氯原酸对弹性蛋白酶抑制作用的研究

用琼脂扩散法研究了氯原酸对弹性蛋白酶的影响，表明氯原酸具有抑制弹性蛋白酶的作用，随着浓度的提高，抑制作用增大。荧光光谱表明：氯原酸对弹性蛋白酶的荧光淬灭为静态淬灭，其结合常数为５．２１×１０４     

生物荧光素酶的活性与固相化

目的：探讨荧光酶的活性和稳定性，方法：酶亚单位重聚酶固相化，结果：获得稳定，高活性的荧光酶，结论：亚单位重聚和酶固相化是酶稳定性和活性的保证。     

绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子逆转录病毒载体pLNOX-EGFP-C1-hri的构建及鉴定

构建表达重组绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子的逆转录病毒载体pLNCX—EGFP-c1-hri，为探讨人核糖核酸酶抑制因子抗肿瘤作用机制打下基础．用亚克隆法，将目的片段egfp-c1—hri从表达载体pEGFP-C1-hri克隆到pLNCX上，用酶切筛选得到阳性克隆后，用脂质体法将其转染到小鼠黑色素瘤细胞B16中，用800mg／L G418筛选2周后，在荧光显微镜下检测其表达．双酶切鉴定得到pLNCX-EGFP-C1-hri阳性克隆，荧光显微镜显示绿色荧光在B16细胞质中高效表达．成功构建逆转录病毒表达载体pLNCX—EGFP-C1-hri．     

中华猕猴桃蛋白酶在乙醇溶液中的分子折叠

研究了中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）乙醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱、圆二色光谱（ＣＤ谱）及傅立叶变换红外光谱的变化，并测定了相应的活力变化，当乙醇浓度低于３０％时，酶的荧光强度无明显变化，而乙醇浓度大于３０％时，则酶荧光强度增大，且峰位略红移。在乙醇溶液中，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ内出现正峰，峰强度随乙醇浓度的增高基本表现为逐渐增大，峰位也逐渐蓝移。ＣＤ谱及红外光谱的测定结果表明低浓度乙醇中酶分子有序二级结构的减少及高浓度乙醇中β－折叠含量的增加．随乙醇浓度的增加．酶的活力表现为逐渐降低，且乙醇对酶的失活作用类似于竞争性抑制。     

乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明．酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降，乙醇浓度40％可使酶活力完全丧失．说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用，JG50为13％．含较低浓度乙醇(30％)的失活过程是可逆的反应．测定乙醇对酶的失活作用机理．结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制，说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用．应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化，发现乙醇对酶分子构象有显的影响，酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强．荧光发射峰逐渐发生红移．紫外吸收光谱在276nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强．这些结果表明．酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化．     

淡水无核珍珠壳角蛋白的酶解及其色氨酸分析

本文试验用胰蛋白酶，链丝菌蛋白酶，木瓜蛋白酶对从三角帆蚌珍珠及其蚌壳珍珠层中提取的壳角蛋白进行酶法水解，采取荧光法对壳角蛋白酶解液进行色氨酸（Ｔｒｐ）含量及酶解程度的分析检测。结果表明：其酶解液和空白酶液在２８０ｎｍ激光波长下都具有单一的３５０ｎｍＴｒｐ所特有的荧光发射峰，但酶解液的荧光强度明显大于空白酶液荧光强度，从而说明珍珠及其贝壳中Ｔｒｐ的存在。通过定量分析，壳角蛋白中Ｔｒｐ含量大约在２．８     

文昌鱼酸性磷酸酶在甲醇溶液中的构象与活力变化

文昌鱼酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ，Ｅ．Ｃ３．１．３．２）是一种含有铁离子的金属酶，其可见光谱中５００ｎｍ的吸收峰以及荧光５１５ｎｍ的发射峰为该酶分子含铁的特征峰，与酶活力关系密切．通过荧光发射光谱和紫外可见光谱对该酶在不同浓度甲醇溶液中的构象与活力变化进行研究．不同浓度（Ｖ／Ｖ）的甲醇对酶活力有明显的抑制作用，动力学分析表明甲醇对酶的抑制为非竞争性抑制，其抑制常数为２０％．还研究了在甲醇存在下ＡＣＰａｓｅ活力中心的构象与活力变化，结果表明其构象变化快于活力变化．     

