聚丙烯酰胺凝胶电泳检测水稻SSR标记

以水稻为试验材料,提取水稻基因组DNA,选择多态性SSR标记,并将标记产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后硝酸银染色,试图建立了一种行之有效、简便、快捷的应用于水稻SSR标记的PAGE银染检测方法。     

摇蚊基因组DNA的提取方法研究

采用动物基因组DNA快速抽提试剂盒法、SDS法、CTAB法、NaCl法4种方法提取摇蚊基因组DNA.通过紫外分光光度计分别检测所得样品DNA在波长为260nm和280nm的吸光值,根据A260/A280的比值检测其纯度和浓度.采用PCR技术获得摇蚊COI基因,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR-COI.综合分光光度法与电泳结果筛选出最适合提取摇蚊基因组DNA的方法.结果表明:SDS法所得样品DNA纯度最高,试剂盒法所得DNA浓度最大.同时综合比较DNA纯度与浓度分析得出:试剂盒法SK8222(改良)提取摇蚊基因组DNA为最佳方法,其次为SDS法或CTAB法(改良).     

碘化钠法提取牦牛基因组DNA的研究

目的,应用碘化钠法从牦牛全血中快速提取基因组DNA,并检验其效果.方法,使用碘化钠裂解血细胞,氯仿-异戊醇抽提DNA,乙醇沉淀DNA,紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳测定DNA的浓度和纯度.结果,提取DNA纯度的平均值1.58,浓度的平均值58.6 ng/μL,分子量大约23 kb,无RNA污染.结论,NaI法操作方便,所需设备简单,可从牦牛全血中快速抽提得到基因组DNA,但提取DNA的纯度偏低.     

羊猪鸭基因组DNA提取及DNA条形码分子鉴定

筛选羊肉、猪肉及鸭肉基因组DNA提取方法,并进行DNA条形码鉴定.以羊猪鸭三种肉类为实验材料,采用传统法(SDS法)、chelex-100法、异硫氰酸胍法、试剂盒法提取基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和COI序列扩增法对提取的效果进行检测和比较,利用建立的方法提取DNA并进行DNA条形码鉴定.四种方法均能从样品肌肉组织提取到基因组DNA,其中SDS法和试剂盒法得到的DNA质量最佳;异硫氰酸胍法DNA质量较好,操作时间长; chelex-100法简单、快速,但DNA含杂质较多,质量较差.四种方法均可提供满足DNA条形码分子鉴定的要求DNA,实际应用中可根据条件选择相应的方法.     

棉花DNA的提取及其SSR分子标记体系的建立

针对棉花富含酚类、多糖等次生物质的特点,建立了一种简便、快速的提取高纯度棉花基因组DNA的方法。同时建立了适合棉花SSR标记的体系和实验方案,并对所构建的QTL定位群体进行了SSR-PCR检测,得到了清晰的多态性SSR标记,为SSR分子标记技术在棉花育种中的应用打下了基础。     

叩甲科昆虫微量基因组DNA抽提方法的研究

叩甲科昆虫种类数量众多,分布广泛,很多种类都是重要的地下害虫。由于叩甲科昆虫外部形态相似度非常高,传统的形态分类工作具有较大的难度,对于叩甲科的系统发育研究大多基于分子标记进行展开。目前很多昆虫基因组的抽提方法会破坏整个虫体,为此,本研究改进了1种微量昆虫基因组DNA的抽提方法,采用蛋白酶K消化法,以叩甲昆虫的1条后足肌肉作为抽提对象,以期在不破坏叩甲主要鉴定特征的前提下,提取到较高质量的基因组DNA。同时,对提取到的基因组进行PCR扩增和测序,结果表明该方法抽提到的基因组DNA可以应用于分子学相关试验。由于该方法简单快速,故针对大批量样本抽提时可有效降低成本。     

扩展青霉(Penicillium expansum)PF898基因组DNA提取方法的比较

利用CTAB法、SDS改进法和SDS快速法3种DNA提取代表性方法,对扩展青霉(Penicillium expansum)PF898基因组DNA的提取进行比较研究.CTAB法提取的DNA样品纯度最高,SDS裂解法制备的DNA得率最高;CTAB法和SDS改进法所得DNA都可直接应用于限制性酶切分析;3种方法所提取的DNA均能满足扩展青霉PF898脂肪酶基因和18S rRNA的PCR扩增.总体而言,SDS法简便、快速、得率高,是一种理想的扩展青霉基因组DNA提取方法.     

不同动物肌肉组织中DNA提取方法研究

实验目的旨在从三种提取方法中筛选出一种经济适用、操作简单、快速且能满足后续PCR扩增检测技术的动物肌肉组织中的DNA提取方法.分别采用SDS法、试剂盒法、异硫氰酸胍法提取猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、草鱼肉的生鲜肌肉组织以及高压肌肉组织的基因组DNA.通过酶标仪、琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA进行质量检测,然后根据五种动物的线粒体细胞色素B基因(cytb)保守序列设计特异性引物,进行PCR扩增结果来验证方法的可行性.结果显示,异硫氰酸胍法在生鲜和高压肉中提取DNA的浓度和纯度高于SDS法,且此方法经济适用、操作简便、快速,所提取DNA质量能满足后续PCR实验的要求.     

一种快速简单高效提取植物DNA的方法

在综合分析多种提取植物DNA方法的基础上,改良发展了一种快速简便高效的DNA抽提方法.以多种植物的子叶、叶片以及愈伤组织为材料,采用本方法进行抽提纯化,得到的DNA质量好、得率高,且提取过程简单,适合于大批量快速提取植物DNA.     

菊叶香藜（Chenopodium foetidum）基因组DNA的提取方法研究

文章通过传统CTAB法、改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和试剂盒法等5种方法,对菊叶香藜进行基因组DNA提取,旨在筛选一种菊叶香藜基因组DNA的适宜提取方法。同时用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对5种方法所提DNA进行检测,并对改良CTAB法提取的DNA进行RAPD-PCR扩增检测。结果表明：改良CTAB法提取速度较快,便于操作,提取的DNA质量较好,进行的RAPD-PCR扩增条带清晰,能满足分子标记的要求。因此,改良CTAB法为菊叶香藜基因组DNA可靠并合适的提取方法。     

黑木相思基因组DNA的快速提取

用SDS高盐介质法和1.5×CTAB法提取黑木相思幼叶及叶状柄基因组DNA,将其与2×CTAB法、3×CTAB法、改进的CTAB法进行比较,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、限制性内切酶消化、RAPD(Radomly Amplified Polymorphic DNA)和ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)等方法进行鉴定.结果表明,叶状柄多糖的质量分数较幼叶少,更易于基因组DNA的提取;SDS高盐介质法与1.5×CTAB法提取叶状柄的基因组DNA得率为180.0～697.5 μg·g-1,分子质量为48 kb,D(260)/D(280)=1.750～1.955,无需经Rnase 处理,可直接用于限制性酶切和RAPD及ISSR分析;1.5×CTAB法所提的基因组DNA的纯度优于SDS高盐介质法.综合考虑认为,1.5×CTAB法可作为黑木相思基因组DNA快速提取的简便方法.     

一种从小麦干种子中快速提取DNA的优化方法

对植物组织DNA抽提是在分子水平上对植物进行系统分析与研究的基础性工作．本文提供了一种从小麦干种子中快速提取总DNA的优化方法．该方法不需液氮冷冻或是冻干组织脱水和水浴，用氯仿对材料进行预处理。使用1．5％的SDS抽提缓冲液和氯仿／异戊醇处理，并用预冷的无水乙醇沉淀DNA，即可在短时间内得到小麦基因组总DNA．实验证明，用该方法每300mg干种子可得到约30-40μg的总DNA，其产量和质量均适合进行SSR分析．     

从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究

从血液中提取基因组DNA的传统方法是先得到淋巴细胞，再用蛋白酶K、SDS消化，然后用酚、氯仿抽提，乙醇沉淀．CTAB法提取基因组DNA多应用于植物和微生物，从全血中提取基因组DNA报道甚少．采用改良的CTAB法从全血中提取基因组DNA，并以传统方法和TAKARA Blood Genome DNA Extraction Kit作对照．结果表明：CTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA，并且纯度达到1．8～2．0，可以满足PCR扩增和限制酶切等实验的要求．     

苔藓植物DNA不同提取方法的比较分析

以苔藓植物为材料,比较快速提取法、SDS法和改良CTAB法(自行设计)提取苔藓植物总DNA的效果.结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA质量最好(A260/A280为1.83～1.86;A260/A230为2.05～2.50),快速提取法次之(A260/A280为1.64～1.73;A260/A230为1.68～1.77),SDS法较差(A260/A280为1.51～1.61;A260/A230为1.56～1.76).改良CTAB法提取的苔藓植物的DNA适合于作为PCR的模板,并成功地进行了RAPD扩增.     

