六年中裸小鼠繁殖群动物自发性肿瘤发病情况研究

对饲养于ＳＰＦ条件下的４６６只ＮＣ系自育选留的繁殖群小鼠自发性中瘤发病情况进行了６年观察，研究其中包括纯合子雄鼠（ｎｕ／ｎｕ）１６４只，杂合了雄鼠（ｎｕ／＋）３０２只。每只动物的平均观察时间均达７个月以上，淘汰时均详细解剖学检查，检出病变者进行病理组织学及透射电镜观察确诊。多数肿瘤病例结合裸鼠间可移植性鉴定。共检出自发性肿瘤７例，发生于纯合子裸鼠（♂，ｎｕ／ｎｕ）５例，杂合子裸鼠（♂，ｎｕ／＋）２例。本结果表明，在相同饲养环境条件下，裸鼠（♂，ｎｕ、／ｎｕ）的自发性肿瘤发病率（３．０４％）比其同系的有胸腺杂合子裸鼠（♀，ｎｕ／＋）（０．６６％）明显增高，两者发病比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５），且前者的平均发瘤鼠龄比后者为短。结果支持了免疫功能缺陷的裸鼠比其同系免疫功能正常鼠有更高的自发性肿瘤发生的观点。且表明了ＮＣ系裸鼠的自发性肿瘤以恶性上皮性肿瘤为主。此外作者针对前人的观察结果，提出了对一裸群体的自发性肿瘤的正确评价，必须是在相同的生存环境条件下，相同的观察时间内与相同品系或相同基因背景的有胸腺小鼠进行比较，并经详细的病理学检查，才能得出较客观可靠的结论这一见解。     

BALB/c裸鼠自发性淋巴瘤二例

对饲养在SPF环境中,鼠龄6个月的47只T细胞缺乏的BALB/c(nu/nu)裸鼠及26只T细胞正常的BALB/c(+/nu)杂合子小鼠进行病理观察,发现两只BALB/c(nu/nu)裸鼠生长自发性肿瘤。病理诊断分别为浆细胞样淋巴细胞型淋巴瘤和B免疫母细胞型淋巴瘤。肿瘤发生率为4.26％。而BALB/c(+/nu)杂合子小鼠未见肿瘤生长。     

Nc/s-nu/nu裸鼠遗传特性的初步研究

Nc裸鼠自1984年从日本引入我国,1986年引入中山医科大学称为Nc/s-nu/nu,已广泛应用在肿瘤学,免疫学及药理学等多个领域的研究。小鼠的某些同功酶和异构蛋白具有多态性,已成为研究小鼠遗传结构的标志。本组采用醋酸纤维膜电泳法对21只Nc/s-nu/nu小鼠群体中11个生化标志进行抽样检查,并计算分析其所代表的等位基因在Nc/s-nu/nu小鼠中出现的频率,用Hardy weinherg平衡公式进行吻合度检验,结果发现Nc/s-nu/nu是非近交系小鼠,可作为一个封闭群小鼠,其来源可能与CBA家族小鼠有血缘关系,还可能与RF,RFM,KK等一些品系实验小鼠中某个品系有血缘关系。本实验为我国Nc裸鼠的遗传背景作了初步的研究,也为我校Nc/s-nu/nu小鼠提供了必要的遗传数据。     

裸鼠自发淋巴瘤生物特性和病理形态观察

介绍纯合子Swiss裸鼠自发恶性淋巴瘤的移植特性和病理形态观察。取肿瘤组织悬液接种无T淋巴细胞的纯合子(nu/nu)小鼠皮下,每点注射0.2ml,肿瘤发生率100％;而接种有T淋巴细胞的小鼠均不生长。该肿瘤共传5代,其特性均与原自发瘤一样。光镜检查为B细胞型恶性淋巴瘤,电镜检查符合B细胞恶性淋巴瘤。     

BALB/c突变鼠生物学特性的初步研究

在BALB/c的生产群中,1罐(1:1交配)繁殖鼠生下2只被毛短而稀的仔鼠。该仔鼠成年后进行兄妹交配,后代出现三种表型:被毛紧披,有胸腺,生长快,繁殖力高的全毛小鼠;完全无毛,无胸腺,生长慢,性成熟晚,产仔数低的裸鼠;被毛短而稀,有胸腺,生长较快,繁殖力较高的中间态。对这些突变鼠进行交配试验,结果表明:此种突变和常规裸基因的突变一样,由单对基因控制,三种小鼠的基因型为:全毛(+/+)、全裸(nu/nu)和中间态(nu/+),在该突变鼠的生产中,可及早将全毛小鼠淘汰掉,保留裸鼠和中间态进行繁殖,使裸鼠生产简便易行。     