Co（Ⅱ）对青霉素酰化酶的激活作用

文中报道Ｃｏ（Ⅱ）对巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶的激活作用。并用荧光光谱法对其可能的机理进行了研究。结果表明：Ｃｏ（Ⅱ）对青霉素酰化酶具有荧光猝来作用，但并没有引起整个酶分子空间构象的变化，而是与活性部位的某些基团发生了络合作用，有利于底物的诱导契合从而引起酶活力的提高。     

中华猕猴桃蛋白酶在甲醇溶液中的构象与活力变化研究

研究中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）甲醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱及ＣＤ光谱的变化，并测定相应的活力变化；酶的内源荧光强度随甲醇浓度的增加而增高，且发射峰略有红移．在甲醇存在下，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ范围内出现正峰，随甲醇浓度增高，峰强度增大，且峰位蓝移．ＣＤ谱变化表明，在不同浓度甲醇存在下，酶的ａ──螺旋度有不同程度的减少．在１０％～５０％甲醇存在下，酶有不同程度的激活现象，当甲醇浓度为３０％和４０％时，激活程度最大，约为天然酶活力的１５０％．     

无花果蛋白酶分子去折叠与催化功能

应用光谱法研究无花果蛋白酶（ＥＣ．３．４．４．１２）在不同浓度脲及ＬＤＳ存在下的结构变化和活力变化的关系。荧光光谱显示，在１－６ｍｏｌ／Ｌ脲范围内，荧光强度均比天然酶高，但剩余活力只有天然酶的２０％以下，随脲浓度增大，α螺旋度有不同程度的增加，酶在低浓度（０．５ｇ／Ｌ）ＬＤＳ作用下，荧光强度下降，发射峰红移，在高浓度ＬＤＳ作用时，荧光强度增强，发射峰基本保持不变，活力则随着ＬＤＳ浓度增大而下降，甚     

用荧光光谱与高效液相色谱法研究广西血竭的α-葡萄糖苷酶抑制活性

采用冷浸法对广西血竭进行分离,测定各组分的α-葡萄糖苷酶的抑制活性.使用三维荧光指纹技术对其荧光指纹进行研究,发现抑制率与荧光指纹主峰强度的相关系数为0.9413.说明可用荧光指纹参数表征抑制剂的抑制活性.以三维荧光光谱信息为指导找出荧光强度最高处的激发发射波长对,作为高效液相色谱荧光检测器的检测波长,研究各组分色谱峰面积同其相应α-葡萄糖苷酶抑制率的相关关系,发现其中峰1、峰2、峰1 峰2与其抑制率的相关系数分别为0.9414、0.9678和0.9645.说明这两色谱峰所对应的抑制剂与α-葡萄糖苷酶的抑制活性直接相关,为血竭α-葡萄糖苷酶的抑制活性有效成分的筛选,找到了很好的指示方法和检测手段.     

酵母细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化及性质

报道了葡萄糖-6磷-酸脱氢酶（G6PDH）的分离纯化和酶学性质研究．以溶胀法从酵母细胞中提取胞内酶，粗抽提液再经过硫酸铵盐析和Sephadex G-100凝胶柱层析．酶学性质研究结果表明：G6PDH的酶促反应最适温度和pH值分别为37℃和pH8．8．考察了金属离子对G6PDH荧光光谱的影响，发现Cu^2＋和Hg^2＋对G6PDH具有荧光猝灭作用，且符合荧光静态猝灭的Stern—Volmer公式，因此可利用荧光猝灭的性质进行痕量金属离子测定．     

高香草酸—H2O2—HRP荧光酶联免疫分析测定HRP的研究

提出了高香草酸－Ｈ２Ｏ２－ＨＲＰ荧光酶联免疫分析测定ＨＲＰ的新方法。该法基于ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧高香草酸生成能产生荧光的物质，该物质在Ｅ＝３１７ｎｍ激光作用下产生荧光，     

绿色荧光蛋白标记的NTE活性域表达载体的构建及表达 

利用含有特定限制性内切酶识别位点的引物，通过聚合酶链式反应扩增出人神经病靶标酯酶活性域的编码序列，经T载体克隆测序正确后，双酶切回收特异片段定向插入到增强型绿色荧光表达载体pEGFPN3中，通过酶切反应鉴定，构建了绿色荧光蛋白标记的神经病靶标酯酶活性域的融合表达载体pNESTEGFP。采用脂质体转染的方法将其转染到人神经瘤母瘤细胞SHSY5Y中，用荧光显微镜观察发现神经病靶标酯酶活性域分布于细胞质中，而且没有导致内质网膜的聚集，表明表达载体成功构建和表达。     

