米粒子(P-5-FU)载药系统,探讨果胶基纳米载药体系本身带有大量的半乳糖残基这种天然靶头对人肝癌细胞HepG2的靶向效果.MTT法测定载药果胶基纳米粒子对HepG2和A549细胞的增殖抑制作用,MTT结果显示P-5-FU对HepG2细胞的增殖具有明显抑制作用,呈剂量依赖性,且作用较5-FU强;而P-5-FU对A549细胞增殖亦有明显抑制作用,呈剂量依赖性,但与5-FU相比无明显差别;高效液相色谱法(HPLC)对两种细胞对载药纳米粒子的摄取情况和靶向性进行了测定.细胞摄取结果显示HepG2细胞对P-5-FU的摄取量较5-FU明显增多,而A549细胞对P-5-FU和5-FU的摄取量没有明显的差别.半乳糖饱和ASGPR结合位点后两种细胞对P-5-FU和5-FU的摄取量都没有明显的差别.结果表明果胶基纳米载药粒子可特异性靶向高表达的细胞.     

非晶态镍-磷-碳-氧合金超细粉体的制备

在固定化学镀镍配方及工艺条件下,采用自制的反应装置研究了制备镍-磷-碳-氧非晶态合金微纳米颗粒的工艺,检测了合金颗粒的形貌与粒径分布;通过理论推导与实验验证得到了粉体制备的相关工艺参数及影响因素.结果表明,粒径的增大与其在镀液的停留时间成正相关性(R=0.2287t+c0);反应液高度H的调控受反应体系多因素的影响,与颗粒半径R存在一定的对应关系:(1)当颗粒沉降为滞流,则H=u2/(16.95?2.12×10?7 u/R2);(2)若颗粒沉降为湍流,则H=u2/(16.95?4.53×10?2 u2/R).镀液的温度与pH值的增大对Ni-P-C-O颗粒粒径的增长起促进作用.但镀液中加入乙醇、或PEG400均能有效抑制Ni-P-C-O颗粒的生长,提高颗粒的分散稳定性;而加入十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),则对纳米粒子的团聚起促进作用.这套简易装置可用作其它微纳米粉体粒径的连续可控制备.     

磷酸钙纳米体系用于顺铂前药的运载

纳米载药体系能促进铂类广谱抗癌药物的运输和增强药效,并保护作为前药的四价铂在到达细胞前不被还原.以磷酸钙纳米颗粒为基础建立了一种生物兼容性高、制备方法简单的四价铂前药运载体系.通过动态光散射、扫描电镜和X射线衍射对颗粒粒径和形貌进行了表征,并研究其细胞摄取效率和细胞毒性.实验结果表明,该纳米载药体系的粒径分布较窄、分散性较好、细胞摄取效率较高,并具有还原响应性,可在胞内还原剂的作用下释放出顺铂,显著提高了四价铂前药对肿瘤细胞的抑制作用.     

医学显影剂四氧化三铁纳米颗粒制备及细胞毒性研究

采用多聚醇法制备出水溶性的超小粒径(USPIO)的Fe_3O_4颗粒,并用羧基聚乙二醇(HOOC-PEG-COOH)和氨基聚乙二醇(HOOC-PEG-NH2)对其进行表面修饰.实验优化了Fe_3O_4纳米颗粒的制备方法,用透射电镜(TEM)观测Fe_3O_4纳米颗粒的晶体粒径.测定磷酸盐缓冲溶液(PBS,p H=7.4)中的稳定分散性.测定Fe_3O_4纳米颗粒和Fe_3O_4@PEG颗粒的r2/r1值.采用MTT法检测纳米颗粒在体外条件下对人肺癌H1299细胞生长的抑制作用,确定其细胞毒性的大小.实验结果显示:Fe_3O_4纳米颗粒,在生理条件下分散稳定且粒径小于5 nm,对H1299细胞的生长没有明显的影响.其粒径、形貌、分散稳定性和弛豫性能符合显影剂要求.     

