5种药用植物内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

从樟树、女贞、十大功劳、绞股蓝及荔枝草的叶片、叶柄、茎和枝条等部位分离内生真菌,并以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌为试验菌对分离的内生真菌进行了抑菌活性筛选.结果从5种药用植物中共分离出124株内生真菌,其中37株内生真菌对一种或多种供试菌有抑制作用,高抗菌活性菌株有11株.     

药用植物内生真菌分离及其次级代谢产物生物活性研究

为分离药用植物中内生真菌,从次级代谢产物中筛选对单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶有较高抑制率的提取物.用分块法分离5种植物,马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基纯化内生真菌,液体培养基发酵,用乙酸乙酯萃取菌液,甲醇提取菌丝体,用酶标法检测提取物对单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶的抑制率.共分离得到45株菌,制备了90种提取物,其中5株菌的菌液提取物对单胺氧化酶有不同程度的抑制率,露蕊乌头39(LRWT-39)的菌液提取物对单胺氧化酶的抑制率最高,所有提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制率不高.表明药用植物内生真菌中存在抗单胺氧化酶的活性成分,值得进一步研究.     

博落回内生真菌种类与分布

研究药用植物博落回内生真菌的种类组成、数量及分布规律.从博落回根、茎、叶中分离得到91株内生真菌,分属5个科11个属,青霉属(Penicillium)、曲霉属(A spergillus)为优势菌株,分离率分别为1.06%、0.91%,其次为刺盘孢菌(Colletotrichum),分离率为0.83%.结果表明:博落回器官不同,其内生真菌群落结构及存在的数量有明显差异,其中叶器官内生真菌种类最多;季节对博落回内生真菌的种类及分布也有重要影响.     

神农架四种特色药用珍稀植物内生真菌的多样性研究

药用植物内生真菌是一类具有广泛的应用前景的微生物资源.本研究以神农架的特色药用植物红豆杉(Taxus Chinensis)、珙桐(Davidia involucrata Baill.)、白三七(Panax notoginseng)、七叶一枝花(Paris polyphylla.)为研究对象,利用rDNA-ITS序列对其健康组织的内生真菌多样性进行分析.结果表明,从这4种植物中共分离出97株归属于23个属具有丰富的生物多样性的内生真菌.其中从红豆杉中分离得到内生真菌70株,分属于21个属优势种属是镰刀菌属(Fusarium sp.)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis sp.)和拟茎点霉属(Phomopsis sp.);从白三七中分离内生真菌12株,归属于毛霉属(Mucor sp.)和镰刀菌属(Fusarium sp.),从七叶一枝花中分离内生真菌6株,归属毛霉属(Mucor sp.)、镰刀菌属(Mucor sp.)和青霉属(Penicillium sp.),从珙桐中分离内生真菌9株炭角菌属(Xylaria sp.)、炭团菌属(Hypoxylon sp.)、拟茎点霉属(Phomopsis sp.)、链格孢属(Alternaria sp.)、柄孢壳属(Podospora sp.)、间座壳属(Diaporthe sp.).     

喜讯

正我校胡秋芬教授科研团队成果"52种云南民族药用植物及内生真菌活性成分研究"获2017年云南省自然科学二等奖。该项成果围绕52种少数民族地区特色资源植物及民族药用植物内生菌发酵产物的化学成分开展了深入系统的研究,从中共分离得到1000多个化合物,800多个化合物为首次分离得到(其中新化合物400多个);通过活性筛选发现了30多个活性显著的结构,为新药开发提供了新的药源分子。     

