黄参多糖对四氧嘧啶损伤胰岛细胞的保护作用

以离体培养的大鼠胰岛β细胞为研究对象,探讨黄参多糖的降血糖作用及可能机制。用四氧嘧啶损伤胰岛细胞建立糖尿病损伤模型,以不同浓度的黄参多糖作用于四氧嘧啶损伤的胰岛细胞,用MTT法测细胞存活率;放射免疫法检测葡萄糖刺激性胰岛素分泌量的变化;用比色法检测胰岛细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)指标的变化。结果表明黄参多糖可以减少四氧嘧啶对胰岛细胞的损伤,增加细胞存活率;在2.8mmol·L-1、16.7mmol·L-1葡萄糖刺激下,黄参多糖剂量依赖性地促进了胰岛素分泌;黄参多糖能使胰岛细胞的MDA含量减少,同时增强了SOD的活性。总之,一定浓度范围的黄参多糖对损伤胰岛细胞的保护作用可能与黄参多糖能够增加细胞清除自由基能力,提高细胞存活率,促进胰岛素分泌量有关。     

C肽释放试验、谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞自身抗体的测定在糖尿病诊断中的临床意义

目的 探讨C肽释放试验、谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞自身抗体的测定在糖尿病诊断中的临床意义.方法 采用放射免疫分析法(RIA)检测30例Ⅰ糖尿病(DMⅠ)患者及50例Ⅱ型糖尿病(DMⅡ)患者的C肽释放试验、谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞自身抗体.结果 谷氨酸脱羧酶抗体阳性率DMⅠ患者为73.3%,与DMⅡ患者为12%相比,显著增高(P<0.01);DMⅠ患者C肽释放试验、胰岛细胞自身抗体水平平均显著低于DMⅡ患者(P<0.01).结论 谷氨酸脱羧酶抗体是胰腺β细胞功能损伤的一个预测指标,结合C肽释放试验、胰岛细胞自身抗体的测定有助于对糖尿病的诊断与疗效监测.     

链球菌制剂对NOD鼠胰岛瘤细胞株NIT生长影响的体外研究

为了研究A群溶血性链球菌制剂对NOD鼠胰岛细胞瘤细胞株NIT体外生长的影响,利用不同浓度的制剂处理体外培养的NOD鼠胰岛细胞瘤细胞株NIT和正常小鼠胰岛β细胞,以不加药物的培养孔作为对照来对细胞进行形态学观察.以MTT法检测细胞活性,经Agarose gel电泳分析DNA ladder条带检测凋亡,结果表明：A群溶血性链球菌制剂能显著抑制NIT细胞增殖,而对正常胰岛β细胞没有影响,且该制剂有促NIT细胞凋亡的作用.     

人类巨细胞病毒感染致1型糖尿病机制的初步探讨

目的通过对1型糖尿病患者的HCMV感染标志物、空腹血糖、空腹C肽、胰岛素自身抗体及抗胰岛细胞抗体的研究,初步探讨HCMV致1型糖尿病的机制。方法检测1型糖尿病患者的HCMV感染标志物（包括HCMV—IgG及其相对含量、HCMV—IgM及HCMV—pp65）、空腹血糖、C肽、抗胰岛素自身抗体及抗胰岛细胞抗体并进行统计学分析。结果HCMV感染与1型糖尿病患者抗胰岛素自身抗体之间无明显相关性,但与1型糖尿病患者空腹血糖、空腹C肽、抗胰岛细胞抗体存在明显的相关性,HCMV—pp65阳性的1型糖尿病患者中其空腹血糖明显高于该指标阴性者;抗HCMV—IgG阳性的1型糖尿病患者空腹血糖水平、抗胰岛细胞抗体均显著高于抗HCMV—IgG阴性者,而空腹C肽水平则明显低于抗HCMV—IgG阴性者,且抗HCMV—IgG抗体指数在4．1以上者,其抗胰岛细胞抗体阳性率显著高于抗HCMV—IgG抗体指数在4．0以下者。结论HCMV感染可能通过直接损伤胰岛免疫病理反应损伤胰岛细胞最终导致1型糖尿病的发生。     

大鼠胰岛β细胞原代培养的一种实用方法

以Ｖ型胶原酶分离胰腺得到胰岛，在ＥＧＴＡ预处孵育后以低浓度的胰蛋白酶和ＤＮａｓｅⅠ酶联用消化胰岛建立了大鼠胰腺β细胞的分离及原代培养方法。     

FTO过表达对小鼠胰岛β细胞功能的影响以及全基因组表达谱变化研究

为了研究肥胖基因FTO过表达对小鼠胰岛β细胞功能的影响以及基因表达谱的变化,构建小鼠FTO基因过表达慢病毒载体,包装慢病毒颗粒并感染小鼠胰岛MIN6细胞.利用QPCR和WesternBlot技术检测FTO基因在MIN6细胞中过表达情况,并检测葡萄糖刺激检测胰岛素的释放情况,进一步利用小鼠全基因芯片检测FTO过表达对小鼠胰岛MIN6细胞表达谱的影响.结果表明：慢病毒载体成功介导了FTO在MIN6细胞中过表达,FTO过表达可以显著抑制MIN6细胞的胰岛素释放.表达芯片的结果显示FTO改变MIN6细胞表达谱,发现多达922个的差异基因.FTO过表达改变了小鼠胰岛细胞的表达谱,差异基因通过一些重要信号通路影响小鼠胰岛β细胞的生物学功能.     

