束缚应激引起小鼠脾内TrKC mRNA水平变化

用地高辛标遍的寡核苷酸探针进行ＲＮＡ缝隙杂交，观察了束缚应激不同阶段的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾内ＴｒｋＣｍＲＮＡ表达水平的变化。结果显示脾内ＴｒｋＣｍＲＮＡ于应激８ｈ时表达明显增加，而于４和１２ｈ时均有不同程度的降低，提示ＮＴ－３／ＴｒｋＣ系统在应激引起的神经－免疫系统相互调节中起一定作用。     

低氧对人支气管上皮细胞HSP70和HIF-1α表达的影响

将人支气管上皮细胞（HBE）在低糖DMEM培养基、1%O2培养不同时间后,分别用RT-PCR和Western blot方法检测细胞HSP70、HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平,同时采用免疫组化技术观察低氧对HSP70蛋白的影响．对照组培养于低糖、常氧条件下．结果表明,低氧条件下,HBE细胞HSP70 mRNA和蛋白表达都有时间依赖性．在1 h时HSP70mRNA转录水平即开始增加,与对照相比差异显著（P<0.05）;在12 h时转录水平最高;而HSP70蛋白的表达略有滞后,在3 h差异显著（P<0.     

毕赤酵母表达猪胃蛋白酶的研究

利用已有的猪胃蛋白酶原A cDNA,构建毕赤酵母pPIC3．5K—pA胞内表达载体．经纤维蛋白消化试验和干酪素琼脂平板法筛选,获得2株高表达的重组子,并研究了在不同pH、不同诱导时间、不同起始浓度和甲醇诱导浓度等条件下表达水平的高低．结果表明：在pH7、诱导72h、起始诱导浓度为OD600为2、甲醇诱导浓度为1％时,重组胃蛋白酶活力最高,达到6．46U／mL．     

鸡与鹌鹑杂交种早期胚胎发育特异表达基因的初步筛选

利用mRNA差异显示技术，对入孵67～91h的鸡（♀）与鹌鹑（♂）杂交种胚胎中mRNA差异表达进行比较，筛选出与杂交种胚胎早期发育相关的特异表达基因，并克隆测序这些序列，分析这些基因在杂交受精蛋早期胚胎发育中的作用，及其对杂交种早期胚胎死亡是否有影响。分析结果表明，已经获得6个杂交种孵化不同时期的基因片段与鸡的mRNA序列具有高度同源性。其中，孵化第72h时胚胎mRNA表达的序列与鸡雌激素受体结合位点相关抗原mRNA具有高度同源性，孵化第79h时产生的差异片段经过比对，发现：与鸡（♀）肽酰-脯氨酰异构酶类似的mRNA序列具有高度同源性。而杂交种胚胎发育到第72h时，可检测到鸡雌激素受体结合位点相关抗原mRNA的表达，比前人所得到的表达时间（胚胎发育在第84h时检测到）提前了12h，这很可能是造成杂交种早期胚胎大量死亡的原因之一。     

预热处理对不同强度运动大鼠肝组织HSP70的影响

目的：观察预热处理对不同强度运动大鼠肝组织HSP70表达的影响。方法：SD大鼠随机分成6组：室温安静组（C）,室温15m／min组（E1）,室温27m／Min组（E2）高温安静组（HC）,高温15m／min组（HE1）,高温27m／min组（HE2）高温组大鼠置于恒温干燥箱中,进行高温预处理,恢复24h,高温运动组分别按规定的速度进行一次性运动。所有运动组运动后即刻麻醉取肝脏组织,安静组不运动麻醉取肝组织。用Western blotting测定各组肝组织中HSP70含量,并对比其差异。结果：（1）室温27m／min运动组肝脏HSP70的表达显著高于室温安静水平（P〈O．01）;与15m／min组相比,室温27m／min组显著性升高（P〈O．01）;（2）高温运动组肝脏HSP70的表达,与高温安静组相比均显著性升高（P〈O．01）,并随着运动强度的增加而表达量增高;（3）高温组肝脏HSP70的含量与对应的室温组相比,均显著性升高（P〈0．01）。结论：运动和高温应激可以诱导肝脏HSP70的表达,运动和高温双重应激可以使肝脏HSP70累积量增高：不同运动强度HSP70的表达程度不同。     