檀香及其宿主植物假蒿根中内生真菌的研究

研究目的：檀香（Santalum口舾“聊Linn．）为檀香科（Santalaceae）檀香属（Santalum）树种,属于常绿半寄生小乔木,其心材为传统名贵中药。檀香与其寄主植物假蒿通过根端的吸盘相连,探讨檀香与其宿主之间内生真菌的关系具有重要意义。创新要点：假蒿（KuhniarosmarinifoliaVent．）是幼龄檀香很好的寄主。目前已经对许多药用植物的内生真菌的分离和鉴定进行了大量研究,但是关于檀香和假蒿之间关系的研究报道较少。本研究首次探讨了檀香及其宿主植物假蒿根中内生真菌的数量和种类,为进一步研究两者之间的关系提供一些有用的信息。研究方法：采用组织块分离法从檀香的根和其宿主植物假蒿的根部材料分离内生真菌,并采用形态学鉴定和分子鉴定手段对分离的内生真菌进行鉴定。重要结论：从檀香的根和其宿主植物假蒿的根中160个组织块中分离和鉴定了共25个真菌类群,其中青霉属真菌Penicilliumsp．1为檀香根中优势菌,镰孢属真菌Fusariumsp．1为假蒿根中优势菌。特别有意思的是两种植物根中没有分离到明显相同的内生真菌。     

杜仲内生真菌的分离鉴定及其抑菌活性研究

从药用植物杜仲中分离到41株内生真菌,综合运用形态特征和分子生物学技术,明确其分类地位,分别属于粗糙脉孢霉(Neurospora crassa)、曲霉属(Aspergillus)、小菌核属(Sclerotium)、盾壳霉属(Coniothyrium)、离蠕孢属(Bipolaris)、白僵菌属(Beauveria)6个属,并进行抗植物病原真菌活性检测,结果表明48.8%的内生真菌对植物病原菌有生长抑制作用,除1株白僵菌属菌株外对G+、G-细菌均有明显的抑菌作用.     

小花棘豆(Oxytropis glabra DC.)11株内生真菌的分离培养及鉴定

用小花棘豆(Oxytropis glabra DC.)单株植物叶和茎切段做外植体,体外分离并培养内生真菌,研究菌落和分生孢子的微生物形态特征,对培养出的内生真菌的5.8SrDNA/ITS区进行扩增及序列测定,序列输入GenBank并与已发表的小花棘豆内生真菌序列进行同源性比对,并利用DNASTAR软件包中MegAlign软件构建系统发育树,结合分子生物学及微生物学研究推测内生真菌所属类群.结果显示:11株小花棘豆内生真菌的菌落和分生孢子的微生物形态特征与埃里砖格孢属真菌Embellisiasp.L12特征一致;小花棘豆内生真菌间ITS1和5.8SrDNA区序列相同,与Embellisiasp.L12相比只有一个变异位点,位于5.8SrDNA区,在ITS2区另有两个变异位点.推测小花棘豆内生真菌应与埃里砖格孢属亲缘关系密切,对其物种种属分类地位还须深入研究.     

飞蓬草内生真菌的分离及抑菌活性研究

以药用植物飞蓬草(Erigeron acer Linn.)为试验材料,利用平板分离法从飞蓬草各器官内共分离出34株内生真菌,其中根部12株、茎部6株、叶部16株,分离所得的菌株根据分子生物学鉴定方法及聚类分析来确定种属,其中曲霉属真菌及青霉属真菌为飞蓬草中的优势菌,并且青霉属为飞蓬草根、茎、叶中拥有的共有属.采用牛津杯法测定其发酵产物抑菌活性,考察34株内生真菌对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、烟草赤星病菌、恶臭假单胞菌、大肠埃希氏菌的抑制作用,结果显示,对指示病原菌抑制效果最强的G5、J2、J4菌株分别为产紫青霉、辐毛鬼伞、莱氏野村菌.研究表明飞蓬草内生真菌具有丰富的多样性,并且对病原菌有较强的抑菌活性,在生物农药和医药领域具有潜在开发应用价值.     

一株产紫杉醇的红豆杉内生真菌的分离鉴定

用组织研磨涂布法对中国红豆杉中产紫杉醇的内生真菌进行分离,得到45株内生真菌;通过形态学和分子生物学手段对一株产紫杉醇的菌株Tax-4进行鉴定,其结果为黑团壳属(Massaria)。表明从中国红豆杉中分离得到了一株产紫杉醇的黑团壳属内生真菌,丰富了产紫杉醇内生真菌的资源。     

大戟科4种植物内生真菌分离与抑菌研究

对大戟科4种药用植物大戟、泽漆、乌桕、重阳木内生真菌进行分离鉴定,并检测其抑菌活性。结果表明:4种植物均含有内生菌,乌桕中获得13株内生菌,鉴定12株,分别属于丝核菌属、小菌核菌属、拟盘多毛孢属、小单头孢属、毛壳菌属、壳小圆孢属、棒盘孢属、交链孢属;京大戟中获得9株内生菌,鉴定8株,分别属于镰刀菌和交链孢属;泽漆中获得6株内生菌,鉴定4株,属于交链孢属;重阳木中获得15株内生菌,鉴定了4株,分别属于小穴壳属、壳小圆孢属、拟茎点霉属。茎中均有内生菌,种子和重阳木叶中均未分离到。总计43株内生菌中有11株有稳定的抑菌活性,占总菌株的25.58%,有12株有不稳定的抑菌活性,占27.91%。用绿豆发芽试验检验表明,仅有1株菌在绿豆幼苗上形成病斑,其余均生长良好,且21株表现出对绿豆芽的促进作用。     

Illumina高通量测序分析百合内生真菌群落多样性

百合具有较高的药用食用价值,研究发现它的许多内生菌代谢产物有进一步开发利用的潜能,深入了解百合内生真菌群落结构与多样性,有助于发现新菌种以及具有特定功能的内生菌代谢产物。以ITS区的rDNA为靶标序列,采用Illumina MiSeq测序技术分别对百合叶片(bhy417)、百合茎秆(bhj417)和百合地下鳞茎(bhl417)三个样品的内生真菌群落结构组成和多样性进行测定分析。经过分析有以下结果:三个样品共得到用于后续样品分析的436394条有效序列和122205709个碱基;样品bhy417的内生真菌群落丰富度最大;三个样品之间的内生真菌群落多样性差异不显著、群落结构不同;球腔菌属Mycosphaerella、外囊菌属Taphrina、炭疽菌属Colletotrichum、散斑壳属Lophodermium、壳二孢属Ascochyta、Zymoseptoria属、Catenulostroma属、Phaeophleospora属、Endoconidiophora属、Hormonema属、乌氏霉属Uwebraunia、Capnobotrylla属、丛赤壳属Neonectria、长毛盘菌属Trichophaea等在样品中丰度较高。FUNGuild功能预测结果显示,百合内生真菌包括以下功能菌群:植物病原菌、动物病原菌、腐生菌、未定义腐生菌、内生菌、木材腐生菌、地衣寄生菌等。研究结果表明百合有丰富的内生真菌定殖,其中的植物病原菌以及一些目前还未鉴定出来的菌将可能对百合生防菌以及具特定功能代谢产物的研发提供帮助。     

4种裸子植物内生真菌抗肿瘤菌株的筛选

使用组织块法，从罗汉松、南方豆杉、三尖杉及银杏中分离到112株植物内生真菌；为了得到高活性抗肿瘤菌株，我们使用卤虫（Artemia Sailina）模型进行初筛，得到39株（LD50＞8）高活性菌株（占总分离菌株的34．8％），利用MTT法对具有杀卤虫活性的菌株进行复筛，结果显示9株菌株（占总分离菌株的8．0％），对KB或HL－60细胞具有显著的抑制作用（ID50为80－7290）。罗汉松、南方红豆杉、三尖杉内生真菌的抗肿瘤活性菌株分别占分离菌株的7．4％、11．1％、8．3％，这显示了药用裸子植物内生真菌在抗肿瘤生物活性物质的研究与应用中具有重要的价值。作者还对抗肿瘤筛选的卤虫模型和MTT模型组合应用进行了有益的探讨。     