β-环糊精/聚(L-天冬氨酸)共聚物的制备及载药性能研究

通过乙二胺β-环糊精与聚丁二酰亚胺开环聚合,制备出了新型两亲性共聚物,即β-环糊精/聚(L-天冬氨酸),并用IR和1 H NMR对其结构进行了表征.利用直接水溶法制备了聚合物胶束,通过激光粒度仪对胶束粒径大小进行了测定.利用芘为荧光探针,对其临界胶束浓度进行了测定.以甲氨蝶呤为模型药物,制备了聚合物载药胶束,并且测定了载药量和在缓冲溶液中的对甲氨蝶呤的控制释放能力.结果显示,聚合物胶束的有效粒径为76nm,其临界胶束浓度为3.184×10-3 g/L.该聚合物胶束对甲氨蝶呤的载药量为18.38%,且在缓冲溶液中有良好的缓释效果.     

人转铁蛋白修饰海藻酸钠载阿霉素纳米微球的制备与表征

通过人转铁蛋白修饰海藻酸钠载阿霉素纳米微球制备一种药物载体,拟解决抗肿瘤药物靶向治疗和肿瘤细胞多药耐药产生的问题.用优化的微乳化-离子交联方法制备包覆阿霉素的海藻酸钠复合纳米微球,以水溶性碳二亚胺为交联剂,将载药微球与人转铁蛋白连接,制备出了人转铁蛋白Tf修饰海藻酸钠载阿霉素纳米微球.结果显示其平均粒径为(170±5.12)nm,外观为圆球型,阿霉素包裹量为11.9%,人转铁蛋白的连接量为42.3%的纳米微球,为解决乳腺癌细胞的多药耐药性提供重要的体外实验基础和科学依据.     

Dialdehyde starch nanoparticles as antitumor drug delivery system: An in vitro, in vivo, and immunohistological evaluation

Sustaining the release of therapeutic nanoparticles in a cell-, tissue-, or disease-specific manner is a potentially powerful technology. A new drug carrier-dialdehyde starch nanoparticle (DASNP) that can sustain the loading and release of 5-fluorouracil (5-Fu) antitumor drug is reported in this study. IR spectrophotometer and 1H NMR confirmed the formation of aldehyde groups, and scan electron microscope determinations showed that the dialdehyde starch nanoparticles obtained had an average diameter of 90 nm. 5-Fu, the model drug, was conjugated into nanoparticles by aldehyde groups. These 5-Fu-binding nanoparticles significantly enhanced breast cancer cell (MCF-7) inhibition in vitro compared with free 5-Fu. After subcutaneous 0 injection in the breast tumor-loaded rats, 5-Fu-DASNP exhibited remarkable tumor-inhibitory efficacy determined by measuring tumor weight in vivo. The tumor inhibition of 5-Fu-DASNP was 61%±6%, whereas that of free 5-Fu was only 42%±4%. Bcl-2/Bax immunohistochem-istry studies indicated that 5-Fu-DASNP remarkably induced tumor tissue necrosis. These results demonstrated that the DASNP prepared in this work is a potentially effective drug carrier.     

鸡血藤提取物中缩合鞣质的含量测定及其抗肿瘤活性初步研究

 对鸡血藤/φ=60%醇提物及不同极性溶剂萃取物中总黄酮和缩合鞣质含量进行测定,并测定它们对肿瘤细胞增殖的抑制活性。采用紫外分光光度法测定各样品中总黄酮含量;采用香草醛硫酸法测定各样品中缩合鞣质含量,结果显示,鸡血藤/φ=60%醇提物、乙酸乙酯不溶物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层留余物的总黄酮含量分别为（6.49±1.99）%、（7.36±0.13）%、（9.35±0.22）%、（8.41±0.27）%、（4.48±1.53）%;〖JP〗缩合鞣质含量分别为（5109±0.37）%、（52.34±4.73）%、（73.22±2.72）%、（83.11±5.87）%、（29.74±2.12）%。采用MTT法测定各样品对乳腺癌MCF-7和结肠癌HT-29细胞增殖的抑制活性,结果不同样品对HT-29和MCF-7细胞增殖表现出不同程度的抑制活性,其中正丁醇萃取物对肿瘤细胞增殖的抑制活性最强。     

