拟穴青蟹细胞核DNA含量的测定

以拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的血淋巴细胞为材料,刀额新对虾(Metapenaeus ensis)的血淋巴细胞为参照系,利用倍性分析仪结合外标定法测定其细胞核DNA含量.拟穴青蟹的血淋巴的细胞核DNA含量是2.677 pg/2c.此外,本文作者还发现拟穴青蟹血淋巴与肌肉组织细胞核DNA含量存在差异.报道了我国拟穴青蟹细胞核DNA含量,并且提供了拟穴青蟹的细胞遗传学特征,为蟹类系统重建与演化过程分析提供新资料.     

从几种动物组织制备细胞核及可提取性核抗原的初步尝试

本文叙述了几种动物组织细胞核及可提取性核抗原的制备。发现小牛胸腺细胞核含量相当于小鼠和兔肝的5～6倍,但仅相当于小牛肝脏和猪脾脏的2倍。对流免疫电泳证明,所有自上述动物组织制备的可提取性核抗原均含Sm和RNP。     

刀额新对虾和日本囊对虾细胞核DNA含量的测定与比较

以刀额新对虾(Metapenaeus ensis)、日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)的血淋巴为材料,以小鸡血细胞核DNA含量(2.50 pg/2c)为参照样,使用Partec PA-I型倍性分析仪并结合外标定法,分别测定了刀额新对虾与日本囊对虾细胞的DNA含量.结果表明,这两种虾的细胞DNA含量分别为小鸡血细胞的1.77倍和1.95倍,换算成绝对含量分别为4.340 pg/2c和4.878 pg/2c.本文讨论了刀额新对虾与日本囊对虾以形态学为特征的分类系统与细胞DNA含量之间的关系,并推测在系统演化上日本囊对虾应比刀额新对虾更为高等.     

检测植物倍性时流式细胞仪参数设置的体会

流式细胞仪已广泛用于植物倍性的检测,通过检测拟南芥叶片的倍性,对BD LSRFortessaTM型流式细胞仪在用于植物倍性检测时的参数选择和设置进行了研究。结果表明:当建立双参数FSC/SSC散点图圈定目标植物细胞核时,设定FSC-A、SSC-A为对数放大;以DAPI为"阈"进行阈值的设定,能有效地排除细胞碎片等大量非目标细胞核和噪音的干扰信号,且最大限度地保留了靶细胞核;建立DAPI-W/DAPI-A双参数散点图能有效排除黏连细胞核。     

流式细胞仪鉴定青钱柳倍性方法的建立及其应用

【目的】利用流式细胞仪检测青钱柳(Cyclocarya paliurus)的染色体倍性,为青钱柳种质鉴定及遗传育种研究提供技术支持和基础数据。【方法】以青钱柳叶片为材料,比较了裂解液种类、离心处理和叶片保存方式对倍性检测效果的影响。建立的青钱柳流式细胞分析倍性的方法为：取参照样本和待测样本叶片各0.50～1.00 cm²,加入1 mL的mGb裂解液中快速切碎,过滤后加入20μL的碘化丙啶(PI)染色1 min即可上机检测。利用建立的方法对1 395份青钱柳种质资源的倍性进行检测。【结果】mGb裂解液的裂解效果最好,峰图质量最优。细胞核悬浮液过滤后可无需离心而直接染色并进行测定。4℃冷藏叶片的测定效果最佳,保存时间以7 d为宜。硅胶干燥样本测定效果优于冷冻,硅胶干燥保存时间以150 d为宜。100份试验样本的DNA含量峰值的变异系数(CV)值为2.13%～5.04%,倍性估算值为1.80～2.40的样本判断为二倍体,倍性估算值为3.60～4.20的样本判断为四倍体。倍性估算值为3.00±0.40时,需采用与初判倍性相同的参照样本进行第2次标定。对1 395份青钱柳种...     

水稻OsWHY1基因克隆及过表达与RNAi载体构建

Whirly蛋白是一种单链DNA结合蛋白,是植物特有的存在于细胞核与叶绿体中的双定位蛋白.本研究以水稻品系金23B为材料,从cDNA中克隆得到水稻whirly蛋白基因(OsWHY1).该基因的c DNA全长为1 250 bp,开放阅读框大小为825 bp,编码274个氨基酸.结构域分析结果表明OsWHY1蛋白序列具有whirly蛋白家族共有的whirly结构域.蛋白质序列比对分析表明,OsWHY1蛋白序列与玉米(Zea mays),小米(Setaria italica),黍(Panicum miliaceum),高粱(Sorghum bicolor),大麦(Hordeum vulgare)的蛋白序列相似性分别为79. 8%、83. 1%、82. 7%、78. 7%和75. 3%.此外,本研究通过酶切酶连的方法成功构建了pU1300-OsWHY1过表达载体和PTCK303-OsWHY1 RNA干扰载体,为进一步研究OsWHY1基因在水稻持绿性中的功能打下基础.     

烟草原生质体活力检测和细胞核染色方法的研究

本试验以烟草叶片和烟草悬浮系制备的原生质体为材料,采用不同染料对原生质体活力和细胞核进行染色效果比较.结果表明,原生质体活力观察宜采用荧光素双醋酸酯（FDA）染色法,染色效果清晰易于观察,四嘧唑蓝（MTT）法则可定量反映原生质体活力;相对于其他细胞核染料,DAPI对不同来源的原生质体细胞核染色效果均较好,能够清晰地对原生质体进行观察和计数.本研究为今后原生质体的检测提供有用的参考.     

基于DNA含量的复合鲫倍性分析

通过对复合鲫血细胞DNA含量的测定,探讨了其倍性和产生机制等方面的问题.结果显示,复合鲫的DNA含量明显多于母本种彭泽鲫的DNA含量,且所测14尾中多数个体的DNA含量超过或接近四倍体的DNA含量,少数个体的DNA含量介于三倍体和四倍体之间.推测多数复合鲫个体为复合四倍体异育彭泽鲫,其染色体组包含母本彭泽鲫的全套染色体和父本单倍染色体组所产生的子代,少数个体可能为非整倍体.     

正常和细胞质雄性不育水稻线粒体DNA限制性内切酶的酶切图谱分析

从N,cms-WA,cms-BT和cms-RL四种不同细胞质源的水稻中制备线粒体DNA。用限制性内切酶Pst Ⅰ,Hind Ⅲ和Xho Ⅰ等酶切线粒体DNA经琼脂糖凝胶电泳,发现水稻N,cms-WA,cms-BT和cms-RL细胞质确有不同的线粒体DNA,不同的保持系之间也存着一定的差异。水稻线粒体DNA最小分子的大小在195～245kb之间。     

肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸提取方法比较与改进

为了得到一种高效的肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸(DNA)提取方法,比较OMEGA、天根、宝生物、全式金4种细菌基因组DNA提取试剂盒对肠道集聚性大肠杆菌基因组DNA的提取效果,并对宝生物、全式金试剂盒提取方法进行优化;测定所提取的基因组DNA的纯度及浓度,并进行基因组完整性检验及特征基因检测。结果表明,使用全式金细菌基因组DNA提取试剂盒提取肠道集聚性大肠杆菌基因组DNA时,通过增加溶菌酶孵育时长至40 min,同时蛋白酶K的用量增加1倍,基因组DNA提取浓度可提高约14.5倍。     

水稻和小麦胚乳发育的比较

以水稻盐粳235和小麦杨麦5号为,和整体解剖和树脂包埋切片等方法比较研究了这两种作物胚乳细胞分裂、分化和充实的特点,两者发育的主要差异有：（1）水稻胚囊呈香蕉形;小麦胚乳囊呈现瓜子形,小麦的游离核与胚乳细胞要比水稻大;（2）水稻游离核的分裂以无丝分裂为主,而小麦游离核的分裂以有丝分裂为主,水稻游离核及细胞的分裂速度较小麦快,（3）水稻胚乳细胞中淀粉体约在花后第4天出现,蛋白质体约在花后第5天出现;小麦胚乳细胞中淀粉体约在花后第7天出现,而蛋白质体约在花后第9天出现;（4）水稻胚乳淀粉体中含有多个淀粉粒,而小麦胚乳淀粉体中仅含有一个淀粉粒;（5）水稻胚乳含两种蛋白质体类型,即PB1和PB2,而小麦胚乳只含有一种蛋白质体;（6）水稻胚乳的背部有多层糊粉层细胞,其细胞壁上没有内突,而小麦腹部（沟）维管束的糊粉层细胞壁上有内,帝些细胞进而转化为胚乳转移细胞。     

甲壳胺对水稻根生长的促进作用1

用三种不同粘度的甲壳胺 (其中 1、 3号为虾壳制品、 2号为蟹壳制品 )处理水稻种子 ,其中 3号对水稻种子有明显促进生长作用 ,特别是对根的生长促进作用更强     

Antisense expression of a rice cellular apoptosis susceptibility gene (OsCAS) alters the height of transgenic rice

Cellular apoptosis susceptibility (CAS) gene plays important roles in mitosis, development and export of importin α from the nucleus, but its function in plant is unknown. In this study, a rice CAS ortholog (OsCAS), which encodes a predicted protein of 983 amino acids with 62% similarity to human CAS, was identified. DNA gel blot analysis revealed a single copy of OsCAS in the rice genome. A 973 bp fragment at the 3′ end of OsCAS cDNA was cloned from rice cDNA library and transferred into rice in the antisense direction under the control of CaMV 35S promoter via Agrobacterium-mediated transformation method, 105 transgenic lines were obtained. Expression of OsCAS was suppressed in the antisense transgenic lines as revealed by semi-quantitative RT-PCR. The antisense transgenic lines showed dwarf phenotypes. The results indicated that OsCAS was involved in culm development of rice.     

Antisense expression of a rice cellular apoptosis susceptibility gene (OsCAS} alters the height of transgenic rice

Cellular apoptosis susceptibility (CAS) gene plays important roles in mitosis, development and export of importin a from the nucleus, but its function in plant is unknown. In this study, a rice CAS ortholog (OsCAS), which encodes a predicted protein of 983 amino acids with 62% similarity to human CAS, was identified. DNA gel blot analysis revealed a single copy of OsCAS in the rice genome. A 973 bp fragment at the 3' end of OsCAS cDNA was cloned from rice cDNA library and transferred into rice in the antisense direction under the control of CaMV 35S promoter via Agrobacterium-mediated transformation method, 105 transgenic lines were obtained. Expression of OsCAS was suppressed in the antisense transgenic lines as revealed by semi-quantitative RT-PCR. The antisense transgenic lines showed dwarf phenotypes. The results indicated that OsCAS was involved in culm development of rice.     

水稻-白叶枯病菌互作中过氧化氢酶的研究

以3种水稻白叶枯病菌和3个抗、感水稻为样品,研究了水稻-白叶枯病菌互作中过氧化氢酶的变化.研究结果表明:接种15d的水稻CAT无活性,CAT同工酶电泳也未显示酶带,对照组CAT则显示活性;在NB培养基中生长的白叶枯病菌显示CAT活性;用水稻酶解液培养了3种病原菌,菌体显示CAT活性,抗、感水稻对白叶枯病菌的影响不同,抗病水稻使病原菌CAT活性降低,感病水稻使CAT活性升高.     