杂色鲍碱性磷酸酶在DMSO溶液中的活力与构象变化的研究

以二甲亚砜（DMSO）为效应物．研究其对杂色鲍碱性磷酸酶（ALP）活力的影响，结果表明：该酶的剩余活力随着DMSO浓度增大而迅速下降，当DMSO浓度达40％，酶活力几乎完全丧失．说明DMSO对杂色鲍ALP有明显的失活作用．导致酶活力丧失50％的DMSO浓度为17％．在较低DMSO浓度（〈20％）的失活是可逆的反应过程．动力学研究表明，该酶的失活过程属于混合型．进一步测定游离酶（E）和酶底物络合物（ES）与DMSO的结合常数（K1和K1s），结果表明K1〈K1s即说明底物存在对酶被DMSO的失活作用有一定的保护作用．应用荧光发射光谱研究杂色鲍ALP经DMSO微扰后的分子构象变化情况，随着DMSO浓度增大，荧光强度逐渐增强．但发射峰未发生明显变化现象．说明酶分子中的生色基团残基的微环境发生了一定的变化．     

长毛对虾碱性磷酸酶功能基因的研究

用对－氯汞苯甲酸修饰该酶分子中的巯基、酶活力不受影响，说明该酶不是“巯基酶”。用Ｎ溴代琥珀酰亚胺修饰酶后，活力完全丧失，修饰后的酶在２７５ｎｍ处的紫外吸收峰完全消失，３４０ｎｍ处荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭，说明色氨酸基是酶活性必需基团之一。     

利用mini-VIDAS和GB方法检测食品中沙门氏菌的比较试验

自动酶标免疫测试仪（mini-VIDAS)，是利用酶联荧光免疫分析技术（ELIFA）原理，通过固相吸附器，用已知抗体来捕捉目标生物体，然后与带荧光的酶联抗体再次结合，经含0.1%叠氮的TBS－吐温充分冲洗后，通过激发光源检测即能自动读出发光的阳性标本。本实验采用mini-VIDAS和CB4789．4－94的方法检测食品中沙门氏菌，证明使用VIDAS具有检测灵敏度高、无传染危险、检测速度快等特点。     

中华猕桃蛋白酶在甲醇溶液中的构象与变化研究

研究中华猕桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）甲醇存在下的内源荧光发射光谱，紫外差光谱及ＣＤ光谱的变化，并测定相应的活力变化，酶的内源荧光强度随甲醇深度的增加而增高，且发射峰略有红移。在甲醇存在下，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｍｎ范围内出现正峰，甲醇浓度增高，峰强度增大，且峰位蓝移。ＣＤ谱变化表明，在不同浓度甲醇存在下，酶的ａ－－螺旋度有不同程度的减少。在１０％－５０％甲醇存在下，酶有不同程度的激活现象     

淫羊藿苷与过氧化氢酶相互作用的荧光光谱法和分子对接研究

利用过氧化氢酶的内源荧光,通过荧光光谱法对淫羊藿苷与过氧化氢酶的相互作用进行了研究.结果表明,淫羊藿苷主要以静电作用力与过氧化氢酶发生相互作用,16℃时结合常数和结合位点数分别为4.59×104 L/mol和1.00.根据F（o）rster非辐射能量转移理论,计算二者相互作用的结合距离为4.05 nm.对二者之间的相互作用进行了分子模拟,表明淫羊藿苷在过氧化氢酶4个亚基的中心区域通过静电作用力、疏水作用力和氢键作用力与过氧化氢酶发生相互作用,与荧光光谱法的研究结果相一致.     

长毛对虾碱性磷酸酶性质

从长毛对虾内脏物分离提纯碱性磷酸酶，经快速蛋白液相色谱（ＦＰＩＣ）检验为单一蛋白纯．研究该酶的性质，酶的紫外吸收特征峰在２７８ｎｍ处，荧光激发峰在２８２ｎｍ处，发射光谱特征峰在３４０ｎｍ处．酶的分子量为８２０００道尔顿．酶水解ＰＮＰＰ的最适温度为４７℃、最适ｐＨ为８．２．在３７℃、ｐＨ８．３下，酶的Ｋｍ值为８．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ．Ｍｇ２＋对该酶有激活作用，Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋甲醇、乙醇，乙二醇则表现抑制作用．Ｈｇ２＋的抑制作用表现为反竞争性类型，其抑制常数为９．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ．