福建两个蛋鸭品种和常见野鸭线粒体DNA(mtDNA)限制性酶切图谱的比较

用７种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｏｃＲⅤ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｂａⅠ）分析了蛋鸭（金定鸭、莆田黑鸭）、野鸭（斑嘴鸭、绿头鸭）的ｍｔＤＮＡ限制性类型，并用双酶法构建了以上鸭类的ｍｔＤＮＡ限制性酶切图谱．结果表明，蛋鸭与野鸭在ｍｔＤＮＡ结构上发生了明显分岐．比较两种野鸭和金定鸭的图谱，发现金定鸭与绿头鸭的亲缘关系较近．     

长吻Wei肝脏线粒体DNA的研究

采用密度梯度离心法及ＤＮａｓｅ Ｉ、ＲＮａｓｅ消化法制备并纯化了长吻Ｗｅｉ肝脏线粒体ＤＮＡ（ｍｔ ＤＮＡ）。用９种限制性内切酬谢ｍｔ ＤＮＡ进行了分析。Ｘｈｏ Ⅰ，Ｂｇｌ Ⅱ、ＥｃｏＲ Ⅰ、Ｐｓｔ Ⅰ、Ｂｇｌ Ⅰ、ＢａｍＨ Ⅰ、Ｈｉｎｄ Ⅲ、Ｓａｌ Ⅰ在长吻Ｗｅｉ ｍｔＤＮＡ分子上分别具１、３、３、２、１、２、４、７、０个切点。ｍｔ ＤＮＡ分子量约１０．３１×１０＾６道尔顿，大小为１６．６９ｋｂ。根据     

小灵猫华东亚种线粒体DNA限制性位点图

提纯了小灵猫华东亚种（ＶｉｖｅｒｒｉｃｕｌａｉｎｄｉｃａｐａｌｉｄａＧｒａｙ）的肝脏ｍｔＤＮＡ．用ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅤ、ＨｐａⅠ、ＫｐｎⅠ、ＭｌｕⅠ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃⅡ、ＳａｌⅠ和ＸｈｏⅠ等１１种识别６碱基对的限制性内切酶对小灵猫华东亚种ｍｔＤＮＡ进行消化分析，１１种限制性内切酶均有１～５个位点；根据单酶消化和双酶消化片段的数目和分子量，构建了小灵猫华东亚种ｍｔＤＮＡ限制性位点图     

草鱼线粒体DNA酶切图谱的研究

用１０种限制性内切酶对草鱼肝脏线粒体ＤＮＡ进行了分析，其分子太小约１６．５８ｋｂ．ＰｓｔＩ，ＢａｍＨＩ，ＸｂａＩ，ＢｇｌＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＢⅡ，ＰｖｕⅡ，ＸｈｏⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＳａｌⅠ在草鱼ｍｔＤＮＡ分子上分别具有２，３，３，４，７，３，６，２，４及０个切点。根据单酶解及双酶解结果建立了草鱼ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱。     

乌珠穆沁羊mtDNA的RFLP研究

用ＡｐａⅠ等７种识别６碱基的限制性内切酶研究了１４只乌珠穆沁羊ｍｔＤＮＡ的ＲＦＬＰ。结果表明,在所研究的个体中检测到３７个酶切位点,１７种限制性态型,其中ＢａｍＨⅠ和ＢｇｌⅠ表现出多态,ＸｈｏⅠ无切点。１７种限制性态型可归结为３种基因单倍型,即单倍型Ⅰ（ＢａｍＨⅠ－Ｃ,ＢｇｌⅠ－Ａ）、单倍型Ⅱ（ＢａｍＨⅠ－Ａ,ＢｇｌⅠ－Ａ）和单倍型Ⅲ（ＢａｍＨⅠ－Ｃ,ＢｇｌⅠ－Ｂ）。ｍｔＤＮＡ多态度π值为０．０２７％,表明乌珠穆沁羊ｍｔＤＮＡ多态性比较贫乏。     

丝羽乌骨鸡mtDNA限制酶酶切研究

应用碱变性法制备丝羽乌骨鸡（简称丝羽鸡）肝细胞ｍｔＤＮＡ，测其分子量为１８．５ｋｂ．用限制性内切酶进行酶切分析，结果表明，ＢａｍＨⅠ、ＰｓｔⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＳａｃⅠ在丝羽鸡ｍｔＤＮＡ分子上分别有１、１、１、２个酶切位点．根据单酶和双酶完全酶切片段的分子量，建立了丝羽鸡ｍｔＤＮＡ的限制酶图谱．与由来亨鸡肝细胞ｍｔＤＮＡ为材料所得的研究结果比较，发现丝羽鸡与来亨鸡在ｍｔＤＮＡ种质方面存在着较大差异．     

斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序

本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。     

大熊猫线粒体DNA酶切片段长度多态性研究

用１２种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＸｈｏⅠ，ＰｓｔⅠ，ＭｓｐⅠ，ＸｂａⅠ，ＰｖｕⅡ，ＨｉｎｄⅢ，ＨａｅⅢ，ＳａｃⅠ，ＨｐａⅡ）对秦岭大熊猫线粒体ＤＮＡ进行了酶切。测定和分析了每种酶所产生片段的数量和大小，并与四川大熊猫的限制性片段进行了比较，发现在相同的６种酶的１６个酶切位点中有一个不同，表明这两地群体间存在着线粒体ＤＮＡ的多态性。其研究结果为进一步研究和保护大熊猫提供了重要依据。     

嗜麦芽假单胞菌质粒pSH1的限制图谱及km^r标记的克隆

对嗜麦芽假单胞菌Ｐ２菌株的质粒ｐＳＨ１进行了限制酶切分析，确定了Ｂｇ１ Ⅱ，ＥｃｏＲ Ⅰ，Ｐｓｔ Ⅰ，Ｘｂａ Ⅰ，ＢａｍＨ Ⅰ，Ｂｇｌ Ⅰ，及Ｐｖｕ Ⅱ共７种限制性内切酶在ｐＳＨ１，质粒上的切割位点，前４种酶均为单一切点，后３种依次为２，７，５个切点。通过双酶切和部分酶切的方法绘制了ｐＳＨ１质粒的限制酶切图谱。将ｐＧＰ１－２质粒上的卡那霉素抗性基因片段插入ｐＳＨ１，获得了重组质粒ｐＳＨ２．ｐＳＨ２     

狮头鹅,莱茵鹅和灰雁mtDNARFLP分析

用ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨｉｎｄⅢ、ＨｐａⅠ、ＭｌｕⅠ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、Ｓａｃ、ＳａｃⅡ、ＳｃａⅠ、ＳｍａⅠ等１３种限制性内切酶对狮头鹅、莱茵鹅和灰雁的线粒体ＤＮＡ进行了单酶消化。结合我们前期的工作,结果表明：狮头鹅和中国鹅其他几个品种的限制性类型完全相同,莱茵鹅和郎德鹅的限制性类型也完全一致;狮头鹅和莱茵鹅间,ＥｃｏＲⅤ、ＳｃａⅠ的限制性类型存在差异,狮头鹅和灰雁间,     

中国白兔线粒体DNA限制性图谱

用 ６ 种限制性内切酶分析了中国白兔的线粒体 Ｄ Ｎ Ａ（ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ）。测得其相对分子质量约为１６．８, Ｅｃｏ ＲⅤ, Ｂａｍ ＨⅠ, ＰｓｔⅠ, Ｅｃｏ ＲⅠ, ＨｉｎｄⅢ在中国白兔 ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ 上分别有 １,２,２,２,６ 个切点, ＳａｌⅠ 在其上没有切点。根据单酶降解和双酶降解片段的相对分子质量,构建了中国白兔ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ的限制性内切酶图谱。     

上海四膜虫(Tetrahymena shanghaiensis)线粒体DNA的酶切分析

该文以六种限制性内切酶对上海四膜虫ｍｔＤＮＡ进行单酶完全酶切,ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＨｈａⅠ酶切均产生４个片段,ＰｓｔⅠ、ＨｐａⅡ、ＨａｅⅢ酶切分别产生５、６、７个片段。不同的酶切征段大小及总和有一定的差异,酶切结果比较,有较大的差异。同其它方法如四膜虫大核ｒＤＮＡ限制性内切酶分析、同工酶分析及皮层细胞骨架组分分析结果一致,进上步证明上海四膜虫是梨形四膜虫复合种的一种。     

萝卜叶绿体rbcL基因定位及ctDNA基因文库的构建

用改进的高离子强度法分离的萝卜叶绿体经ＳＤＳ６０℃裂解，抽提的ｃｔＤＮＡ只需简单纯化即可用于酶切分析，萝卜ｃｔＤＮＡ用４种限制性内切酶ＢａｍＨＩ，ＰｓｔＩ，ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲⅠ分别进行单酶完全酶解，推算其分子量和长度分别为８２．５×１０６６Ｔ １２５ＫＢ。     