新城疫病毒HN蛋白表达条件的优化、纯化及其活性鉴定

为提高HN蛋白在毕赤酵母中的表达水平,本研究从不同诱导时间、培养基不同pH、不同甲醇诱导剂量等因素对HN基因在毕赤酵母中的表达条件进行优化。按最适条件大量诱导表达,对表达产物进行纯化,并通过血凝试验检测其生物学活性。结果表明pPICZαA-HN／X-33在培养液pH6．0,2．0％甲醇浓度、诱导96h时为最优条件,HN蛋白的表达量最高,可达0．3mg／mL,并具有较好的生物学活性。     

新生物活性肽-daintain/AIF-1在乳腺癌中的表达

采用免疫组织化学两步法分析了乳腺癌组织蜡块切片中daintain／AIF-1的表达．93％的乳腺癌中都有该活性肽的分布,癌旁良性组织中则没有阳性染色或染色很浅．Daintain／AIF-1在乳腺病变级别不同组织中的表达差异很大：增生组织免疫后着黄色,重度不典型增生组织着橙黄色,癌组织则染成了棕褐色．进一步用RT-PCR检测发现,乳腺癌新鲜组织中能扩增出daintain／AIF-1的mRNA,而癌旁良性乳腺组织中的daintain／AIF-1 mRNA极微量,几乎看不到扩增的核酸条带．这些研究表明,daintain／AIF-1在乳腺癌中过量表达,可能在乳腺肿瘤的发展过程起到了促进作用．因此,提示daintain／AIF-1可作为乳腺癌病变早期诊断的一个参考指标。     

Cu2+、Zn2+对舟形无齿蚌成熟钩介幼虫的毒害作用

报道了不同浓度的Cu^2 、Zn^2 对舟形无齿蚌成熟钩介幼虫的毒害实验．结果表明：Cu^2 在24h、48h、72h、96h时对钩介幼虫的半致死浓度分别为651．4μg／L、113．8μg／L、45．5μg／L、19．7μg／L；Zn^2 在24h、48h、72h、96h时对钩介幼虫的半致死浓度分别为10296．7μg／L、2612．3μg／L、171．1μg／L、15．9μg／L．在同一时间内浓度越高，钩介幼虫死亡率越大．在同一浓度下随时间延长，钩介幼虫死亡率增大．而半致死浓度随时间的延长却减小。     

PAMD对缺血性脑损伤Bcl-2和Bax基因表达的作用

探讨蝙蝠葛酚性碱预处理对脑缺血后大脑皮质神经元Bcl-2和Bax基因表达的影响．采用Zea Longa等介绍的线栓阻塞大脑中动脉方法制备大鼠脑缺血模型,并用受试药物术前连续预处理模型大鼠7d．采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法测定假手术组、模型组和蝙蝠葛酚性碱高、中、低剂量、尼莫地平、银杏叶片预处理组大鼠缺血后24h大脑皮质中Bcl-2和Bax的mRNA表达变化．行大脑中动脉闭塞后24h大鼠大脑皮质神经元Bcl-2和Bax的mRNA均被诱导表达,Bcl-2 mRNA表达量下降;而Bax mRNA表达量升高．蝙蝠葛酚性碱预处理7d后,缺血后24h大鼠大脑皮质神经元Bcl-2 mRNA表达水平较模型组明显上调,而Bax mRNA表达于缺血后24h明显下调．蝙蝠葛酚性碱能有效调控缺血脑损伤后大脑皮质神经元Bcl-2和Bax的基因表达水平,从而在缺血性脑损伤中起到神经保护作用．     

Elafin重组腺病毒载体在气道上皮细胞中表达的时相性变化研究

为研究elafin重组腺病毒表达载体Ad～elafin转染气道上皮细胞的特性，探讨其在上皮细胞中表达的时相性变化，运用①应用原代培养技术培养人气道上皮细胞；②Ad—elafin表达载体转染气道上皮细胞；③在转染后不同的时相中，采用荧光显微镜观察报告基因GFP的表达，ELISA法单克隆抗体检测细胞上清液elafin蛋白的表达，Northern膜杂交检测elafin基因mRNA的表达量等方法进行研究．发现：①原代培养人气道上皮细胞约5d即可作为靶细胞。②转染Ad—elafin24h时，荧光显微镜下可见上皮细胞内有少量的GFP表达，随着时间的延长，细胞内荧光逐渐增加，96h时GFP荧光阳性的细胞约为80％。③转染24～96h，实验组细胞上清液elafin的含量高于对照组（p〈0．01）；同时elafinmRNA的水平高于对照组（P〈0．05，0．01），且elafin表达及elafinmRNA水平在一定时间内呈时间依赖性关系。结论：Elafin重组腺病毒表达载体Ad—elafin成功转染人气道上皮细胞，目的基因不仅能在上皮细胞中表达，而且elafin蛋白具有细胞外分泌作用．     

HDAC1、8在肺泡Ⅱ型上皮细胞间质转化中的表达及意义

目的:观察TGF-β1作用下,肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN在EMT过程中HDAC1、8的表达情况及TSA对TGF-β1诱导细胞EMT的影响。方法:将TGF-β1加入到体外培养的细胞中,于不同时间收取细胞,采用WB及Real-time RT-PCR检测HDAC1、8及E-cad、α-SMA的表达情况。然后将TGF-β1加入经过TSA预处理的细胞中,于不同时间收取细胞,重新检测上述基因。结果:加入TGF-β1后,E-cad蛋白表达下调;α-SMA蛋白表达上调;HDAC1蛋白表达上调;HDAC8蛋白表达下调。E-cad mRNA表达下调;α-SMA及HDAC8的mRNA均于12 h表达上调,6 h、24 h表达下调;HDAC1 mRNA表达于6 h下调,24 h上调。加入TSA后,E-cad蛋白表达上调;α-SMA、HDAC1及HDAC8蛋白的表达均下调。E-cad mRNA表达上调;α-SMA mRNA表达于6 h、12 h上调,24 h下调;HDAC1 mRNA表达下调;HDAC8 mRNA表达上调。结论:TGF-β1体外诱导的RLE-6TN细胞EMT,可以通过应用TSA抑制其获得α-SMA表型、失去E-cad表型,从而部分逆转TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮EMT。     

天然药物槟榔碱对氧化低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的保护作用研究

研究天然药物槟榔碱对培养的牛主动脉内皮细胞氧化损伤时MCP-1和ICAM-1mRNA表达水平的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。用血管内皮细胞与不同浓度槟榔碱预孵育20h后,给予氧化低密度脂蛋白损伤,提取各组细胞总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应技术,以β2-微球蛋白为内参照,检测内皮细胞MCP-1和ICAM-1mRNA表达水平的变化。得到内皮细胞与槟榔碱预孵育后,其MCP-1和ICAM-1mRNA的表达水平明显低于与氧化低密度脂蛋白直接接触的细胞。说明氧化低密度脂蛋白可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1和ICAM-1mRNA表达水平增加,槟榔碱可以减轻其过量表达,保护内皮细胞。     

热应激对大鼠脾脏组织形态学及TLR2/4表达的影响

为了探究热应激下大鼠脾脏组织形态学及TLR2和TLR4表达的变化情况,本研究通过建立不同处理的大鼠热应激模型,即38℃-单次热应激(6 h)、38℃-多次热应激(2 h/次,3次)、43℃-单次热应激(6 h)、43℃-多次热应激(2 h/次,3次),以室温条件下饲养的大鼠作对照,收集各组脾脏组织进行组织学和TLR2、...     

