鸡艾美耳球虫单卵囊分离与种类鉴定

为了建立鸡球虫纯株,选用1~5日龄雏鸡,采用琼脂块单卵囊分离法对实验室保存的6种11株鸡球虫进行纯化,并选用2周龄雏鸡,对每个虫种/株选取1个单卵囊分离物进行增殖和种类鉴定.结果单卵囊接种179只,获得单卵囊分离物42个,单卵囊分离成功率23.46%;对11个单卵囊分离物,通过测定寄生部位、潜在期、孢子化卵囊大小、形状指数(长/宽)、孢子囊大小、最短孢子化时间等指标,鉴定出1个分离物为堆形艾美耳球虫(Eimeria acervulina)、2个分离物为柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、6个分离物为巨型艾美耳球虫(E.maxima)、1个分离物为变位艾美耳球虫(E.mivati)、1个分离物为毒害艾美耳球虫(E.necatrix).本研究表明琼脂块单卵囊分离法简便易行、成功率较高,同时提示实验室保存的布氏艾美耳球虫(E.brunetti)被柔嫩艾美耳球虫污染.     

利用Gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库

以天山雪莲为材料,利用gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库。从经低温处理后的天山雪莲叶片中提取并分离mRNA,合成双链cDNA;cDNA经BP重组反应重组到入门载体pDONR222上,构建得到天山雪莲en-try cDNA文库;天山雪莲entry cDNA再经LR重组反应将雪莲cDNA重组到植物表达载体pLEELA上,从而构建了天山雪莲cDNA表达文库。结果表明:cDNA入门文库滴度达到1.2×107cfu/mL,文库总容量为4.8×107cfu。表达文库的滴度为6.9×106cfu/mL,文库总容量为2.76×107cfu,插入片段平均大小1000 bp。阳性克隆率100%。天山雪莲cDNA表达文库的建立为进一步高通量筛选天山雪莲抗寒基因奠定了基础。     

棉花腺体形成时均一化cDNA文库的构建

为克隆筛选棉花腺体形成相关的基因，运用SMART技术构建cDNA文库.首先抽提棉花腺体形成时期的mRNA，mRNA逆转录后合成cDNA，经均一化处理后，SfiⅠ酶切，连接质粒载体，电转化，成功构建了棉花腺体形成时期的cDNA文库.经鉴定原始文库滴度为5.8×105 cfu/mL，其重组率高达94%，插入片段的平均长度约为1.4 kb.     

香雪兰花瓣总RNA的提取和cDNA文库的构建

以不同开放时间的红色香雪兰的花瓣为材料,利用CTAB裂解、LiCl沉淀的方法提取出高质量的总RNA,经纯化mRNA后,合成双链cDNA,加上EcoRⅠ和XhoⅠ接头,用胶回收的方法将500 bp以上的cDNA回收并连在载体上,获得了重组率为89%,滴度为4.8×105pfu/mL的香雪兰花瓣质粒cDNA文库,为研究香雪兰花香和花色的相关基因奠定了基础.     

柔嫩艾美耳球虫保守蛋白基因EtCHP40的分子特性研究

鸡球虫病是由几种艾美耳球虫寄生鸡肠道引起的一种危害严重的寄生虫病.目前,球虫病的防治主要依赖于药物,但由于药物长期广泛使用使鸡球虫对药物产生了严重的耐药性.为研究鸡球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期利用RNA-sequence对柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株与敏感株进行了转录组分析,获得敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫保守蛋白40(EtCHP40)在马杜拉霉素耐药株表达显著上调.本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆了柔嫩艾美耳球虫保守蛋白40(EtCHP40)基因,并在原核表达系统中成功表达了重组蛋白(rEtCHP40).利用实时荧光定量PCR分析了该基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段以及不同虫株(耐药株和敏感株)的mRNA转录水平.结果显示EtCHP40基因在第二代裂殖子的mRNA转录水平最高;与敏感株相比,EtCHP40基因的mRNA转录水平在耐药株上调,且在马杜拉霉素耐药株的转录水平显著高于其他耐药株,另外发现在不同浓度的盐霉素作用下,随着药物浓度的升高,EtCHP40的mRNA转录水平也升高.间接免疫荧光定位结果表明该蛋白主要分布在子孢子的表面和顶端.因此,推测该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育和对药物产生耐药性的过程.     

高质量匍枝根霉cDNA文库的构建及鉴定

从匍枝根霉总RNA出发纯化获得mRNA,经逆转录酶作用合成cDNA,构建高质量的cDNA文库,为快速筛选和研究匍枝根霉相关关键基因提供了基础.研究采用CHROM SPIN柱回收大于500bp的cDNA并连接pUCm-T载体,成功构建了匍枝根霉cDNA文库.鉴定结果显示:文库库容为1.95×106 cfu,文库滴度为7.84×106 cfu/mL,该文库中cDNA片段大小分布在500~4 000bp,文库重组率为96%.     

