应用PCR技术检测α－地中海贫血SEA型携带者

ＳＥＡ型α—地中海贫血症在东南亚地区很普遍，在我国广西壮族自治区，发病率也很高．应用跨越ＳＥＡ型５＇端和３＇端缺失断裂点的三个引物进行ＰＣＲ扩增，在有该缺失的染色体上扩增一条１９４ｂｐ的特异条带，在无该缺失的染色体上扩增一条２８７ｂｐ的特异条带，可以清楚地区分ＳＥＡ型缺失杂合子、纯合子和正常个体．检测４０例α—地中海贫血症患者的结果表明：ＳＥＡ型缺失杂合子２８例（７０％）、ＳＥＡ型缺失纯合子１例（２５％）、非ＳＥＡ型缺失携带者１１例（２７５％）．实验证明，在ＳＥＡ缺失的高发区，此法在临床上具有实际应用价值．     

应用PCR-斑点杂交方法进行β地中海贫血产前基因诊断

从１９８９年以来，我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和等位基因特异寡核苷酸斑点杂交（ＡＳＯ－ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ）技术对６０例β地中海贫血高危胎儿进行产前基因诊断。结果查出β地中海贫血纯合子６例、双重杂合子８例、杂合子２７例．其余１９例为正常胎儿。ＰＣＲ－ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法准确可靠，尤其适合于β地中海贫血的产前诊断。     

α—珠蛋白基因的PCR检测

用多对引物的复合ＰＣＲ技术，分别扩增α－珠蛋白基因族中α１和α２基因片段；参照β－珠蛋白基因ＰＣＲ扩增产物量，判断α１和α２基因是否正常，是否为缺失的纯合子或杂合子，对α－地中海贫血症先征者家系基因型进行ＰＣＲ分型诊断。     

桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶原基因的初步研究

从桂北五步蛇毒腺中抽提蛇毒总ＲＮＡ,采用一步法（ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＲ在同一试管内进行）扩增纤溶酶金属蛋白酶原基因,并进行电泳检测,可见３条特异的ＤＮＡ条带,分别约为１．５Ｋｂ、１．３Ｋｂ和８００ｂｐ,利用平端连接的方法将其中的８００ｂｐＰＣＲ产物克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体,挑选白色菌落,用酶切和ＰＣＲ法对其进行鉴定。     

牛α—s1酪蛋白基因3‘端DNA的PCR扩增,克隆及鉴定

本研究以牛血总ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ技术扩增牛α－ｓ１酪蛋白基因的５＇端３．６ｋｂＤＮＡ片段和３＇端１．５ｋｂＤＮＡ片段的调控区序列，得到了相应的特异性扩增片段．用Ｋｌｅｎｏｗ处理后，将两个扩增片段分别与经Ｓｍａｌ酶切的ｐＵＣ１８质粒载体用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化大肠杆菌ＪＭ１０９．在含有Ｘ－ｇａｌ，ＩＰＴＧ和Ａｍｐ的选择培养基上培养．从白色菌落中提取质粒ＤＮＡ，进行限制酶切鉴定．结果得到一个插入有１．３ｋｂＤＮＡ片段的阳性克隆．对其进行部分序列分析表明，该片段为５＇端缺失约１７０ｂｐ的牛α－ｓ１酪蛋白基因３＇端及下游区序列．     

日本脑炎病毒（JEV）内蒙古分离株M73—1E基因的5′端？…

根据国外报道的ＪＥＶ（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）基因组全序列,针对ＪＥＶ Ｅ基因５′端设计合成一对特异引物,以日本脑炎病毒内蒙古分离株Ｍ７３－１ＲＮＡ为模板,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增,获得３６６ｂｐ的ＪＥＶ Ｅ基因ｃＤＮＡ片段。将此片段重组于质粒ｐＵＣ１９中,并转化大肠杆菌ＤＨ５α,经ＰＣＲ扩增,酶切及序列分析,结果表明ＪＥＶ Ｍ７３－１ ５′端１２６个核苷酸序列与ＪＥＶ日     