过表达maspin对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

通过构建maspin表达质粒,在人乳腺癌MCF-7细胞中过表达maspin,研究maspin对MCF-7细胞增殖率及凋亡率的影响.MTT检测实验表明,过表达maspin能够剂量依赖性抑制MCF-7细胞的增殖率.采用TUNEL法和流式细胞术检测maspin对MCF-7细胞凋亡的影响,结果表明过表达maspin可促进MCF-7细胞凋亡进而抑制其增殖.     

功能化介孔二氧化硅微球的药物输送行为分析

介孔二氧化硅(MSNs)作为一类新型的药物载体在药物缓控释领域的应用方兴未艾。采用模板诱导和自组装方法合成MCM-41型介孔二氧化硅纳米颗粒,并通过聚乙二醇(PEG)的表面修饰,制备出一类具有高亲水性、高孔隙率、高比表面积的MSNs修饰微球。采用氮吸附(BET)、扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、粒径分析等手段表征并对比了聚乙二醇(PEG)修饰前后的MSNs基础理化性能。在此基础上,选用阿霉素作为模型药物,包埋于介孔材料中,对比了PEG修饰前后MSNs中阿霉素的装载量、包封率及释放行为。选用乳腺癌细胞MCF-7为模型癌细胞,选用人血清蛋白(HAS)作为模型蛋白,考察了两种材料对细胞的生物安全性及对蛋白的吸附情况,并将两种材料所对应的载药微球与MCF-7进行共培养,探究两种载药系统对癌细胞的灭杀情况。     

PHBV/葡聚糖纳米药物载体的制备及表征

两亲性聚合物纳米颗粒作为疏水性抗肿瘤药物载体因其能够增强化疗效率并降低毒副作用而受到广泛关注.采用双乳液溶剂挥发法制备了聚(3-羟基丁酸酯-co-3-羟基戊酸酯)(PHBV)/葡聚糖纳米颗粒,测得平均粒径为205.0±6.9nm,Zeta电势为-1.59±0.12mV,纳米颗粒具有明显的壳核结构,粒径均一,分散性良好.将疏水性化疗药物顺铂包载后,其粒径及电势均无明显变化,载药量达19.3±2.9%.顺铂在模拟肿瘤细胞环境pH=5.5的磷酸盐缓冲液(PBS)中比正常细胞环境pH=7.4时释放更快,且累计释放周期均长达7d以上,表明该药物载体具有一定的pH响应性以及优异的缓释性能.细胞集落形成实验表明PHBV/葡聚糖纳米药物载体具有良好的生物相容性,而载药纳米颗粒对肿瘤细胞的毒性明显高于正常细胞,表明该纳米颗粒对肿瘤细胞具有更强的杀伤作用.综上所述,PHBV/葡聚糖纳米颗粒具有两亲性分子结构,合适的粒径及Zeta电势,显著的缓释效果,对肿瘤细胞具有pH响应性及更强的杀伤作用等优势,有望成为一种新型纳米药物载体,在癌症化疗中显著提高药物利用率并降低毒副作用.     

聚羟基丁酸酯缓释微粒作用下的埋植给药系统

制备了以壳聚糖水凝胶为基质的温度敏感型、可注射、并能够在体内生物降解的新型皮下埋植制剂,考察了该制剂中水溶性小分子药物的体外释放规律。为降低该类药物的释放速度,首先利用溶剂非溶剂法,以生物可降解的聚羟基丁酸酯为骨架,制备了抗癌药物5-氟尿嘧啶的微粒。在优化配比下,微粒收率达90%以上,包封率95%左右;然后将微粒温敏型水凝胶耦合制成复合给药系统。药物微粒化与温敏型水凝胶的耦合有效地控制了药物植入初期的“突释”问题,并将药物的释放周期延长至将近10个月。     

