血红素加氧酶-1 基因敲除小鼠的饲养和鉴定

摘要: 目的 繁殖并鉴定 HO-1 基因敲除( HO-1 － / － ) 小鼠。方法 将引进的 HO-1 基因敲除杂合子小鼠,进行 SPF 级饲养,与 C57BL/6 野生型小鼠配种繁殖,提取子代小鼠的基因组 DNA,PCＲ 法特异性扩增 HO-1 基因片段,使用 双脱氧测序法测得基因序列。子代小鼠出现 3 种基因型: 野生型、杂合子型及纯合子型。杂合子小鼠进一步配种 繁殖,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠,纯合子小鼠用以课题研究。结果 HO-1 基因敲除杂合子小鼠的饲养和 繁殖均获得成功,获得了 HO-1 基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论 正确的饲养繁殖及鉴定方法是从 HO-1 基因 敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。     

补体C3基因敲除小鼠的繁育及子代基因型鉴定

目的 探讨繁殖和鉴定补体c3基因敲除小鼠的实验方法。方法将所引进的补体c3基因敲除杂合子小鼠（c3＋／-）进行饲养并繁殖,其子代出现三种基因型的小鼠,即纯合子c3-／-、杂合子c3＋／-、野生型c3＋／＋,采用ELISA与PCR相结合对子代小鼠基因型进行鉴定。结果繁育出135只子代小鼠,经鉴定,（=3＋／＋、c3＋／-、C3-／-各为38只、68只、29只,经爿。检验,子代小鼠分离比例符合孟德尔遗传规律。结论正确的饲养繁殖以及子代鉴定是从杂合子小鼠中获得补体c3基因敲除小鼠的有效途径。     

p53 基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

摘要: 目的为了繁育和鉴定p53 基因敲除小鼠,将引进的杂合子小鼠进行饲养繁殖,杂合子用于继续保种。方法 对其幼鼠剪尾提取基因组DNA,采用PCR 方法进行基因型鉴定。结果对引进小鼠已成功饲养和繁殖,并得到 纯合基因缺失型小鼠。结论正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对于基因敲除小鼠的获得和保种具有重要的意 义。     

Ⅰ型干扰素受体(Ifnar)基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的对Ifnar基因敲除小鼠繁育及鉴定方法进行分析,为多种病毒研究提供理想的动物模型。方法将引进的纯合Ifnar基因敲除小鼠,以1雄2雌的合笼方式进行饲养繁殖,从仔鼠中提取鼠尾基因组DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。结果 Ifnar基因敲除小鼠繁育成功,获得了一批基因敲除鼠,使用PCR方法成功鉴定出Ifnar基因敲除纯合子小鼠。     

RELM-β基因敲除大鼠的繁育及基因型鉴定

目的 探讨抵抗素样分子β(RELM-β)基因敲除大鼠的最优繁育方式和基因型鉴定方法。方法 将RELM-β^-/-纯合子雌性Sprague Dawley(SD)大鼠和野生型雄性Wild type(WT)SD大鼠按2∶1交配，繁育出F1杂合子大鼠，采用RELM-β^-/-纯合子互交、RELM-β^+/-杂合子互交、纯合子及杂合子互交(正交及反交)4种方式交配，PCR扩增凝胶电泳法鉴定子代大鼠基因型，观察子代大鼠的外形，统计子代大鼠数量、体质量及纯合率。结果 PCR扩增凝胶电泳法成功鉴定亲代及子代大鼠的基因型，3种基因型大鼠的外观形态无明显差异，3周至6周龄大鼠体质量无明显差异，不同交配方式子代数量无明显差异。结论 合理的繁殖方法并进行正确的鉴定是获得RELM-β基因敲除SD大鼠的重要途径，PCR扩增凝胶电泳法具有快速、经济，重复性较好的优点。     

PTA-1~（-/-）/ApoE~（-/-）双基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的建立（PTA-1-/-/ApoE-/-）双基因敲除小鼠（double-gene knockout,DKO）模型,探讨该小鼠的繁育及鉴定方法,为进一步利用该小鼠研究相关疾病奠定基础。方法将引进的PTA-1-/-及ApoE-/-基因敲除小鼠通过杂交和互交的方法进行繁殖,以得到DKO小鼠。结果经过PCR基因鉴定的方法证实PTA-1-/-/ApoE-/-双基因敲除小鼠繁育成功。结论正确的饲养繁殖及鉴定方法是获得该DKO纯合子小鼠的有效途径。     