雷帕霉素对高糖高脂诱导的MIN6细胞铁死亡的研究

目的 探讨自噬诱导剂能否通过激活自噬减少高糖高脂诱导的小鼠胰岛β细胞铁死亡。方法 选取小鼠胰岛瘤MIN6细胞，通过25 mmol·L^-1高糖联合200μmol·L^-1棕榈酸钠(high Glucose and high Sodium Palmitate, GP)干预，建立胰岛β细胞损伤模型，在此基础上给予雷帕霉素(rapamycin, RAPA)及铁死亡诱导剂(erastin, Era)干预24 h后，用CCK8检测细胞活力；用试剂盒检测细胞亚铁离子、谷胱甘肽(glutathione, GSH)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)及活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平；Western blot检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4 (acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACS...     

大鼠胰岛β细胞原代培养的一种实用方法

以Ｖ型胶原酶分离胰腺得到胰岛，在ＥＧＴＡ预孵育后以低浓度的胰蛋白酶和ＤＮａｓｅＩ酶联用消化胰岛，建立了大鼠胰腺β细胞的分离及原代培养方法．反复实验表明（ｎ＝１０），所获得的细胞表面光洁、完整、呈球形，功能正常，能对生理剌激物迅速反应，适用于通常的单个细胞的电生理学实验．     

银杏叶提取物抗氧化及其抗胰岛RIN-mβ细胞凋亡的作用

目的:探讨银杏叶提取物(EGb761)的抗氧化及其抗过氧化氨(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的作用.方法:以500μmol/L H2O2作用于胰岛RIN-mβ细胞6 h建立凋亡模型;采用荧光探针DCFH-DA法进行活性氧检测细胞内氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的变化,NO测试试剂盒检测细胞N0释放的变化,Annexin V-PI双染色法流式细胞术分析细胞凋亡情况.结果:经H2O2损伤诱导凋亡后,细胞存活率降低,凋亡率增加,细胞产生NO减少,活性氧ROS增多.与阴性对照组相比,EGb761能清除ROS,增加NO,改善凋亡情况,且作用呈剂量依赖性.结论:EGb761对β细胞凋亡有显著保护作用,其机制可能与其清除氧自由基等作用有关.     

山药多糖对体外培养大鼠胰岛细胞活性及胰岛素分泌的影响

为评价山药多糖对胰岛细胞功能的影响,以不同质量浓度葡萄糖刺激胰岛素释放,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胰岛β细胞活性,同时以反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰岛细胞的抗凋亡基因bcl-2的表达,研究山药多糖与大鼠胰岛细胞共培养对胰岛细胞活性与胰岛素分泌水平的影响,并对其影响机制进行探讨.结果发现,1600 mg/L组胰岛细胞活性稍有下降,但是与对照组没有显著差异(p0.05);其余各组随培养液中山药多糖质量浓度的增加,胰岛细胞活性增加.低糖或高糖质量浓度环境中实验组与对照组的胰岛素分泌没有显著差异(p0.05),RT-PCR发现实验组的bcl-2表达显著高于对照组(p0.05).800 mg/L山药多糖明显提高胰岛细胞的存活率,改善胰岛功能.     

Ⅰ型糖尿病基因免疫治疗研究

Ⅰ型糖尿病是由T细胞介导自身免疫性疾病,由胰岛β细胞免疫破坏所致.其基因免疫治疗主要包括诱导免疫耐受、改变抗原提呈细胞的功能及活性、改变免疫调节细胞因子、干扰协同刺激信号和调节细胞凋亡.     

雷公藤红素抑制大鼠胰岛细胞功能损伤研究

研究雷公藤红素(Celastrol)对大鼠胰岛细胞(INS-1)在炎症通路中功能损伤的恢复作用,并探索其分子药理学机制.通过MTT检测不同浓度Celastrol对炎症侵润下INS-1细胞的活性影响,利用免疫荧光技术观察INS-1细胞凋亡变化.采用钾离子刺激的胰岛素分泌(KSIS)来检验INS-1细胞分泌胰岛素的功能.ELISA检测INS-1细胞处理前后NO的分泌情况.结果发现,低浓度状态下Celastrol(100~300nmol/L)对有IL-1β引起的INS-1细胞凋亡有一定的保护作用,并且能显著改善INS-1的功能,INS-1细胞内NO分泌降低.研究结果表明Celastrol对INS-1细胞中NO分泌的抑制可能是其抑制INS-1细胞炎症状态下功能损伤的机制之一.     

α-硫辛酸对高糖诱导下小鼠胰岛细胞功能的影响

目的:研究α-硫辛酸对高糖损伤下小鼠胰岛功能的影响.方法:体外培养小鼠胰岛细胞NIT-1,将细胞分为6组,空白对照组,高糖作用组,α-硫辛酸作用组(浓度分别为50,100,200,300μmol/l),对它们的6,12,24h的细胞活性、24h的氧化还原指标SOD活性、GSH-Px含量、MDA含量进行测定.结果:高糖可以使胰岛细胞活性下降、SOD和GSH-Px浓度下降、MDA含量增加,α-硫辛酸组可以明显抑制高糖引起的胰岛细胞的上述变化,抑制作用随α-硫辛酸浓度的增加而增强.结论:抗氧化剂α-硫辛酸对高糖引起小鼠胰岛素细胞的损伤有一定的保护作用,且有一定的浓度依赖性.     

非酒精性脂肪肝患者的胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的临床研究

目的 探讨非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗性的特征.方法 研究对象根据75 g口服葡萄糖耐量试验及超声的结果分为2组,对照组:60例糖耐量正常者, NAFLD组:60例糖耐量正常NAFLD者.采用HOMA-IR和Matsuda指数(MI)评估胰岛素抵抗性,采用HOMA-β、早相及晚相胰岛素分泌指数评估胰岛β细胞功能.结果 NAFLD组的HOMA-IR均高于对照组(P ＜ 0.05), NAFLD组的MI均低于对照组(P ＜ 0.05);NAFLD组的早相胰岛素分泌指数低于对照组(P ＜ 0.05),NAFLD组的HOMA-β及晚相胰岛素分泌指数与对照组相比均无显著性差异.结论 糖耐量正常NAFLD患者存在胰岛素抵抗,其胰岛β细胞早相胰岛素分泌已受损.     

Ⅰ型糖尿病基因免疫治疗研究

I型糖尿病是由T细胞介导自身免疫性疾病，由胰岛β细胞免疫破坏所致．其基因免疫治疗主要包括诱导免疫耐受、改变抗原提呈细胞的功能及活性、改变免疫调节细胞因子、干扰协同刺激信号和调节细胞凋亡．     

国际新闻

世界首例人造无核红细胞诞生,细菌“敢死队”帮同伴存活（图）,揭开黑洞附近年轻恒星形成之谜,美开发出新型精确成像系统,日发现杀伤性T细胞何时出击机制,成功将外分泌细胞直接转化胰岛β细胞     

糖尿病的干细胞疗法

糖尿病的治疗目前集中于细胞的替代疗法。供体器官的短缺激发了对如何产生beta细胞的研究。目前，胰岛的扩增，胰岛的异种移植，人胰岛细胞系的开发，干细胞的分化都是热点。干细胞的治疗包括胚胎干细胞和成体干细胞。本文讨论干细胞向胰腺beta细胞分化的各种可能性。     

大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌颗粒上Ⅲ型IP3受体的免疫电镜定位分析

研究Ⅲ型1,4,5三磷酸肌醇受体(IP3R-Ⅲ型)在大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌颗粒上的定位.利用免疫电镜技术,5nm胶体金标记IP3R-Ⅲ型抗原后定位观察其分布情况.实验表明在胰岛β细胞中,金颗粒大量定位于胰岛素分泌颗粒的内部及颗粒膜上.在分泌颗粒表面的切线部位,也有金颗粒的聚集.本研究证明胰岛素分泌颗粒存在IP3R-Ⅲ型,提示IP3-IP3R3型可能参与了β细胞胰岛素分泌的调节.     

马齿苋多糖组分POP I对氧化损伤INS-1细胞的影响

目的：观察马齿苋多糖组分（POP I）对四氧嘧啶致大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1 cell line）氧化损伤的影响.方法：不同浓度POP I （0.05,0.1,0.5,1.0,2.0,5.0和10.0 mg/mL）作用四氧嘧啶氧化损伤的INS-1细胞1d、3d和5d后,分别测定其细胞存活率、胰岛素分泌量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽（GSH）含量.结果：POP I可明显抑制由四氧嘧啶所致的INS-1细胞存活率降低、SOD活性下降、GSH浓度减少和.MDA含量增加,并存在时-效和量-效关系;在5.6 mmol/L或16.7 mmol/L葡萄糖刺激下,POP I浓度依赖性地促进了INS-1细胞分泌胰岛素.结论：一定浓度范围内,POPI对四氧嘧啶致胰岛β细胞损伤有明显的保护作用,其作用机理可能与POP I提高细胞抗氧化能力有关.     

胰腺特异性表达Hes1基因的构建及体外表达

为了探究胰腺的发育机制,以及制备胰腺缺陷型的小型猪模型,构建了特异性表达载体,开展了相关载体构建及体外验证研究.本研究以小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动小鼠Hes1基因的表达载体PDX1-Hes1,载体转染MIN-6胰岛β细胞、猪耳成纤维细胞及猪肾细胞,培养48h后,通过qRT-PCR、Western Blot检测.结果显示:Hes1在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均高效表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞及猪肾细胞中均不表达.试验表明:胰岛特异性表达载体PDX1-Hes1的成功获得,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供参考,为后续制备胰腺缺陷型的小型猪提供了条件.