非整倍体胚胎发育中MSL复合体组分的RNA表达分析

MSL (male specific lethal) 复合体作为调节果蝇剂量补偿的关键元件，在非整倍体基因表达调控过程中发挥了重要作用．为深入探究非整倍体胚胎发育过程的分子调控机制，运用TSA-FISH (tyramide signal amplification- fluorescence in situ hybridization) 技术比较分析正常二倍体胚胎与常染色体三体胚胎中的MSL复合体组分基因表达模式，探究复合体重要组分在果蝇非整倍体胚胎不同时期的表达水平，以及亚细胞定位的变化．研究结果表明，在MSL复合体尚未组装的非整倍体胚胎发育早期，即母体表达阶段，多数复合体组分基因就已存在转录本水平上的差异，而这种表达差异主要源自于母体的非单倍体配子．随着发育的进行，染色体片段的增加导致基因组内剂量平衡发生变化，由此产生的反式剂量效应将引发MSL复合体各组分表达水平的差异变化，而这种差异将持续作用于后续非整倍体胚胎发育的各个时期．      

沉默Vsx1基因后金鱼胚胎的差异蛋白质组学研究

Vsx1基因是与金鱼眼睛空间模式形成相关的调控基因和二倍体依赖型机制的候选目标基因.为进一步探究Vsx1在金鱼胚胎发育过程中的功能及其调控方式,采用反义寡核苷酸技术抑制Vsx1的表达,应用双向凝胶电泳(2-DE)进行蛋白分离,经PDQuest软件图谱分析,质谱分析初步鉴定,获得了Vsx1沉默引起的13个差异蛋白质.如Prohibidn-2(PHB2)、Nme2 protein等,并对这些差异蛋白质可能直接或间接地受到Vsx1的调控机理和Vsx1在金鱼胚胎发育过程中的功能进行了初步的理论分析,为进一步阐明Vsx1的功能和调控机制奠定了良好的基础.图3,表2,参17.     

小鼠胚胎脑特异表达的新基因bsg3的克隆及初步研究

通过消减差异筛选的方法克隆到一个在小鼠胚胎脑特异表达的基因bsg3(brain specific gene 3).它编码的蛋白与人的KIAA0961具有80.3%的同源性.bsg3基因包含一个1644bp的完整阅读框,编码一个含548个氨基酸,具有1个KRAB结构域(kruppel-associated box)和13个C2H2型锌指结构域的蛋白.该基因定位在小鼠第7号染色体上,包含5个外显子,4个内含子.以bsg3基因全长编码区为探针的原位杂交结果显示,bsg3在小鼠胚胎脑及鸡胚脑特异表达.半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的结果表明,在成体小鼠的组织中,bsg3基因脑中表达也较强.这提示bsg3基因可能在小鼠脑发育中起着重要的作用.对bsg3基因时间和空间的表达模式的分析将有助于进一步揭示它在脑发育及功能维持中的作用.     

小鼠胚胎发育中期肝细胞增殖与凋亡

探讨小鼠胚胎中期肝发育过程细胞增殖与凋亡的变化规律、相关基因P21及Ki-ras在肝发育中的表达意义。在胚胎中期的小鼠肝组织中，采用免疫组织化学及切口末端标记法，可检测到小鼠肝发育过程中的细胞增殖与凋亡相伴存在，这与肝发育变化密切相关。用原位杂交的方法检测到P21时,Ki-ras基因在胚胎肝发育中期并没有表达，说明这两个细胞周期调控基因可能在胚胎肝发育中期并不起作用，而与其他的基因有关。     

小鼠胚胎发育中期肝细胞增殖与凋亡

探讨小鼠胚胎中期肝发育过程细胞增殖与凋亡的变化规律，相关基因P21及Ki-ras在肝发育中的表达意义，在胚胎中期的小鼠肝组织中，采用免疫组织化学及切口末端标记法，可检测到小鼠肝发育过程中的细胞增殖与凋亡相伴存在，这与肝发育变化密切相关，用原位杂交的方法检测到P21时，Ki-ras基因在胚胎肝发育中期并没有表达，说明这两个细胞周期调控基因可能在胚胎肝发育中期并不起作用，而与其他的基因有关。     

P16基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9 d龄至E14 d龄昆明种正常小鼠胚胎为材料，利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交，研究了p16基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明：p16基因不参与E9和E10 d胚胎发育中的器官原基形成，参与器官的进一步分化成熟过程，这些器官主要有眼、脑、心、肺、脊柱和面颌骨，肝组织的发育与其无关；不同的器官有不同的细胞周期调控机制.     

