小灵猫华东亚种线粒体DNA限制性位点图

提纯了小灵猫华东亚种（ＶｉｖｅｒｒｉｃｕｌａｉｎｄｉｃａｐａｌｉｄａＧｒａｙ）的肝脏ｍｔＤＮＡ．用ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅤ、ＨｐａⅠ、ＫｐｎⅠ、ＭｌｕⅠ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃⅡ、ＳａｌⅠ和ＸｈｏⅠ等１１种识别６碱基对的限制性内切酶对小灵猫华东亚种ｍｔＤＮＡ进行消化分析，１１种限制性内切酶均有１～５个位点；根据单酶消化和双酶消化片段的数目和分子量，构建了小灵猫华东亚种ｍｔＤＮＡ限制性位点图     

福建两个蛋鸭品种和常见野鸭线粒体DNA(mtDNA)限制性酶切图谱的比较

用７种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｏｃＲⅤ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｂａⅠ）分析了蛋鸭（金定鸭、莆田黑鸭）、野鸭（斑嘴鸭、绿头鸭）的ｍｔＤＮＡ限制性类型，并用双酶法构建了以上鸭类的ｍｔＤＮＡ限制性酶切图谱．结果表明，蛋鸭与野鸭在ｍｔＤＮＡ结构上发生了明显分岐．比较两种野鸭和金定鸭的图谱，发现金定鸭与绿头鸭的亲缘关系较近．     

高等真菌LMPQ39基因文库的构建

以噬菌体λＥＭＢＬ３ＤＮＡ为载体，用ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ双切酶切后，与Ｓａｕ３ＡＩ部分酶切的１０－２１ｋｂＤＮＡ片段连接，体外包装，感染Ｅ·ｃｏｌｉＬＥ３９２，所得重组子数为２．２１×１０４ｐｆｕ，超过建库所需的理论值．随机挑选的１４个克隆子，其ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ酶切，有９个出现了不同于载体ＤＮＡ的酶切带型．     

长爪沙鼠线粒休DNA限制物理图谱的研究

长爪沙鼠线粒体ＤＮＡ经分离提纯，采用ＢｚｍＨＩ，ＢｇｌⅡ，ＥｃｏＲⅠ和＊ＰｓｔⅠ四种内切酶对１３只长爪鼠ｍｔＤＭＡ进行了酶切分析。其中大多数长爪沙鼠酶切图谱相同，用上述四种酶切分别产生１、５、６、和３个片段，我们称之为Ａ型；另３只氏爪沙鼠经ＢｇｌⅡｉ和ＥｃｏＲ酶切后分别产生４个片段，称为Ｂ型。利用λ—ＤＮＡＨｉｎｄⅢ、ΦＸ—ｌ７４ＨＡＥⅢ、λ—ＤＮＡＢｓｔＥⅡ酶切片段作为标准，以琼脂糖凝胶电泳法测出长爪沙鼠ｍｔＤＮＡ内切片段大小，各种酶切片段分子量加起来均为１６．０５ｋｂ。经多次ＢａｍＨⅠ对ｍｔＤＮＡ单酶切，发现只有一个切点，以此切点为零点，分别与其它三种酶组合进行双酶切时，均未改变原来各酶单酶切片段大小，这说明另外三个酶均有一个切点接近零点。我们根据双酶解和不完全酶解片段的大小分析确定了各酶切片段之间的相对位置，绘制了ｍｔＤＮＡ的物理图谱。本次得到的长爪沙鼠的ｍｔＤＮＡ物理图谱是以ＢａｍＨⅠ酶切点为零点，ＰｓｔⅠ酶切片段ｃ→ａ为顺时针方向，由四种内切酶对ｍｔＤＮＡ的水解结果而得到的１５个片段组成，其中大部内切酶切点的相对位置是用双酶解结果来定位的，小部分切点（６个）则是利用不完全酶解结果定位的。１５个位点     

大熊猫线粒体DNA酶切片段长度多态性研究

用１２种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＸｈｏⅠ，ＰｓｔⅠ，ＭｓｐⅠ，ＸｂａⅠ，ＰｖｕⅡ，ＨｉｎｄⅢ，ＨａｅⅢ，ＳａｃⅠ，ＨｐａⅡ）对秦岭大熊猫线粒体ＤＮＡ进行了酶切。测定和分析了每种酶所产生片段的数量和大小，并与四川大熊猫的限制性片段进行了比较，发现在相同的６种酶的１６个酶切位点中有一个不同，表明这两地群体间存在着线粒体ＤＮＡ的多态性。其研究结果为进一步研究和保护大熊猫提供了重要依据。     