人白血病仰制因子基因在酵母中的融合表达

用ＰＣＲ突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失，并与质粒ｐＰＩＣＺαＡ上的ｍｙｃ表位及６个组氨酸处于同一读码框，构建融合表达载体ｐＰＩＣＺαＡ－ｈＬＩＦＭ．通过氯化理化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母Ｘ－３３的基因组ＤＮＡ中。转化子经甘油增菌和甲醇诱导，实现了ｈＬＩＦ基因在毕赤酵母表达载体系统中的表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明在相对分子质量为６１ ０００处有一条人白血病抑制因子特异蛋白带．凝胶薄层扫描分析结果显示表达的目的蛋白占培养液上清总蛋白的 ３３．３％．且该表达产物具有抑制小鼠畸胎瘤细胞Ｆ９克隆形成的活性．     

腺病毒同源重组子的鉴定

携带入ＩＦＮ－γｃＤＮＡ序列的Ｅ１区缺失的腺病毒载体ｐＡｄｌ２／ＲＳＶ－ＩＦＮ－ｂｐＡ与ｐＪＭ１７质粒，通过磷酸钙沉淀法共转染２９３细胞，经同源重组，共获得６个病毒噬斑。病毒噬斑感染２９３细胞，至出现完全细胞病变效应（ＣＰＥ）后，抽提细胞内的病毒ＤＮＡ，经ＸｈｏⅠ酶切后走凝胶电泳，出现重组腺病毒圾的３．５ｋｂ大小的ＤＮＡ条带，＾３２Ｐ标记的探针ｐＡｄｌ２／ＲＳＶ－ＩＦＮ－ｂｐＡ与ＸｈｏⅠ酶切过的病     

牦牛乳蛋白多态性的研究

采用ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析牦牛乳清蛋白、酪蛋白多态性，结果表明：牦牛酪蛋白ＰＡＧＥ呈现出κ－ＣＮ、β－ＣＮ和υｓ１－ＣＮ三条带型；乳清蛋白ＰＡＧＥ呈现ＬＦ、ＳＡ、Ｉｇ－Ｌ和β－Ｌｇ四条带型；乳清蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现υ－Ｌａ、β－Ｌｇ、Ｉｇ－Ｌ、Ｉｇ－Ｈ、ＳＡ和ＬＦ六条带型。以上电泳分析均未发现乳蛋白各基因座多态性。     

利用RAPD技术检测精神病患者基因组DNA

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术检测了１６例精神分裂症,１６例情感性精神障碍患者的基因组ＤＮＡ。结果表明：引物ＯＰＡＹ１７在扩增基因组中,情感性精神障碍４条带（５１５．５,６０６．８,９４７．２和１８２７ｂｐ）,精神分裂症３条带（５１５．５,６０６．８和９４７．２ｂｐ）,而正常人仅扩增出１条４２６．７ｂｐ的条带,５１５．５ｂｐ的条带有可能是精神分裂症和情感性精神障碍的特异性标记,１８２７ｂｐ的条带有可能是情感性精神障碍的特异性标记。     

常见的缺失型α地中海贫血2的基因检测

应用聚合酶链反应技术检测缺失型α地中海贫血－２。特异性引物选择性扩增α２和α１基因,ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳后即可对－α３．７和－α４．２缺失型作出基因诊断。此方法简便,快速和可靠。本研究为在缺失型α地中海贫血－２高发区进行－α３．７和－α４．２缺失型的筛查和产前诊断提供了一个新的方法。     