大狼把草内生真菌多样性研究

为了解我国入侵植物大狼把草(Bidens frondosa)内生真菌群落结构与分布规律,通过采样、组织分离、培养与鉴定,对大狼把草内生真菌多样性进行了分析.结果表明:大狼把草内生真菌种类丰富,有真菌19种.其中,产孢真菌有11属17种,全为半知菌,未产孢真菌2种,优势内生真菌为刺盘孢菌(Colletotrichumsp.)、拟茎点霉1(Phomopsissp.1)和链格孢菌(Alternariasp.).大狼把草内生真菌分布普遍,组织总定殖率为51.0%,其中,叶部定殖率大于茎部,幼茎定殖率小于老茎,从叶基至叶尖其组织内生真菌的定殖率逐渐递减.宿主植物生境与组织类型对内生真菌的组成与分布有重要影响.     

青风藤内生真菌 QT-NJ-10化学成分研究*1

目的：研究青风藤（Caulis sinomenii）内生真菌 QT-NJ-10的化学成分。方法以青风藤（Caulis sinomenii）作为宿主植物,分离得到青风藤的内生真菌。通过培养基优化,最终以其中一株内生真菌 QT-NJ-10为供试菌株,经过大批发酵,得到乙酸乙酯相粗提物。通过多种现代色谱手段对粗提物进行单体化合物的分离,单体化合物再利用核磁共振波谱手段（1 H-NMR,13 C-NMR,HSQC,COSY和 HMBC 等）鉴定其结构。结果通过分离、纯化、培养基优化,对其中之一 QT-NJ-10菌株再进行大批发酵,提取、分离,多种分析方法表征结果显示,所得化合物为 eremofortine C-1。结论对于以青风藤（Caulis sinomenii）作为宿主植物,分离纯化得到青风藤的内生真菌的其它成分以及 eremofortine C-1的生物活性,均有待进一步深入研究。     

水稻内生真菌类群分析及其颉抗病原菌活性研究

采用常规方法对广东省番禺和五山两地种植的水稻内生真菌进行分离、鉴定和比较分析,结果表明两地水稻内生真菌的优势菌群为镰刀菌Fusarium spp..同一地区从感病品种和生长不良水稻植株中分离出内生真菌种类相对丰富.水稻根和茎叶中分离出内生真菌的种类有差异,叶片中内生真菌的多样性高于根部,一些内生真菌的分布呈现出器官特异性.通过平板颉抗试验,发现分离到的内生真菌中有41.2%表现出不同程度的抗水稻病原菌活性,其中镰刀菌Fusarium spp.的比例最大.一些内生真菌的抗病原菌活性与产生铁载体有关.     

空心莲子草内生真菌多样性研究

通过采样、组织分离、培养和鉴定,对入侵植物空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)内生真菌的种类组成、分布规律及其生物多样性进行了初步研究.结果表明:空心莲子草内生真菌种类丰富,从茎、叶中共分离得到16种内生真菌.产孢真菌有12属15种,非产孢真菌1种.产孢真菌全部为半知菌.曲霉1(Aspergillus sp.1)、曲霉2(Aspergillus sp.2)、刺盘孢菌(Colletotrichum sp.)、大茎点霉(Macrophoma sp.)、弯孢霉菌(Curvularia sp.)在供试的各种组织均有分布,且分离率较高,是空心莲子草的优势内生真菌.内生真菌广泛分布于各种组织,总定殖率为81.5%,老茎组织定殖率最高,达90.9%.生境及组织类型对空心莲子草内生真菌的群落结构及定殖率有重要影响.     

石耳目地衣内生菌的系统发育学分析

从采自中国和美国的13种石耳目地衣的21份标本中分离得到了33株黑化真菌。基于ITS序列的系统发育分析表明,这33株真菌全部是属于[WTBX]Capronia[WTBZ]属的成员,可能分别属于12个种。分析结果还发现,这些真菌可能是地衣体中广泛而稳定定植的内生菌,其与宿主菌之间存在着一定程度的选择性,同种内生菌的不同成员可能在同一地衣体中先后多次定植。这些内生菌株中的多数是自由生活的石生真菌的近亲,而不是植物内生菌在地衣体中的延伸者。