PAX-8基因敲除小鼠的饲养繁殖及基因型鉴定

目的繁殖和鉴定PAX-8基因敲除小鼠。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性杂合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果PAX-8杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得PAX-8基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

裸鼠肝炎病理观察及分析

通过对67只裸鼠(BALB/c nu/nu、nu/+)的病理监测及实验观察,发现在裸鼠饲养群中存在鼠肝炎病毒(Mouse Hepatis Vinrus)的潜在感染。营养不良及某些实验刺激是造成感染的诱因。在感染的早期,出现Kupffer氏细胞增生、肿胀,甚至变性、坏死脱落。当病毒侵入肝细胞,可引起肝细胞坏死。由点状小灶性坏死到大片状坏死。此坏死灶具有一定的特征性,即细胞反应较轻,有融合成片的倾向,边界不够清楚,经酶标抗体染色,在Kupffer氏细胞及少数肝细胞胞浆内出现棕色颗粒,表明有鼠肝炎病毒存在。同时发现,在出现肝炎病变的裸鼠中,有的经酶联吸附试验(ELISA)测定血清抗体呈阴性,而酶标抗体染色却显示阳性反应。由此说明酶标抗体染色,进行抗原定位诊断比血清抗体测定更有诊断意义。     

血红素加氧酶-1 基因敲除小鼠的饲养和鉴定

摘要: 目的 繁殖并鉴定 HO-1 基因敲除( HO-1 － / － ) 小鼠。方法 将引进的 HO-1 基因敲除杂合子小鼠,进行 SPF 级饲养,与 C57BL/6 野生型小鼠配种繁殖,提取子代小鼠的基因组 DNA,PCＲ 法特异性扩增 HO-1 基因片段,使用 双脱氧测序法测得基因序列。子代小鼠出现 3 种基因型: 野生型、杂合子型及纯合子型。杂合子小鼠进一步配种 繁殖,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠,纯合子小鼠用以课题研究。结果 HO-1 基因敲除杂合子小鼠的饲养和 繁殖均获得成功,获得了 HO-1 基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论 正确的饲养繁殖及鉴定方法是从 HO-1 基因 敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。     

裸小鼠在普通环境中使用IVC笼具生产繁殖的初探

目的探讨BALB/C-nu裸小鼠在普通环境中使用IVC笼具生产繁殖的效果。方法引进3对BALB/C-nu种鼠按1♂nu/+×1♀nu/+交配,再从仔代中建立血缘扩大群,按1♂nu/nu×3♀nu/+;1♂nu/nu×1♀nu/nu两种繁殖方法进行生产繁殖。结果种鼠生产10胎平均产仔8.6±1.02(裸鼠1.8±0.63)只;血缘扩大群1♂nu/nu×3♀nu/+生产42胎,平均产仔6.92±1.47(裸鼠3.52±1.29)只;1♂nu/nu×1♀nu/nu生产12胎,平均产仔4.25±1.36全裸鼠。经检测符合SPF级。结论在普通环境中应用IVC笼具,只要注意室内卫生消毒,在净化工作台上无菌操作能够繁殖合格的裸小鼠。     

巢式PCR-HRM法在点突变模式小鼠基因分型中的应用

目的 利用巢式PCR结合高分辨率熔解曲线(HRM)技术，改进点突变模式小鼠的基因分型方法。方法 以ob/ob鼠和db/db鼠为样本，剪小鼠脚趾编号并提取基因组DNA。根据突变位点参考序列设计巢式PCR引物并进行两轮扩增后，对产物进行HRM分析，获得基因分型结果。同时，通过PCR-SBT法和PCR-RFLP法对分型结果的准确性进行验证。结果 对80只ob/ob鼠和65只db/db鼠进行了检测，巢式PCR-HRM法能够准确地分辨出3种基因型。在ob/ob鼠中，鉴定得到的纯合子、杂合子和野生型分别为21、47和12只。而在db/db鼠中，纯合子、杂合子和野生型分别为23、33和9只。巢式PCR-HRM法的分型结果与PCR-SBT法和PCR-RFLP法的结果高度一致，且分型结果与小鼠表型一致。结论 建立的巢式PCR-HRM法是一种快速、简便、准确度高的基因分型方案，适用于大批量点突变模式小鼠的基因分型鉴定。     