人胰岛素原乳腺表达载体的构建

通过ＰＣＲ方法扩增了人胰岛素（ＨＩ）基因１．３４ｋｂ的ＤＮＡ片段并克隆于ｐＵＣ１８的ＳｍａⅠ位点内。经ＤＮＡ序列分析表明，该片段为ＨＩ基因的氨基酸编码区及３＇端调控区序列。同时，应用ＰＣＲ方法对牛α－乳白蛋白（ＢαＬＡ）基因进行了扩增，得到了０．８４ｋｂＤＮＡ扩增片段。将其克隆于去除了ＥｃｏＲＩ位点的ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点内，经内切酶分析和ＤＮＡ测序证明该片段是ＢαＬＡ基因５＇调控区序列。ＥｃｏＲ     

花生(Arachis hypogea L.)体细胞胚胚性特异蛋白的研究

花生萌发３ｄ的胚叶在诱导培养基上出现高频率的体细胞胚发生．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明：在体细胞胚发生过程中，诱导第三天开始出现３条新的蛋白谱带，７ｄ后出现２条新带，１５ｄ后又出现３条；而在非胚性组织中检测到抑制性的特异蛋白条带．     

猪瘟病毒HCLV株E2核苷酸序列与结构分析

用ＲＴ－ＰＣＲ技术从ＣＳＦＶ ＨＣＬＶ株Ｆ４８２代感染兔脾的细胞总ＲＮＡ中分段扩增出ＣＳＦＶ Ｅ２基因特异的３个部分重叠的ＤＮＡ片段,并将之分别克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经核苷酸序列测定和片段重叠完成了包含Ｅ２全长基因的１１４４ｂｐ序列的测定,其ＧＣ含量为４９．０％,核苷酸序列与国外报道的各株病毒的Ｅ２基因同源性分别不８３．５％＿９７．５％．     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

天蚕素A- 蜂毒素杂合肽基因的克隆*

杂合肽天蚕素（１－７）蜂毒素（５－１２）是一个只有１５个氨基酸残基的短肽，是具有疏水性Ｃ－端和亲水性Ｎ－端的双性分子．它的分子大小只相当于天蚕素Ａ的４０％，而抗菌活性相当于完整天蚕素，或更高．本文根据其氨基酸顺序设计一个４５ｂｐ的杂合肽基因，通过接头克隆到载体ｐＶＴ１０２－Ｕ上，在酵母中表达，用比浊法初步测定表明表达产物具有抗Ｅ．ｃｏｌｉＤ３１活性．     

花生（Arachis hypogeaL.）体细胞胚胚性特异 …

花生萌发３ｄ的胚叶在诱导培养基上出现高频率的体细胞胚发生。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明：在体细胞胚发生过程中,诱导第三天开始出现３条新的蛋白谱带,７ｄ后出现２条新带,１５ｄ后又出现了３条;而在非胚性组织中检测到抑制性的特异蛋白条带。     

类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体基因的克隆与鉴定

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术,从大肠杆菌ＴＢ１中扩增出类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体（ＳＬＴⅡｅ）的Ａ亚单位基因（ｓｌｔ－ⅡｅＡ）的９６０ｂｐ的编码序列和Ｂ亚单位基因（ｓｌｔ－ⅡｅＢ）的１０７ｂｐ的编码序列,将这两个ＰＣＲ扩增产物在ＥｃｏＲ１和ＢａｍＨ１位点分别克隆进ＰＵＣ１８质粒载体,并转化到大肠杆菌ＴＧ１中,再根据生内切酶酶切分析筛选到含有ｓｌｔ－ⅡｅＡ的重组质粒Ｐ１８ｓｌｔ－ⅡｅＡ和含有ｓｌｔ－     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

α－球蛋白基因缺失的DNA扩增指纹图谱法分析

应用计算机辅助设计，选择α－珠蛋白基因簇中断裂好发部位或其外侧一致ＤＮＡ序列设计引物，在包含低温退火的条件下，扩增并分析α－珠蛋白基因缺失的ＤＮＡ指纹图谱，并据此对６１例α－地中海贫血病人进行了基因分型诊断．该方法稳定、可靠，可望用于临床诊断．