Pumilio1/Pumilio2双基因条件性敲除小鼠模型的建立及基因型鉴定

目的建立及鉴定Pumilio1/Pumilio2(Pum1和Pum2)双基因条件性敲除的小鼠模型,为进一步研究PUF家族在哺乳动物精子发生中的生物学功能奠定基础。方法将构建的Pum1条件性敲除和Pum2条件性敲除的两个品系小鼠进行交配并繁殖,最终繁殖成功的子代小仔Pum1和Pum2两个基因均为纯合子。对子代以剪趾方式进行编号,提取子代小鼠脚趾或鼠尾基因组DNA,用PCR法和琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型。结果 Pum1和Pum2双基因条件性敲除的小鼠模型繁殖成功,同时获得更多PUF家族双基因条件性敲除的小鼠。结论成功建立了Pum1和Pum2双基因条件性敲除的小鼠模型;正确的交配繁殖策略和鉴定方法是获得PUF家族双基因条件性敲除小鼠的有效途径。     

国内期刊亮点

正构建黏蛋白1基因敲除小鼠模型黏蛋白1(MUC1)属黏蛋白家族成员,分布于上皮细胞膜表面,由于在免疫炎症反应以及肿瘤发生中的重要作用而日益受到重视。上海交通大学程布凯等为了进一步深入研究MUC1的生物学功能,构建了Muc1基因敲除小鼠模型。研究人员首先根据小鼠Muc1基因组序列设计基因剔除策略,将2个loxP位点分别插在外显子2和3两侧,构建基因剔除载体Muc1-ABRLFnpBR322。以电穿孔方法将载体导入胚胎干细胞(ES细胞),用G418和更昔洛韦进行正负筛选获得4个同源重组的ES细胞克隆。挑选其中一个阳性ES克隆行囊胚显微注射,获得16只嵌合率大于50%的雄鼠;其次,利用嵌合雄鼠与C57BL/6J野生型雌鼠交配后获得11只floxP杂合子小鼠(10雄1雌),通过杂合子小鼠回交,并进一步与EIIa-Cre小鼠交配,最终成功得到Muc1全身敲除小鼠,其中纯合子小鼠未     

脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁育

目的　摸清脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁殖规律,建立可靠的检测方法。方法　采用杂交、回交、互交的方法进行培育;采用从LPL(- / - )基因敲除小鼠的个体组织(鼠尾)中提取基因组DNA进行PCR分析,对其LPL(- / - )基因型作出鉴定。结果　繁育出脂蛋白酯酶基因敲除小鼠新品系,并建立了可靠的繁殖方法和检测方法。结论　建立了脂蛋白酯酶基因敲除小鼠动物模型。     

PD-1人源化小鼠构建繁殖与基因型鉴定

目的 探讨PD-1人源化小鼠的繁育与基因型鉴定，为进一步研究相关小分子抑制剂的体内药效评价提供动物模型。方法 通过构建PD-1人源化小鼠，获得F1代鼠4只，雌雄交配进行培育繁殖。对每窝仔鼠的数量，存活率等进行记录观察，随后对仔鼠剪尾提取基因组DNA,用PCR法扩增目的基因，然后进行核酸电泳，鉴定基因型。选用F2代纯合型与纯合型雌雄交配，野生型与野生型雌雄交配。结果 鉴定的F2代小鼠有野生型、纯合型和杂合型3种基因型。纯合型与纯合型交配获得F3代仔鼠基因型全部为纯合型。野生型与野生型交配获得F3代仔鼠基因型全部为野生型。结论 成功筛选出PD-1人源化小鼠纯合子基因型，并有效地进行扩群保种，为今后应用该小鼠模型提供实验保障。     

线粒体D-Loop区全序列分析A2a基因敲除小鼠生产扩大群的遗传稳定性

目的采用线粒体D-Loop全序列测定法对A2a基因敲除小鼠近交系生产扩大群中的小鼠进行了遗传稳定性分析。方法对5个子代A2a杂合子50只小鼠的线粒体DNA D-Loop区进行了PCR扩增,产物纯化后测序,其结果与小鼠线粒体标准序列比对,分析50只小鼠之间的序列差异。结果发现检测的50只小鼠的D-Loop基因序列完全一致,且与小鼠线粒体标准序列完全一致。结论 A2a基因敲除小鼠扩大繁殖群具有较好的遗传稳定性,同时为进一步研究A2a小鼠提供遗传学资料。     

雌性Akt2基因缺失小鼠生殖表型研究

通过对雌性Akt2 基因敲除纯合子小鼠(Akt2(-/-))及野生型小鼠(Akt2(+/+))基础指标、大体形态学指标、血清糖脂水平和性激素水平等方面的评估,探讨Akt2基因缺失对糖脂代谢和卵巢功能影响.雌性Akt2(+/+)及Akt2(-/-)小鼠各16只,行口服糖耐量(OGTT)实验(2mg/kg),阴道涂片监测动情周期,于动情间期进行动力学实验,将纯合子和野生型小鼠分别随机分为空白组和刺激组2组,刺激组予HMG(人绝经期尿促性激素)(0.5IU/g)刺激2h,空白组予等体积的生理盐水刺激2h,检测各组小鼠体重、体内脂肪重量、血脂、空腹胰岛素水平和生殖激素水平,卵巢常规病理检测各组小鼠卵巢形态学变化.结果发现,同野生型小鼠相比,纯合子小鼠动情周期显着延长(P<0.05),随机血糖、0h血糖、2h血糖、空腹胰岛素水平和HOMA指数均显著升高(P<0.05),而血清甘油三醑(TG)水平则显著降低(P<0.05);性激素检测发现纯合子小鼠血清17羟孕酮(17-OHP)、雌二醇(E2)、△17-OHP、△E2均显着升高.综上,本文认为Akt2基因不仅可以影响机体糖脂代谢,同时也影响卵巢功能,说明胰岛素调节糖代谢的关键信号分子对卵巢生殖功能同样具有重要的调节作用.     