补体C3基因敲除小鼠的繁育及子代基因型鉴定

目的 探讨繁殖和鉴定补体c3基因敲除小鼠的实验方法。方法将所引进的补体c3基因敲除杂合子小鼠（c3＋／-）进行饲养并繁殖,其子代出现三种基因型的小鼠,即纯合子c3-／-、杂合子c3＋／-、野生型c3＋／＋,采用ELISA与PCR相结合对子代小鼠基因型进行鉴定。结果繁育出135只子代小鼠,经鉴定,（=3＋／＋、c3＋／-、C3-／-各为38只、68只、29只,经爿。检验,子代小鼠分离比例符合孟德尔遗传规律。结论正确的饲养繁殖以及子代鉴定是从杂合子小鼠中获得补体c3基因敲除小鼠的有效途径。     

裸小鼠的繁殖及在肿瘤学中的应用

目的　总结了八年实验动物裸小鼠繁殖和应用。方法　用随机抽取 2 0窝BALB/c裸小鼠繁殖生育情况分析和 5只BALB/c母鼠 (nu/ +)四胎生育情况比较。结果　BALB/c裸小鼠平均每胎产仔 9 35只 ,用nu/ +雌与nu/nu雄交配方法繁殖 ,平均每胎所得纯合子仔鼠能占仔数的 5 5 0 % ,离乳率 97% ,1～ 4胎生育恒定 ,一年存活率达10 0 % ,最长生存期可达 75 2d。微生物检测结果未发现致病菌 ,寄生虫等。结论　空气过滤十万级环境加上生物层流柜达一万级的条件 ,只要严格执行无菌操作 ,裸小鼠繁殖可基本达到SPF要求。     

基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立

目的 构建基于Cre- LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究。方法 首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、 Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导入C57BL/6 J小鼠囊胚,移入同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠。再将杂合子hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasfl/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg (EIIa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平。结果 成功构建了基于Cre- LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率>50%的雄鼠与野生型C57BL /6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasfl/fl小鼠与Tg (EIIa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5～15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达。结论 成功建立运用Cre- LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲入小鼠模型做好技术储备。     

国内期刊亮点

正构建黏蛋白1基因敲除小鼠模型黏蛋白1(MUC1)属黏蛋白家族成员,分布于上皮细胞膜表面,由于在免疫炎症反应以及肿瘤发生中的重要作用而日益受到重视。上海交通大学程布凯等为了进一步深入研究MUC1的生物学功能,构建了Muc1基因敲除小鼠模型。研究人员首先根据小鼠Muc1基因组序列设计基因剔除策略,将2个loxP位点分别插在外显子2和3两侧,构建基因剔除载体Muc1-ABRLFnpBR322。以电穿孔方法将载体导入胚胎干细胞(ES细胞),用G418和更昔洛韦进行正负筛选获得4个同源重组的ES细胞克隆。挑选其中一个阳性ES克隆行囊胚显微注射,获得16只嵌合率大于50%的雄鼠;其次,利用嵌合雄鼠与C57BL/6J野生型雌鼠交配后获得11只floxP杂合子小鼠(10雄1雌),通过杂合子小鼠回交,并进一步与EIIa-Cre小鼠交配,最终成功得到Muc1全身敲除小鼠,其中纯合子小鼠未     

保持裸鼠稳产高产水平的经验

我们应用空气层流室成功地繁育裸鼠已有十年历史。本文介绍在裸鼠生产过程中严格执行科学管理,控制微生物污染,选配营养合哩的全价颗粒饲料以及加强选种、育种,使裸鼠的生产指数保持在较高的稳定水平等多方面的经验体会。1990年开始,采用nu/nu♀×nu/nu♂的繁育形式,再用同步繁育的有毛鼠代乳的方法,使裸鼠的产量有了较大提高。1991年全年共提供裸鼠4300余只,月生产指数平均在4.0,最高达5.3,其中一只BALB/c-nu/nu♀小鼠受孕8胎产仔83只,经代乳全部成活。     

关于615B_6/PBI-beige纯合型裸鼠催产克雷伯氏菌慢性肠炎的研究

在SPF条件饲育的繁育群中,我们发现偶尔有少数6158_6/PBI-beige纯合型裸鼠慢性腹泻。经微生物分离、培养,自4只病鼠粪便中分离出4株占优势的催产克雷伯氏菌。根据Robert koch's原则,用此菌株分别人工感染6158_6/PBI-beige纯合型和杂合型裸鼠、BALB/c-nu纯合型和杂合型等不同免疫缺陷背景的裸鼠,结果仅6158_6/PBI-beige纯合型裸鼠发病,获得疾病模型。并再次自模型鼠粪便中分离到与原始致病菌株特性相同的催产克雷伯氏菌。因此确认催产克雷伯氏菌(Klebsiella oxyfoca)为6158_6/PBI-beige纯合型裸鼠慢性肠炎的条件致病菌。     