急性应激对小鼠空间学习记忆功能及海马和前脑皮层c-Fos蛋白表达的影响

采用足底电击急性应激模型,通过旷场实验和Morris水迷宫实验分别测试小鼠的行为和空间学习记忆能力;以免疫组织化学方法检测c—Fos蛋白在海马和前脑皮层的表达．结果显示,与对照组小鼠比较,急性应激组小鼠在新异环境下的自发行为明显降低（P〈0．05,P〈0．01）,而在水迷宫实验中,急性应激组小鼠空间学习记忆能力明显提高（P〈0．05,P〈0．01）;与对照组小鼠比较,急性应激组小鼠海马CA1区、齿状回和前脑皮层c—Fos蛋白的表达在应激后1h明显增强（P〈0．05,P〈0．05,P〈0．01）．结果提示,急性应激所致小鼠空间学习记忆功能的改变可能与c—Fos蛋白表达的上调有关．     

大鼠松果体N-乙酰转移酶基因的昼夜节律性表达

探讨12 h光照、12 h黑暗交替(LD)光制下松果体N-乙酰转移酶(NAT)基因的昼夜节律性表达。SD大鼠在LD光制下饲养4周后,在一昼夜内每隔4h采集一组松果体组织,提取总RNA,进行竞争性定量RT-PCR,测定不同昼夜时点(ZT)样品中NAT基因mRNA的相对表达量。用余弦函数获取节律参数,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律。结果表明松果体NAT基因mRNA表达呈现昼夜节律性振荡(P<0.05),峰值(mRNA水平为1.07±0.23)和谷值(mRNA水平为0.61±0.15)分别位于ZT16和ZT4,峰值相位-241.80±14.94,振幅0.23±0.13,中值0.84±0.11。证实LD光制下松果体NAT基因存在明显的昼低夜高节律性表达。     

PDGF-BB活化PSCs的分子机制研究

血小板生长因子(PDGF)是诱导胰星状细胞(PSCs)活化的重要细胞因子，其分子机制尚不清楚。用PDGF-BB诱导体外培养的PSCs，旨在探讨PDGF信号转导通路在胰纤维化形成的分子发生机制中的可能作用。PSCs与不同刺量PDGF-BB(10ng／mL，25ng／mL和50ng／mL)共培养，24h后收集细胞，采用Western-blotting检测，PSC中磷酸化细胞外信号调节激酶-1(pERK1)蛋白水平和RT-PCR检测Colal(Ⅰ)mRNA的表达。结果表明，不同刺量PDGF-BB作用于PSCs后，各组pERK1蛋白表达比空白对照组有不同程度上调；Colal(Ⅰ)mRNA在PSCs中表达也明显上调，且在一定范围内与PDGF-BB刺量呈正相关。     

3-MA 对阿霉素诱导 K562、K562 / ADM 细胞凋亡及其相关基因 mRNA 表达的影响

目的：通过自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对阿霉素（ADM）诱导白血病K562细胞及K562／ADM细胞的细胞效应和自噬基因Beclinl、凋亡抑制基因SurvivinmR．NA表达的变化观察,探讨自噬在细胞凋亡中的作用和机制．方法：体外培养K562和K562／ADM细胞,采用MTT法分别检测ADM及3-MA预处理对K562、K562／ADM细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时RT—PCR法检测细胞自噬及凋亡相关基因（Beclinl、Survivin）mRNA表达的变化．结果：ADM可抑制K562与K562／ADM细胞增殖,且抑制作用呈现浓度与时间依赖性．ADM诱导组K562与K562／ADM细胞在24h、48h、72h细胞凋亡率均较空白对照组明显提高（P〈0．05）．在ADM诱导前,经3-MA预处理可使ADM诱导的K562与K562／ADM细胞抑制率和细胞凋亡率均较单用ADM显著提高（尸〈0．05）,Bedin1、SurvivinmRNA相对表达量均较单用ADM明显下降（P〈0．05）,呈正相关（r=0．827,P〈0．01）．结论：ADM可抑制K562、K562／ADM细胞的生长,并诱导细胞凋亡．3-MA通过抑制细胞的自噬可增强ADM诱导白血病细胞K562、K562／ADM的凋亡,其机制可能与下调BeclinlmRNA表达,而使Survivin表达受抑制有关．     