紫云英根瘤菌5个互补结瘤菌株所分离到的重组质粒外源片 …

对来源于紫云英根瘤菌７６５３Ｒ总ＤＮＡ基因文库的５个互补结瘤菌株所分离到的重组质粒ｐＮＲ１０２，ｐＮＲ１０３，ｐＮＲ１０８，ｐＮＲ２０３和ｐＮＲ２１３，ＥｃｏＲＩ酶切表明它们分别携带有一个４．６８，５．０１，５．０４，５．１０或９．３８ｋｂ的外源ＤＮＡ片段。选用１１种内切酶进行单、双酶切分析，建立了重组质粒外源片段的酶切图谱，５个质粒都具有１．７ｋｂ的ＥｃｏＲＩ－ＢｇｌⅡ片段和１．９ｋｂ的ＥｃｏＲ     

MDVRispens株B抗的基因的酶切及序列分析

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株接种原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,待出现８０％以上细胞病变后收获,提取细胞和病毒的总ＤＮＡ,以此为模板,根据Ｂ抗原基因核苷酸序列设计一对引物,通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出一条约２．８５ｋ的特异性条带,双酶消化后克隆至质粒ｐＵＣ１９,酶切分析表明该病毒的Ｂ抗原基因上ＨｉｎｄⅡ、ＥｃｏＲⅤ、ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ的酶切位点分布与ＲＢ１Ｂ株、ＧＡ株的     

豌豆中GPAT基因编码cDNA的克隆及分析

参照国外报道的豌豆ＧＰＡＴ基因ｃＤＮＡ序列，设计并合成一对寡核苷酸引物，通过ＲＴＰＣＲ技术，从云南地方栽种的豌豆品种中分离到了ＧＰＡＴ基因的编码ｃＤＮＡ片段，并将其纯化后直接克隆到ｐＧＥＭＴ载体系统中，经ＮｃｏⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切鉴定，所得的重组质粒中含有１３８０ｂｐ左右的片段．采用ＰｓｔⅠ，ＨｉｎｄⅢ两种限制性内切酶进行酶切，酶切图谱分析表明所克隆的豌豆ＧＰＡＴ基因编码ｃＤＮＡ的酶切图谱与国外所报道的该基因ｃＤＮＡ的酶切图谱一致，暗示了该基因在进行上具有一定的保守性．     

AcMNPV大立方形多角体突变株突变位点的证实

纯化了３株在共转染后形成正常多角体的病毒株,提取其病毒ＤＮＡ,并对其做了ＥｃｏＲⅠ、ＢｇｌⅡ酶切分析;克隆含多角体蛋白基因的ＥｃｏＲⅠＩ片段并进行序列测定,证实了此病毒株为回复突变株．     

绿头鸭mtDNA限制性内切酶酶切分析

采用碱变性法制备绿头鸭肝细胞ｍｔＤＮＡ，经纯化后测其分子量为１６．７ｋｂ．用限制性内切酶进行酶切分析，结果表明ＢａｍＨⅠ、ｐｓｔⅠ和ＨｉｎｄⅢ在绿卖鸭ｎｔＤＮＡ分子上分别有４个、２个和３个酶切位点。与由番鸭、北京鸭和建昌鸭肝细胞ｍｔＤＮＡ为材料所得的研究结果比较，发现绿头鸭与番鸭及家鸭在ｍｔＤＮＡ种质方面存在着高度差异。     

棒状杆菌表达载体pJL23的构建

质粒ｐＧＡ４６－４带有从谷氨酸棒杆菌染色体上分离到的有启动功能的片段,用ＰＣＲ技术从ｐＧＡ４６－４中扩增了该片段的关键区域;启动子ＰＧＬ,将该启动子经ＥｃｏＲⅠ－ＢａｍＨ Ⅰ双酶切后,与大肠杆菌质粒ｐＪＬ０１的ＥｃｏＲⅠ－ＢａｍＨⅠ大片段连接,再接入Ｘｙｌ Ｅ ｇｅｎｅ和棒状杆菌质粒ｐＸＺ１０１４２,构建成棒状杆菌－大肠杆菌穿梭表达载体ｐＪＬ２３。用邻苯二酚双加氧酶基因检测表明,该表达载体可在棒状     

蓖麻蚕蛹mtDNA的限制性内切酶图谱

采用碱变性法制备蓖麻蚕蛹ｍｔＤＮＡ，经九种限制性内切酶单酶和双酶酶解后，琼脂糖凝胶电泳检测酶切位点数和酶切片段长度。根据片段的大小确定消失片段与新生片段关系，通过对片段重叠、拼接、判断各片段邻近位置，从而构建了９种限制性内切酶、共２４个酶切位点蓖麻蚕蛹ｍｔＤＮＡ酶切图谱。