一种提取植物基因组DNA的方法——改良尿素法

介绍了一种从玉米和水稻叶片中提取高质量基因组DNA的改良尿素法．与其他常用方法如CTAB法、SDS法等相比,这种改良方法具有产率高、快速省时、可常温操作、成本耗用低等优点．结果证明,采用这种改良方法获得的基因组DNA纯度高、浓度大,适合用于限制性内切酶的酶切反应、基于PCR基础上的遗传多样性分析、基于传统的Southern杂交的遗传图谱分析以及其他下游分子生物学研究,是一种适于植物基因组DNA制备方法,值得推广的．并针对基因组制备过程中经常出现的难题,分析了产生的原因,提出了具体解决办法．     

甘蓝型油菜青杂7号实验室快速纯度鉴定技术体系的建立

为了建立准确高效的青杂7号杂交种种子纯度鉴定方法,并促进青杂7号的推广。本研究选用青杂7号的恢复系、不育系及F1杂交种,利用60对SSR引物对其进行分析并利用大田制种群体对标记进行验证。同时对碱裂解DNA快速提取方法进行了优化。结果表明:得到的1对SSR共显性标记P49,该标记的鉴定结果与大田鉴定结果基本一致,但SSR标记检测方法比大田检测更快更准确;优化的DNA快速提取方法提取的DNA可以稳定扩增出清晰可见的条带,可以应用于鉴定油菜杂交种纯度,进一步加快了油菜杂交种纯度鉴定的速度。     

用Chelex-100法大规模快速提取牦牛肌肉中基因组DNA

旨在建立快速、大规模提取牦牛(Bos grunniens)肌肉中基因组DNA的方法.试验样品为冰冻保存的九龙牦牛背最长肌(n=10).采用两种取样方法(镊子取样和枪头取样)采集冰冻的肌肉样品,用Chelex-100方法提取其中的基因组DNA,并进行PCR扩增.结果显示,镊子取样和枪头取样提取的基因组DNA,均可用于两个核基因和一个线粒体基因的PCR扩增,但枪头取样简便易行,提取的DNA用PCR扩增细胞色素b,扩增35个循环数的PCR产物可直接测序.表明Chelex-100法可用于快速提取牦牛肌肉中基因组DNA,操作简单,成本低廉,适用于大规模提取组织中的DNA.     

基于DNA的木材树种识别研究进展

从木材识别的角度,对木材DNA提取方法(CTAB、SDS、PTB、DNeasy Plant Mini Kit等)和DNA条形码及DNA指纹图谱等基于DNA的木材树种识别方法进行了综合评述。其中,针对DNA条形码方法,重点阐述了基因组DNA中可用的特征序列来源叶绿体基因(chloroplast DNA,cpDNA)rbcL、matK、trnH-psbA间隔区序列,核糖体基因(ribosomal DNA,rDNA)ITS序列,以及变异位点的识别和系统进化树的应用等问题;针对DNA指纹图谱方法,重点阐述了(RAPD、ISSR、SSR、SNP)4种DNA分子标记方法在DNA指纹图谱中的研究和应用现状。笔者认为,以DNA特征序列为依据的木材树种识别理论上虽然是可行的,但要应用于实际还需开展更多的研究。     

基于DNA的木材树种识别研究进展

从木材识别的角度,对木材DNA提取方法(CTAB、SDS、PTB、DNeasy Plant Mini Kit等)和DNA条形码及DNA指纹图谱等基于DNA的木材树种识别方法进行了综合评述。其中,针对DNA条形码方法,重点阐述了基因组DNA中可用的特征序列来源叶绿体基因(chloroplast DNA,cpDNA)rbcL、matK、trnH-psbA间隔区序列,核糖体基因(ribosomal DNA,rDNA)ITS序列,以及变异位点的识别和系统进化树的应用等问题;针对DNA指纹图谱方法,重点阐述了(RAPD、ISSR、SSR、SNP)4种DNA分子标记方法在DNA指纹图谱中的研究和应用现状。笔者认为,以DNA特征序列为依据的木材树种识别理论上虽然是可行的,但要应用于实际还需开展更多的研究。     

一种适用于绿僵菌克隆筛选的DNA批量快速提取方法

基因组DNA的提取是最基本的分子生物学实验技术,介绍了一种适用于绿僵菌克隆筛选的DNA批量快速提取方法.研究结果表明:使用改良的察氏琼脂培养基(CDA)代替常用的土豆葡萄糖琼脂(PDA)培养绿僵菌,以钢珠振打破碎菌丝,配以简化的酚氯仿抽提操作,可以高效地提取高质量的真菌基因组DNA.本方法中,CDA菌落生长需2～3 d,双样品提取耗时约15 min,每个菌落可获得DNA数百纳克,片段长度在10 kb左右,电泳条带清晰可见.