心肌肽素在心肌细胞氧化应激中的作用

研究心肌肽素对过氧化氢所致心肌细胞氧应激模型中所起的作用。采用原代培养乳鼠心肌细胞,以200μmol/L过氧化氢作用2 h诱导心肌细胞造成氧化应激模型,细胞损伤前分别给予不同浓度的心肌肽素进行干预。使用RT-PCR检测Caspase-3表达变化,MTT比色法检测原代乳鼠心肌细胞的活力,黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性。过氧化氢组心肌细胞活力低于对照组,超氧化物歧化酶活性下降(P<0.05),caspase-3 mRNA表达升高;心肌肽素组细胞活力、超氧化物歧化酶活性高于过氧化氢组,而caspase-3 mRNA表达水平较过氧化氢组降低(P<0.05),不同浓度心肌肽素之间无明显差别(P>0.05)。心肌肽素对过氧化氢造成的心肌细胞损伤作用有抵抗作用且这种抵抗作用与其抑制凋亡作用有关。     

2种应激诱导大鼠迷走复合体神经元的Fos表达

将大鼠随机分为束缚浸水应激组、束缚应激组和对照组,经1 h应激处理后,采用免疫组化法标记迷走复合体中神经元的Fos基因表达,在亚区和亚核水平上进行组间比较,研究2种应激对大鼠迷走复合体神经元Fos表达的影响。结果表明:束缚浸水应激组迷走背核的吻、中和尾3段Fos阳性神经数量均显著增加(P0.01或0.05),而束缚应激组仅尾段Fos表达显著增加(P0.01);在孤束核的吻、中和尾3段,2种应激引起不同孤束亚核的神经元Fos表达的增加(P0.01);不同应激处理后迷走复合体的不同亚区或亚核神经元的活动会增强,可能与不同应激性胃肠机能障碍的表现密切相关。     

维生素E对硫丹染毒小鼠脾细胞因子基因转录的影响

目的 为了探讨维生素E对硫丹染毒ICR小鼠脾细胞因子白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）和γ-干扰素（1FN．γ）基因转录的影响,我们设计了该实验。方法将24只ICR小鼠随机分成对照组、硫丹染毒组（染毒组）和染毒同时给予维生素E（VE）组（实验组）,所用硫丹和维生素E的剂量分别是：0mg／（kg·d）和0mg／（kg·d）（对照组）、0．8mg／（kg·d）和0mg／（kg·d）（染毒组）和0．8m∥（kg·d）和100mg／（kg·d）（实验组）。灌胃21d后,取其脾,用Real—Time PCR法检测其脾脏IL-2、IL-6、IFN-1基因转录的变化。结果染毒组小鼠脾细胞因子IL-2和IL-6 mRNA水平与对照组相比明显升高,IFN-γ,mRNA水平虽有升高趋势,但无显著变化。实验组小鼠脾IL·2和IL-6 mRNA水平明显低于染毒组,IFN·-γ mRNA水平虽有降低趋势,但与染毒组相比无显著变化。结论上述结果说明,硫丹能促进小鼠脾脏细胞因子IL-2和IL-6的基因转录,但对IFN-γ基因转录没有显著影响;维生素E能缓解或部分缓解硫丹的作用。