单倍体育种——林木快速育种的新方法

一、林木单倍体育种的意义植物花粉(雄配子体)通过传粉作用与卵细胞(雌配子体)相结合形成受精卵。受精卵发育成为种子。种子以及由种子长成的植株的细胞中,包含着来自精、卵即父母双方的两套遗传物质——染色体,这从细胞遗传学上说是二倍体。花粉和卵细胞分别由花粉母细胞和大孢子母细胞经减数分裂而形成。它们的染色体数目为体细胞染色体的一半,也就是说,在花粉和卵细胞中只有一套染色体,因而是单倍体。花     

乙肝病毒hbx基因诱导斑马鱼胚胎发育背部化畸形

为了研究HBX对胚胎发育的影响,从含有HBX基因的质粒上转录HBX mRNA,显微注射入斑马鱼早期胚胎,在bud期进行表型观察,并用全胚胎原位杂交法检测HBX对斑马鱼胚胎早期发育的影响,用脊索标记基因ntl和骨骼肌标记基因MyoD作为探针检测胚胎发育背部化的特征表型。首次发现HBX的表达引起斑马鱼胚胎早期发育背部化畸形,HBX过量表达的胚胎背部化表型与早期胚胎wnt缺失表达导致的胚胎发育背部化表型一致,HBX可能通过激活wnt/β-catenin信号通路的表达和调控,造成胚胎发育背部化的畸形。     

两种寄生吸虫的染色体组型和繁殖方式

以精巢细胞染色体空气干燥标本制备技术,研究两种寄生吸虫的有丝分裂和减数分裂染色体,结果表明:片形吸虫体细胞染色体,2n=20,包括三对中着丝点、一对亚中着丝点、五对亚端着丝点、一对端着丝点染色体,这和前人报道的片形吸虫染色体形态有些差异。另外,群体中有65.3％的虫体细胞染色体为三倍体,3n=30。观察片形吸虫的配子形成,发现二倍体个体细胞减数分裂能正常进行,形成单倍体配子;三倍体个体细胞不进行减数分裂,也没有配子形成,推测二倍体虫体的生殖方式为有性繁殖,而三倍体虫体的生殖方式为孤雌生殖。并认为我国存在的两种片形吸虫:大片吸虫和肝片吸虫,有三倍体和二倍体两种,分别行无性繁殖和有性繁殖。     

泽蛙单倍体胚胎核糖核酸（RNA）的提取和测定

本研究以同一形态发生期(鳃盖闭合期)的泽蛙(Rana limnocharis Bole)雌核单倍体胚胎和这一期的泽蛙二倍体胚胎为材料，仿Sze(施履吉)法分别测定它们的细胞数目，并用苯酚法提取各自的核糖核酸，然后用紫外分光光度计对所提取的核糖核酸进行定性、定量。实验结果表明：鳃益闭合期泽蛙单倍体的细胞数目是二倍体的1．53倍，但每一细胞内的RNA含量却不及二倍体细胞的二分之一。作者据此讨论了泽蛙单倍体胚胎死亡的原因。     

小鼠胚胎发育中期心脏细胞增殖与凋亡的研究

采用免疫组织化学及切口末端标记法(TUNEL),对胚胎中期的小鼠心脏组织进行检测,结果表明:小鼠心脏发育过程中的细胞增殖与凋亡相伴存在,与心脏发育变化密切相关.而用原位杂交的方法检测,P21、Ki ras基因在胚胎心脏发育中期并没有表达,说明这2个细胞周期调控基因在胚胎心脏发育中期并不起作用,可能与其他的基因有关.     

小白菜与大白菜亚种间杂交减数分裂染色体行为观察

研究了小白菜与大白菜亚种间杂交及回交世代花粉母细胞减数分裂行为,发现杂种F1花粉可染率90.7%,表现出较好的育性;回交BC1-3花粉可染率升高,表明育性逐步提高.F1花粉母细胞减数分裂正常染色体行为细胞数占总观察数的89.1%,这解释了F1具有较好育性的原因.杂种F1减数分裂各个时期会出现不正常现象,如双核仁、配对紊乱、染色体桥、染色体片段丢失等,这在一定程度上可以说明杂种F1育性低于正常二倍体的原因.14.3%的BC1花粉母细胞会出现不正常现象,而BC2-3已经相对正常,极少观察到减数分裂不正常现象,表明在回交过程中染色体稳定是一个快速的过程,这与表型及育性调查结果相吻合.     

p53基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9日龄至E14日龄昆明种正常小鼠胚胎为材料,利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA 分子原位杂交,研究了p53基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明, p53基因不参与E9和E10日胚胎发育中的器官原基形成,参与器官的进一步分化成熟过程.这些器官主要有眼、脑、心、肺、脊柱和面颌骨,肝组织的发育与其无关; p53基因一方面参与胚胎发育中的细胞周期调控,另一方面也参与了某些与细胞周期无关的过程;不同的器官有不同的细胞周期调控机制.     