丝羽乌骨鸡mtDNA限制酶酶切研究

应用碱变性法制备丝羽乌骨鸡（简称丝羽鸡）肝细胞ｍｔＤＮＡ，测其分子量为１８．５ｋｂ．用限制性内切酶进行酶切分析，结果表明，ＢａｍＨⅠ、ＰｓｔⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＳａｃⅠ在丝羽鸡ｍｔＤＮＡ分子上分别有１、１、１、２个酶切位点．根据单酶和双酶完全酶切片段的分子量，建立了丝羽鸡ｍｔＤＮＡ的限制酶图谱．与由来亨鸡肝细胞ｍｔＤＮＡ为材料所得的研究结果比较，发现丝羽鸡与来亨鸡在ｍｔＤＮＡ种质方面存在着较大差异．     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长ｃＤＮＡ克隆ｐＢａＳ１ｃ１８４Ｘ ＧＬⅢ和ＣＯｒＩ双酶切，回收基中的酪蛋白基因编码片段，与经ＢａｍＨＩ，ＳｍａＩ双酶切的植物表达载体ｐＢＩ１２．１２分两步连接；第一步载体的ＢａｍＨＩ末端与酪蛋白基因的ＢｇｌⅡ粘性末端连接；第二步用Ｔ４ＤＮＡ多聚酶补平酪蛋白基因的ＥｃｏＴＲⅠ末端，再与载体ＳｍａⅠ进行平末端连接而环化。     

狮头鹅,莱茵鹅和灰雁mtDNARFLP分析

用ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨｉｎｄⅢ、ＨｐａⅠ、ＭｌｕⅠ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、Ｓａｃ、ＳａｃⅡ、ＳｃａⅠ、ＳｍａⅠ等１３种限制性内切酶对狮头鹅、莱茵鹅和灰雁的线粒体ＤＮＡ进行了单酶消化。结合我们前期的工作,结果表明：狮头鹅和中国鹅其他几个品种的限制性类型完全相同,莱茵鹅和郎德鹅的限制性类型也完全一致;狮头鹅和莱茵鹅间,ＥｃｏＲⅤ、ＳｃａⅠ的限制性类型存在差异,狮头鹅和灰雁间,     

环状芽胞杆菌基因启动子的分离与鉴定

环状芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）总ＤＮＡ经Ｓａｕ３ＡＩ酶切后插入到启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ１的ＢａｍＨＩ位点，转化大肠杆菌后，在卡那霉素的平板上筛选到５０个抗性菌落。从随机挑取的２９个抗住菌落所分离到的质粒ＤＮＡ经限制酶切和琼脂糖凝胶电泳后表明，各质粒均有ＤＮＡ插入片段，对２９个样品进行卡那霉素抗性试验显示，抗性最高的可超过１０００μｇ／ｍＬ这表明来自环状芽胞杆菌的某些基因启动子能在大肠杆菌中十分有效地启动基因表达，选取两个最大的克隆ＤＮＡ片段ＢＣ３和ＢＣ６作为探针与Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓｃ－２．总ＤＮＡ作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，均获得杂交带。斑点杂交结果表明，这两个ＤＮＡ片段来自不同的基因启动子。对ＢＣ６和ＢＣ３分别进行了限制酶谱分析，并绘制了限制酶图。     

苏云金芽孢杆菌新分离株S11—11δ—内毒素基因在Btk.BE …

用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌，以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体，用Ｐｓｔ Ｉ和ＥｏｏｒＩ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切，并将酶切片段用Ｔ４ ＤＮＡ连接酶连接，用电激法将重组ＤＮＡ转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ．ＢＥ２０中，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察证明，δ－内毒素基因在Ｂｔｋ．ＢＥ２０中得到表达，并具有较高的表达量。生物测定     

河田鸡线粒体DNA物理图谱

运用差速离心法、蛋白酶Ｋ及ＲＮａｓｅ消化法制备并纯化河田鸡（ＧａｌｕｓｇａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓＨｅｔｉａｎｂｒｅｅｄ）的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）．用１１种限制酶对其进行单酶切分析,结果表明,ＡｖａＩ、ＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩ、ＤｒａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｐａＩ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃＩ、ＳａｌＩ和ＳｔｕＩ在河田鸡ｍｔＤＮＡ上分别有５、２、４、５、１、３、４、３、３和＞９个酶切位点,Ｓｃａｌ在不同个体河田鸡ｍｔＤＮＡ上检测出两种限制性格局,分别有２和３个酶切位点．此外,还用ＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩ、ＤｒａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｐａＩ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃＩ、ＳａｌＩ和ＳｃａＩ进行双酶切,构建了ｍｔＤＮＡ的物理图谱     

草鱼线粒体DNA酶切图谱的研究

用１０种限制性内切酶对草鱼肝脏线粒体ＤＮＡ进行了分析，其分子太小约１６．５８ｋｂ．ＰｓｔＩ，ＢａｍＨＩ，ＸｂａＩ，ＢｇｌＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＢⅡ，ＰｖｕⅡ，ＸｈｏⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＳａｌⅠ在草鱼ｍｔＤＮＡ分子上分别具有２，３，３，４，７，３，６，２，４及０个切点。根据单酶解及双酶解结果建立了草鱼ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱。     