中国美利奴羊外周免疫器官cDNA文库的构建及鉴定

为了筛选中国美利奴羊与免疫反应相关的的功能基因并研究这些基因的功能,构建了以美利奴羊外周免疫器官的cDNA文库。通过提取总RNA,分离纯化mRNA并以其为模版参照ZAP Express cDNA Synthesis Kit说明书构建cDNA文库。结果表明:该文库初级库容达到了3.28×105pfu,扩增库滴度为3.8×108pfu/mL,重组率为97.7%。插入片段介于0.5至2.3 kb之间,平均大小为1.5 kb。该文库的成功构建为后续研究奠定了分子基础。     

柔嫩艾美耳球虫Serpin基因在293T细胞中的表达

为了检测柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,Et)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)基因(EtSerpin)在真核细胞293T中的表达情况,以Et孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增含完整Serpin开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM-Teasy载体,构建pGEM-Teasy-EtSerpin质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtSerpin.该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞,用间接免疫荧光法和Western blot鉴定EtSerpin基因的表达情况,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光,Western blot结果显示出大小约45.5kDa的目的蛋白条带,结果表明构建的EtSerpin可以在293T细胞中获得表达.     

中华大蟾蜍“高温卵”cDNA文库的构建

以长足但不具成熟潜能的中华大蟾蜍“高温卵”为材料,提取总RNA和mRNA,以Not I/Oligo dT18为引物,经反转录合成第1链cDNA;再以DNAPolymerase I合成第2链.所得到的cDNA加装衔接头后定向克隆到λ-ExCell载体上,构建cDNA文库.结果显示,平均每个“高温卵”中总RNA的含量为5.66μg,poly A+RNA含量约为63.96 ng,构建的cDNA文库的丰度为8.93×10-5pfu/μg cDNA.随机挑选的2个重组噬菌体经NotI、EcoR I双酶切后,均能酶切出外源片段,说明我们已成功地构建了中华大蟾蜍"高温卵"的cDNA文库.     

小麦苗期盐胁迫72h cDNA文库的构建及质量检测

以98-160盐胁迫72 h叶片的mRNA为起始材料,采用SMART技术构建了一个高质量的cDNA文库,经检测,未扩增文库的滴度为3.44 ×106 pfu/mL,白斑率＞85%,插入片段多数在0.5～1.5kb,有的可以达到2kb,平均长度为800bp.因此,按照此方法构建的是1个高质量的cDNA文库,可有效地用于下一步全长基因的筛选和克隆.     

发动机转动惯量的实验测定

发动机转动惯量是发动机系统动态模型的一个重要参数,一般需要通过试验测取发动机转速衰减曲线,再由曲线拟合而得。在文中提出一种试验曲线的全程拟合法,比以往的标定转速点拟合法可以取得更高的精度。     

民间法正义观的转型

研究了国家法的抽象正义观与民间法的情理正义观,认为西方国家法的抽象正义观与东方民间法的情理正义观存在实质的不同,原因在于思维方式、超验与经验传统、政治结构的差别。在现代法治理念下,传统民间法所代表的正义观将向混合正义观转型,西方法治所代表的国家法抽象正义观是其骨架。     

老年人生活空间移动性影响要素研究进展

 老年人生活空间移动性是老年人在日常生活中能动生活状态的重要表征。在梳理老年人生活空间移动性相关概念、测度方法基础上，分析了物质环境要素和非物质环境要素对老年人生活空间移动性的影响；提炼出有效支持老年人生活空间移动性的中观环境规划、微观环境设计和政策文化扶助层面的策略；指出了老年人生活空间移动性的研究建议和发展方向。     

关于一维非自治时滞系统点态退化的例子

给出了一维非自治时滞系统点态退化的几个例子。     

辽阳职业技术学院高尔夫学院发展现状研究

采用问卷调查法、文献资料法、数理统计法对辽阳职业技术学院二级分院高尔夫学院成立三年来招生、专业设置、教师队伍与实习实训等现状进行深入调查与分析,结果表明:在招生方面,高尔夫学院目前还未能得到家长的充分认可,招生人数不多;专业设置单一,实践教学及社会服务能力薄弱;实习实训条件较好,但仍需进一步完善;教师队伍建设相对滞后.针对上述情况,给出促进高尔夫学院稳步发展的建议.     

关于农业区划地图集中的统一协调问题

图集的统一协调,对图集质量有很大影响。本文是作者在编制北京市农业区划地图集的实践基础上,根据地图信息传输论的观点,对农业区划地图集的统一协调的内容及方法进行了探讨。试图总结编制这类图集的统一协调模式,以供读者编图时参考。     

膨胀土路基沉降的可靠度分析

针对膨胀土路基沉降的不稳定性和随机性等特点，以膨胀土的膨胀率、线收缩系数、初始含水量、工后沉降期始末的孔隙比变化量和固结度变化量、工后沉降期末的含水量等为基本变量，提出了膨胀土路基沉降的可靠度分析方法和可靠度指标的迭代计算步骤，并就具体工程实例进行了膨胀土路基沉降可靠度计算．结果表明按强度和稳定性设计原则设计的路基的工后沉降超过容许沉降的失效概率较大。     

过热器连续爆管事故分析

通过对一起锅炉过热器爆管事故的分析 ,找出了过热器爆管事故的原因 ,提出了改进意见 ,收到了显著的效果     

整数幂的和计算中的一些规律

给出整数幂的和的另一种计算公式的方法.     

接受美学的期待之路——读者接受与文学的创新

文学发展的动力之一在于创新。在接受美学诞生之前,学者们往往从作家的角度讨论文学创新问题。本文用接受美学的理论探讨文学创新的问题。笔者将文学创新的标准与读者接受相结合,就创新的三个方式与期待视野的方法论进行了初步的探讨。最后得出的结论是:读者期待视野的提高是作家作品创新的主要依据,作家在文学创作中应该充分考虑读者的接受才能做到创新。