右旋柠檬烯对双酚A影响下人源乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤生长及肠道菌群的影响

观察右旋柠檬烯对环境雌激素双酚A影响下荷人源MDA-MB-231乳腺癌裸小鼠移植瘤的抑制情况和肠道菌群的影响。将人源乳腺癌MDA-MB-231细胞接种于Balb/c-nu/nu雌性裸鼠右侧腋窝皮下建立人三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型，获得的30只三阴性乳腺癌荷瘤裸鼠随机分为5组，模型组(每天予蒸馏水)，双酚A+右旋柠檬烯低、中、高剂量组(0.25 m L/kg、0.5 m L/kg、1 m L/kg)，双酚A组(1 m L/kg)，每组6只;每天灌胃给药1次，连续6周。实验结束，观察比较右旋柠檬烯低、中、高剂量组与模型组荷瘤鼠肿瘤质量、瘤体体积的变化，计算肿瘤抑制率，采用高通量测序技术检测荷瘤小鼠的肠道菌群变化。结果:双酚A组肿瘤较对照肿瘤组肿瘤增加大，双酚A+右旋柠檬烯低、中、高剂量组中的乳腺癌肿瘤体积、瘤重比对照组和双酚A组减小;接种肿瘤后细菌种类和丰度下降，右旋柠檬烯治疗后肠道菌群种类和丰度增加，右旋柠檬烯中高剂量组疣微菌门菌verrucomicrobiota丰度较双酚A组和对照组的明显增多，而拟杆菌门Bacteroidet丰度较双酚A组和对照组的明显减少。在属水平上，与对照组相比，...     

BALB/c系裸小鼠不同胎次繁殖性能的观察和分析

目的　观察分析BALB c系裸小鼠不同胎次的繁殖能力和繁殖规律。方法　以 160只种鼠雌雄各半为研究对象 ,根据其繁殖卡的详细资料 ,进行分类统计。结果　BALB c裸小鼠怀孕率 95% ,平均每只母鼠怀孕 (3 0 9± 1 2 3 )胎 ,平均产仔数为 (7 2 1± 2 74)只 ;纯合子数占总产仔数的 50 53 % ,平均窝纯合子数 (3 64± 1 57)只 ;纯合子离乳数占纯合子数的 88 3 2 % ,平均窝纯合子离乳数 (3 2 2± 1 83 )只。其繁殖性能以第 2、3胎最好 ,第 1、4胎次之 ,第 5胎最差。结论　BALB c系裸小鼠在三级屏障系统内生长繁殖良好 ,每只雌鼠最好繁殖 3胎或 4胎即要更换种鼠     

裸鼠洁净间的设计使用与管理

<正> 自六十年代无胸腺裸小鼠(以下简称裸鼠)问世以来,裸鼠作为医学科研特别是肿瘤学和免疫学领域中的动物模型得到日益广泛的应用。由于裸鼠缺乏正常胸腺,T细胞缺损,免疫性能低,导致对微生物环境的高度敏感及饲养繁殖的困难。在普通动物房条件下,裸鼠平均生存期只有14～30天,但在无病条件下其生存期能增加一年以上,根据美国专家制定的“医学生物学研究中无胸腺裸鼠管理及应用指南”所提要求,如何设计隔离屏障,并能较长时间的维持无病条件,至关重要。为满足本校科研工作需要,提供较大数量的合格裸鼠,我校实验动物科     

过滤帽鼠盒饲养繁殖裸小鼠的观察

<正> 无胸腺小鼠(以下简称裸小鼠),系免疫缺陷动物,饲养于SPF环境中,能接受多种人类癌细胞移植。近年来我国病理学家和免疫学家用裸鼠做动物模型,在医学生物学研究中进行了大量的工作,在癌症机理研究方面取得了可喜成就,某些项目已进入国际先进行列。国内对裸鼠的需求量不断增加。过滤帽鼠盒可做为最简易的屏障用于饲养SPF动物,近年来国内外虽有这方面的介绍,但对其用来繁殖动物的安全性及使用时间的长短,未见详细报导。本文就过滤帽鼠盒性能,裸小鼠饲养繁殖的效果及微生物检测等几方面进行探讨。现将结果报告如