杂交稻及其三系叶片衰老过程中叶绿体的变化

研究了杂交稻及其三系叶片衰老过程中叶绿体数量和结构的变化。     

抛物母线叶片螺旋输送机运移及接触特性分析

粮食乃生存之本，为了提高水稻种子生产运输的时效性，设计了一种抛物母线型叶片的螺旋输送机。采用离散单元法（discrete element method, DEM）的颗粒系统仿真，探究螺旋输送机输送水稻种子的运动规律，提高水稻种子卸料速率的同时降低叶片损耗。建立Hertz-Mindlin软球干颗粒接触模型，通过对比普通直母线叶片，分析了三种螺杆倾角下不同螺旋转速水稻种子的运移与接触特性。研究结果表明：抛物母线叶片将水稻种子的动能变化表现为加速入料、稳定输送和高速卸料三个工作阶段，且水稻种子在沿螺杆轴向前进的同时还具备不同频率和幅度的周向运动。相同转速下，600 rpm的0°倾角抛物母线叶片稳定输送水稻种子的卸料速率最高为82.3 g/s，但90°倾角的水稻种子回流现象较为明显，平均卸料速率降低了77.8%。相同倾角下，45°的1 800 rpm高转速时，抛物母线叶片水稻种子的法向重叠量相较直母线叶片最大减小了10.2%；90°倾角下1 300 rpm~1 800 rpm中高转速时，抛物母线叶片水稻种子的平均接触数小于直母线叶片1.3%，降低了运输过程中叶片的磨损程度。研究结果揭示了水稻种子的运移规律，可为螺旋输送机的机械化高效运输提供理论依据。     

GC-MS结合嗅辨仪鉴定不同酒龄黄酒中的关键挥发性风味物质

为了研究金色年华——一种有名的黄酒中的挥发性风味物质,选取3种不同酒龄的金色年华为样品,采用固相微萃取(SPME)结合气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对其挥发性风味物质进行定性和定量分析.同时利用AC'Scent嗅辨仪测定其中挥发性风味物质的嗅觉阈值,结合它们的含量计算出风味物质的香气活力值(OAV).SPME-GC-MS结果显示黄酒中挥发性风味物质有酯类(17种)、醇类(10种)、酸类(6种)、醛类(4种)、酮类(1种)、酚类(1种)和内酯类(2种).根据OAV值判断出不同酒龄金色年华中的主要挥发性物质.大部分GCMS检测出物质的OAV值大于1,表明它们对黄酒的气味可以产生影响.在3种酒龄黄酒中异丁醇具有最高的OAV值,其他主要的挥发性物质有异丁酸、乙酸乙酯和苯乙醇.     

适用于SSR分析的半粒水稻干种子DNA快速提取

 为了寻找操作简便、耗时短、成本低,适用于简单重复序列(SSR)分析的水稻基因组DNA快速提取方法,以水稻沈农265的半粒干种子为材料,采用SDS提取液进行一步裂解,并将RNA去除操作融入抽提过程,SDS浓度为0.5%(W/V),水浴10min,氯仿/异戊醇抽提,简单快速地获得了高质量水稻基因组DNA。经琼脂糖凝胶电泳检测,DNA纯度较高,完整性较好,能够满足SSR扩增模板的需求。该方法可大大缩短水稻种子DNA提取时间,为SSR标记在水稻种子遗传多样性分析、分子标记辅助选择等方面的应用奠定基础。     

水稻对白叶枯病菌抗性与活性氧关系的研究

以 3种水稻白叶枯病菌和 4个抗、感水稻品种为样品 ,研究了水稻对白叶枯病菌抗性与白叶枯病菌细胞保护酶以及氧自由基的关系。研究结果表明 :接种 15d的水稻SOD、POD显示活性 ,而CAT无活性 ;用水稻叶片酶解液培养 3种病原菌 ,菌体显示SOD和CAT活性 ,但未测出POD活性。抗、感水稻对白叶枯病菌的影响不同 ,感病水稻使病原菌SOD和CAT活性升高 ,抗病水稻使白叶枯病菌SOD、CAT活性降低。而抗、感水稻对白叶枯病菌氧自由基的影响 ,正好与对酶的影响相反。