BALB/c系裸小鼠不同胎次繁殖性能的观察和分析

目的　观察分析BALB c系裸小鼠不同胎次的繁殖能力和繁殖规律。方法　以 160只种鼠雌雄各半为研究对象 ,根据其繁殖卡的详细资料 ,进行分类统计。结果　BALB c裸小鼠怀孕率 95% ,平均每只母鼠怀孕 (3 0 9± 1 2 3 )胎 ,平均产仔数为 (7 2 1± 2 74)只 ;纯合子数占总产仔数的 50 53 % ,平均窝纯合子数 (3 64± 1 57)只 ;纯合子离乳数占纯合子数的 88 3 2 % ,平均窝纯合子离乳数 (3 2 2± 1 83 )只。其繁殖性能以第 2、3胎最好 ,第 1、4胎次之 ,第 5胎最差。结论　BALB c系裸小鼠在三级屏障系统内生长繁殖良好 ,每只雌鼠最好繁殖 3胎或 4胎即要更换种鼠     

Bag3 P215L基因突变小鼠的繁殖与基因型鉴定

BAG3是一种多功能蛋白,在多种疾病的发生发展中起决定性作用.临床研究表明,BAG3蛋白的第209位残基脯氨酸到亮氨酸p. Pro209Leu (c. 626C T)的杂合子突变能够引起一种罕见的肌原纤维肌病.为进一步研究BAG3 P209L突变引起的相关疾病,建立了Bag3 P215L突变的小鼠模型(小鼠的Bag3蛋白序列中对应突变的脯氨酸位于第215位残基上).将Bag3 P215L杂合突变的雄鼠和雌鼠进行繁殖交配,将得到纯合子、杂合子及野生型3种基因型小鼠.出生后3～4周龄的小鼠剪尾,采用了NaOH法、KCl法和改良SDS法共3种方法提取基因组DNA,然后进行PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和DNA测序.用改良SDS法能更为稳定有效地提取DNA,从而成功进行Bag3 P215L小鼠的繁育和基因型鉴定.为进一步研究BAG3 P209L突变引起的相关疾病提供了理想的动物模型.     

Smad2基因敲除小鼠冷冻胚胎库的建立

目的 建立Smad2基因敲除小鼠胚胎库。方法 利用OPS法对Smad2基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻保存,并比较不同杂交组合小鼠的超数排卵数、解冻胚胎的复苏率及发育率。结果 两组不同杂交组合（Smad2^＋/－♂×Smad2^＋/－♀和Smad2^＋／－×Smad2^＋／－♀）小鼠平均超排卵数分别为14．13枚和24．60枚;复苏率分别为90．16％和91．67％;囊胚发育率分别为73．08％和77．05％。这些结果表明Smad2基因敲除杂合子母鼠的超排数量明显低于野生型母鼠的超排数量,而二者胚胎解冻后的复苏率和囊胚发育率没有显著差异。因此我们主要通过对野生型小鼠超数排卵,然后与Smad2基因敲除杂合子雄鼠交配的方法获取胚胎,进行玻璃化冷冻保存,现已冻存胚胎1256枚。结论 成功建立了Smad2基因敲除小鼠胚胎库。     

中国柞蚕小杏黄、鲁红和青六号品种幼虫体色基因分析(英文)

通过对鲁红、小杏黄和青六号品种杂交试验，查明了中国柞蚕幼虫体色红色、黄色、黄绿的受控基因和遗传方式．鲁红为杂合体，基因型为Ｒ／＋Ｙ／ＹＧ／Ｇ，纯合体Ｒ／ＲＹ／ＹＧ／Ｇ在卵期致死．小杏黄纯合体基因型为ｒ／ｒＹ／ＹＧ／Ｇ．青六号纯合体基因型为ｒ／ｒ＋ｒ／＋ｒＧ／Ｇ．鲁红和青六号体色有两对基因差异．基因Ｇ、Ｙ、Ｒ位于不同染色体上，基因间存在互作，Ｇ表现型为黄绿色，Ｇ、Ｙ共存表现型为黄色，Ｇ、ｒ、Ｒ共存表现型为红色