中国锦铃虫核多角体病毒（HeliothisarmigeraNPV）VHA273毒株 …

ＶＨＡ２７３毒株原为ＭＮＰＶ型，经纯系中国棉铃虫扩增而得出约１０％的ＳＮＰＶ，高度纯化两型多角体，温和碱解后，酚法抽提ＳＮＰＶＤＮＡ和ＭＮＰＶＤＮＡ，限制性内切酶ＢｇｌⅡ，ＢａｍＨＩ，ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ分别平行酶切两种ＤＮＡ，依次均得出１１，８，１４和１３条电泳带。     

苏云金芽孢杆菌新分离株S_(11-11)δ-内毒素基因在Btk.BE_(20)中的克隆和表达

用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌,以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体,用ＰｓｔⅠ和ＥｃｏＲⅠ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切,并将酶切片段用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接,用电激法将重组ＤＮＡ转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ．ＢＥ２０中,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察证明：δ－内毒素基因在Ｂｔｋ．ＢＥ２０中得到表达,并具有较高的表达量．生物测定表明,重组株对夜蛾科幼虫具有较高的毒性．此外,对质粒提取的方法也进行了讨论．     

两步亲和层析纯化限制性核酸内切酶Bsp 63Ⅰ

以Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ６３为材料,采用ＤＮＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ和ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅＦ３ＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ两步亲和层析,分离纯化得到电泳均一纯限制性核酸内切酶Ｂｓｐ６３Ⅰ。酶的得率约为１３０单位／ｇ湿菌,比活力高达６１４００单位／ｍｇ蛋白。还报道了ＤＮＡ－Ｓｐｅｈａｒｏｓｅ４Ｂ两种亲和吸附剂制作方法的改进。     

家蚕核型多角体病毒gp64基因的定位及克隆

以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ的膜表面糖蛋白基因ｇｐ６４作为探针，对经不同内切酶酶切的家蚕核型多角体病毒基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，发现ＢａｍＨⅠ酶切产生的４．２ｋｂ和７．６ｋｂ片段呈阳性杂交，经ＤＮＡ片段回收，将４．２ｋｂ片段进行了克隆     

中国白兔线粒体DNA限制性图谱

用 ６ 种限制性内切酶分析了中国白兔的线粒体 Ｄ Ｎ Ａ（ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ）。测得其相对分子质量约为１６．８, Ｅｃｏ ＲⅤ, Ｂａｍ ＨⅠ, ＰｓｔⅠ, Ｅｃｏ ＲⅠ, ＨｉｎｄⅢ在中国白兔 ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ 上分别有 １,２,２,２,６ 个切点, ＳａｌⅠ 在其上没有切点。根据单酶降解和双酶降解片段的相对分子质量,构建了中国白兔ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ的限制性内切酶图谱。     

柳毒蛾核型多角体病毒内蒙株（LsNPV—IM）DNA的限制性 …

将柳毒蛾核型多角体悬液降解,降解产物经Ｔｒｉｓ－饱和酚和氯仿抽提,乙醇沉淀分离出ＬｓＮＰＶ－ＤＮＡ,用限制性内切酶ＰｓｔＩ,ＨｉｎｄⅢ,ＰｓｔＩ／ＨｉｎｄⅢ,ＨｉｎｄⅢ／ＥｃｏＲＩ和Ｐｓｔ／ＢａｍＨＩ单酶切或双酶切,经琼脂糖凝胶电泳并对其结果进行了分析,建立了酶切图谱。     

小鼠B7—1cDNA克隆,测序,表达及其抗瘤效应的初步探讨

用反转录ＰＣＲ的方法,从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞中扩增出Ｂ７－１ｃＤＮＡ后,插入ｐｃＤＮＡ３质粒中构建成小鼠Ｂ７－１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤ－ｍＢ７．１,经酶切鉴定和序列分析证实此表达载体中插入的Ｂ７－１ｃＤＮＡ的序列与献报道一致。     

嗜麦芽假单胞菌质粒pSH1的限制图谱及km^r标记的克隆

对嗜麦芽假单胞菌Ｐ２菌株的质粒ｐＳＨ１进行了限制酶切分析，确定了Ｂｇ１ Ⅱ，ＥｃｏＲ Ⅰ，Ｐｓｔ Ⅰ，Ｘｂａ Ⅰ，ＢａｍＨ Ⅰ，Ｂｇｌ Ⅰ，及Ｐｖｕ Ⅱ共７种限制性内切酶在ｐＳＨ１，质粒上的切割位点，前４种酶均为单一切点，后３种依次为２，７，５个切点。通过双酶切和部分酶切的方法绘制了ｐＳＨ１质粒的限制酶切图谱。将ｐＧＰ１－２质粒上的卡那霉素抗性基因片段插入ｐＳＨ１，获得了重组质粒ｐＳＨ２．ｐＳＨ２