人类肿瘤生物学

<正> 肿瘤的恶性转移至少需要两种遗传变化。其中一种可能是癌基因的活化。另一种可能是我们已在体细胞杂交株中检验的“抑制肿瘤发生”基因的丧失。我们用RFLP标记与核型分析方法,辨认一些染色体的亲本细胞来源,这些染色体在最初不发生肿瘤的体细胞杂交株(NT)中分离,伴随着重新表现出发生肿瘤(TG)的表型。这些正常人细胞与癌衍生细胞融合产生的杂交株用来在裸鼠中检验致癌性。结果指出,正常No.11染色体带有一个(或几个)基因,当它在细胞中以双考贝形式存在时可以抑制恶性转移表型,而Hela—衍生D98细胞的No.11染色体是纯合的(二倍体的)或至少在我们所用的探针之间的短臂片断是纯合的。所检测     

伞状山羊草的C带核型

分析了伞状山羊草的Ｃ带核型，在根尖内，约７％的中期细胞是单倍体，其余的为正常的二倍体其核型属于“３Ａ”型，这在小麦族中是较进化的，伞状山羊草染色体的带型互有差别，使得根据其独特的Ｃ带分布容易单条染色体识别出来。     

花药培养中花粉胚的诱导

1964年,印度的 Guha 和 Maheshwari 首次从毛叶曼陀罗(Dature innoxia)的花药中诱导出胚状体并发育成单倍体植株。由于单倍体植株只含有一套染色体,有利于隐性基因性状的表达,经染色体加倍,又可很快获得纯合植株,这对于提高选择效率、缩短育种年限具有重要意义。因此,近几十年来,花药培养发展很快,据 Maheshwari     

禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达

为研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的机制,设计和构建了以增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因替代病毒APV-1野生型的晚期结构蛋白VPs基因的真核双顺反子表达载体,并观察其在转染进入禽类原代成纤维细胞中的表达翻译状态.以APV-1的c DNA克隆(p HL1003)为模板,运用PCR技术扩增出与野生型病毒APV-1相同的Ori区、早期编码区和晚期Agno-1a区序列作为载体片段;从质粒p EGFP-N1中扩增出编码绿色荧光的EGFP DNA片段;经连接构成重组质粒p HL1003-GFP,通过脂质体细胞转染方法将质粒DNA转染到鸡胚胎和鹌鹑胚胎成纤维细胞中,通过细胞培养观察荧光表达状况.DNA序列分析证实了重组克隆中的EGFP序列与已知的质粒p EGFP-N1中EGFP序列一致.转染72 h后观察鸡和鹌鹑胚胎成纤维细胞,转染成功胚胎细胞明显表达较强的荧光,说明GFP可以在构建的双顺反子重组质粒的下游中正常表达并产生荧光.p HL1003-GFP重组质粒的构建及其在禽类原代成纤维细胞中的高效表达,为我们研究多顺反子翻译起始调控中Agno-1a基因的表达对下游病毒结构蛋白基因的翻译调控机制提供了简洁易用的系统和模型.     

动物性别鉴定与控制研究进展

哺乳动物性别决定是以位于雄性Y染色体短肴上被称为SRY基因为调控中心、多基因参与的级联调控过程。但染色体理论并非性别决定机制的全部，外部环境中的某些因素也是性别决定机制的重要条件。本中对家畜性别控制技术的一些方法的原理、理论基础基本方法和性反转等进行了综述，介绍了家畜的精子和早期胚胎性别鉴定与控制的一些方法。     

糖化酵母在酒精工业中应用研究（Ⅰ）──去除INH1基因的酒精酵母的选育

二倍体耐高温酒精酵母经诱导生孢子，单孢子分离及营养缺陷型遗传标记的制作，获得了一株与亲本发酵性能相当且遗传性能稳定的单倍体菌株ＪＤ９－２２（α，ｓｔａ，ＩＮＨ１，ａｒｇ）。利用酵母的群体杂交方法，通过糖化酵母单倍体菌株２６０６７－４４（ａ，ＳＴＡ，ｉｎｈ，ａｄｅ）于ＪＤ９－２２杂交，选育去除了ＩＮＨ１基因的耐高温酒精酵母单倍体，解除了ＩＮＨ１基因对ＳＴＡ基因在酒精酵母细胞内表达的抑制。