微量热法研究酪氨酸酶催化氧化反应

在恒温条件下从嗜麦芽假单胞菌中获得酪氨酸酶 ,利用微量热法测定了酪氨酸酶催化氧化酪氨酸反应的动力学性质 ,并得出该反应符合Michaelis -Menten动力学的结论。该方法不需要将酶提纯 ,可以原位测定酶的活性。     

硫代硫酸钠对酪氨酸酶的抑制作用

酪氨酸酶是生物形成黑色素的关键酶,该酶抑制剂在果蔬防褐和色素沉着性疾病方面具有重要的应用前景.对酪氨酸酶抑制剂筛选时,发现硫代硫酸钠对酪氨酸酶有明显抑制作用.用酶动力学方法研究硫代硫酸钠对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的抑制效应,结果表明:硫代硫酸钠对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶均有抑制作用;对单酚酶表现为降低酶稳定态活性,延长酶促反应迟滞时间;对二酚酶活力的抑制表现为浓度依赖关系,其抑制酪氨酸酶活力下降50%的抑制浓度(IC50)为8.80mmol/L.动力学分析表明:硫代硫酸钠对酪氨酸酶的抑制作用为可逆非竞争性抑制,抑制常数为5.674mmol/L.     

L-半胱氨酸对酪氨酸酶的抑制酪氨酸酶催化动力学

L-半胱氨酸对酪氨酸酶活性有抑制作用,随着L-半胱氨酸浓度的增加而酶活不断受到抑制,并且延滞时间也相应延长。相对稳态酶活力则随着L-半胱氨酸浓度的增大而下降。同时,对酪氨酸酶催化反应的影响及作用动力学机理进行了研究,分析延滞时间产生的根本原因,提出了酪氨酸酶的单酚酶将醌转化为多巴黑色素的非酶反应偶联的反应机理,研究其对酪氨酸酶催化反应的影响及作用动力学机理,为酪氨酸酶抑制剂的设计提供分子模板。     

谷胱甘肽、甘露醇对酪氨酸酶的抑制和对O_2~自由基的清除作用

研究酪氨酸酶促反应的抑制对探讨皮肤色素沉着的消失具有临床意义。我们采用光度法和Stemartand Bewley报道的氮兰四唑光还原反应分别对谷胱甘肽、甘露醇对该酶的抑制类型以及对O_2~自由基清除作用进行了研究。试验结果表明:谷胱甘肽、甘露醇对酪氨酸酶的抑制动力学上均属不可逆抑制类型。两种药物对O_2~自由基均有明显地清除作用。这对探讨酪氨酸酶的抑制机理提供了信息。     

苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力的抑制作用

酪氨酸酶(EC 1.14. 18.1)是生物黑色索形成的关键酶.该酶抑制剂在果蔬防褐变保鲜中具有重要的应用前景.在筛选酪氨酸酶活力抑制剂过程中,发现苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,对蘑菇防止褐变具有较好的保鲜效果.报道了苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力和二酚酶活力的影响和抑制作用.结果表明,苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的效应不仅降低了酶促反应的稳定态活性,也延长了酶促反应的迟滞时间,并具有浓度依赖关系.当苯丙酸浓度达10.0 mmol/L时,稳定态活力下降2/3,迟滞时间从100 s延长到140 s;苯丙酸对二酚酶活力的抑制也显爪浓度效应,抑制效果更为显著,引起酶活力下降50％的抑制剂浓度(IC50)为2.05 mmol/L,苯丙酸对二酚酶活力的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,抑制常数(KI和KIS)分别为1.570和3.070 mmol/L.     

甘醇酸对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用

在蘑菇酪氨酸酶抑制剂的筛选实验中,发现甘醇酸对蘑菇酪氨酸酶有明显的抑制作用,可以导致酪氨酸酶的单酚酶活力和二酚酶活力下降,实验结果表明,甘醇酸抑制蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为29.74和1.80 mmol/L.对单酚酶活力的迟滞时间也有明显的延迟效应,30 mmol/L的甘醇酸可以使迟滞时间延长了250%.甘醇酸对二酚酶的抑制作用是可逆过程,抑制类型为混合型.通过动力学分析,测得甘醇酸对游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的抑制常数分别为0.72和5.05 mmol/L,通过研究甘醇酸对酪氨酸酶的抑制作用机理,为进一步研究设计新型酪氨酸酶抑制剂奠定基础.     

用Asmus法测K_m值

在酶的动力学研究中,K_m能看作为表观电离常数,它在生物化学中是用米氏方程测定,只要酶和底物结合生成一个有色中间络合物,则K_m能用Asmus法测定,本文在酪氨酸酶催化多巴的反应中,用Asmus法计算K_m值,其结果与米氏方程式相一致.     

SOD与酪氨酸酶共存时各自的活性

本文采用NBT(氮兰四唑)光还原法,测定了在酪氨酸酶存在下SOD酶的活性,并采用生成DOPA红的方法测定了SOD酶存在下酪氨酸酶的活性.并做了一系列干扰实验,实验结果指出:在酪氨酸酶存在下SOD催化O_2~??+O_2~??+2H~+??H_2O_2+O_2的反应活性降低,而在SOD存在下酪氨酸酶催化DOPA生成DOPA红的反应有明显抑制作用.     

秋茄叶缩合单宁对蘑菇酪氨酸酶的抑制机理

研究了红树植物秋茄叶缩合单宁对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力和二酚酶活力的影响和抑制动力学.结果表明秋茄叶缩合单宁不仅可以降低蘑菇酪氨酸酶单酚酶酶促反应的稳定态活力,也可以延长反应的迟滞时间,并具有浓度依赖关系,随着抑制剂浓度增大,稳定态活力下降,迟滞时间延长.当抑制剂质量浓度达33.00μg/mL时,稳定态活力从100%下降到74%,迟滞时间从32.7s增加到72.9s;秋茄叶缩合单宁对二酚酶的抑制也显示浓度效应,抑制效果显著,引起酶活力下降50%的抑制剂质量浓度(IC50)为30.00μg/mL,其对二酚酶的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,对游离酶的抑制常数(KI)为25.05μg/mL和对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)为46.69μg/mL.本研究揭示了植物秋茄叶缩合单宁作为一种新型酪氨酸酶抑制剂的可能性.     

酪氨酸酶催化氧化羟基吡啶类化合物的反应研究

研究酪氨酸酶催化 2 3_二羟基吡啶氧化反应条件 ,结果表明该催化反应的最适pH值为 8 5 ,最适温度是 4 5℃ ,Km 值为 0 32 2mmol L ,并发现当酶量较低时 ,该催化反应存在一个延迟期。研究还表明酪氨酸酶不能催化 2_羟基吡啶和 4_羟基吡啶的氧化反应。根据实验结果 ,探讨了酪氨酸酶催化 2 3_二羟基吡啶氧化反应的机制。