Visual characterization of targeted effect of holo-transferrin-tagged dihydroartemisinin on human breast cancer cells

Targeted drugs could significantly reduce cytotoxic effect and increase therapeutic activity. Dihydroartemisinin (DHA) has been shown to be effective in killing cancer cells. However, it exhibits non-targeted property. Holo-transferrin (TF) is a suitable drug-carrier to target cancer cells, because cancer cells need iron uptake by the TF-mediated mechanism to maintain their uncon- trolled growth. Furthermore, TF receptors (TF-R) are highly expressed on cancer cell surfaces. In this paper, 3-(4,5-dimethylthi- azol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was used to evaluate the different killing effect of 4-(12-Dihydroart- emisininoxy) Benzoic Acid Hydrozide-transferrin (DBAH-TF) on human breast cancer cells (MCF-7) cells and human normal breast (HNB) cells, and atomic force microscopy (AFM) was used to visually observe the targeted effect of DBAH-TF on MCF-7 cells. MTT results show that DBAH-TF is 172 times more potent than DHA in killing MCF-7 cells, while the cytotoxic effect of DBAH-TF on HNB cells is merely 1/33 to DHA. Also, the killing effect of DBAH-TF on MCF-7 cells is 286 times that on HNB cells, showing targeted effect. Moreover, there are distinct differences in ultrastructures of cellular surfaces after DBAH-TF and DHA treatment. Through AFM imaging, many characteristic holes were observed on the cancer cell surface after being effected by DBAH-TF, which differ from the holes with irregular shapes affected by DHA. These results visually show that the DBAH-TF targeted drug has more potent killing effect on MCF-7 cells compared with DHA.     

PEG-PLGA嵌段共聚物空白纳米粒的冻干工艺筛选

研究采用外观、色泽、再分散性、胶体性、粒径变化及其粒度分布作为指标综合评定,考察PEG-PLGA嵌段共聚物纳米粒冷冻干燥工艺,并研究工艺中冻干保护剂的使用对冻干效果的影响,筛选出适合的冻干方法.实验结果表明,采用麦芽糖作为冻干保护剂,并在浓度为4%条件下所制备得到的纳米粒质量较优良,复水合后采用激光粒度仪测定粒径大小及其分布,平均粒径为255.5±55nm,PDI范围为0.221±0.085.上述实验结果提示,PEG-PLGA空白纳米粒冷冻干燥工艺可以成功制备出质量稳定的冻干纳米粒,为进一步载药研究奠定基础.     

PEG脂质体增强藻蓝蛋白亚基对乳腺癌细胞光毒性的研究

藻蓝蛋白亚基(PCS)是一种低毒并具良好荧光活性的光敏剂.为了增加PCS对乳腺癌细胞的PDT疗效,制备了聚乙二醇修饰的藻蓝蛋白亚基脂质体(PEG-PCS-lip).该脂质体的平均粒径为(136.3±7.6)nm,包封率达到52.1%.在浓度为100mg/L时,PEG-PCS-lip组在MCF-7细胞中的转染率在5h达到(29.1±1.2)%,是PCS-lip组的1.5倍,PCS组的3.1倍.PEG-PCS-lip光动力作用半致死剂量对MCF-7及MA-782细胞分别为(65.4±2.47)mg/L及(70.5±2.95)mg/L.用100mg/L的PEG-PCS-lip进行PDT处理后凋亡率达到了28.5%.与PCS相比,PEG-PCS-lip在血液和肿瘤中比在其他组织中聚集的浓度更高、时间更久,并在注射10h后达到峰值.PCS-PEG-lip-PDT处理组(每千克体重静脉给药10mg,照射剂量为150J/cm2)的肿瘤生长率下降至8.4%,而同时对照组肿瘤大小约增加了两倍.HE组织切片染色和透射电镜观察发现PEG-PCS-lip-PDT组的肿瘤细胞经历了凋亡和坏死.这些数据都表明,相比于PCS和PCS-li...