vvIBDV 诱导幼鸡免疫细胞凋亡的研究

为研究超强毒传染性法氏囊病病毒 (vvIBDV)感染的致病机理 ,在 3— 6周龄SPF幼鸡法氏囊、脾脏、胸腺细胞培养体系中加入vvIBDV ,以流式细胞术 (FcM)、DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测vvIBDV诱导的细胞凋亡 ,结果表明 ,在本实验的体外培养体系中 ,vvIBDV可直接和迅速引起幼鸡法氏囊细胞凋亡 ,对脾脏或胸腺细胞并无明显的作用     

SPF鸡感染vvIBDV后免疫器官内肥大细胞及5-HT动态变化的观察

为观察肥大细胞(Mast Cell,MC)在vvIBDV感染中的作用,将60只30日龄无病原感染(Specific Pathogen Free,SPF)鸡随机分成感染组和对照组。感染组经滴鼻、点眼、肛拭感染超强毒株传染性法氏囊病病毒(very virulent Infectious Bursal Disease Virus,vvIBDV)于0,24,48和72h后,分别取法氏囊、胸腺、脾脏,用甲苯胺蓝染色法观察上述各组织中的MC数量的动态变化;用免疫组化染色法检测各组织中IBDV病毒抗原和5-HT分布量的动态变化。结果表明:与对照组相比,感染组鸡各免疫器官中,MC的数量随着病毒分布量的增加和组织损伤程度的加重而明显增多(P<0.01);MC释放的介质之一--5-HT的量也明显增多(P<0.01)。由此推断,MC和5-HT参与了IBD的发病过程,它们在IBDV感染引起的免疫器官严重损伤中可能起着重要的作用。     

双酚A对鸡胚中枢免疫器官发育影响的形态学观察

为进一步研究双酚A(BPA)的毒性作用,本试验对9日龄AA鸡胚和SPF鸡胚尿囊腔注射双酚A,待鸡胚孵化至22日龄,取鸡胚法氏囊和胸腺进行下述各项指标测定和形态学观察。结果显示,与对照组相比较,试验组鸡胚孵出率显著降低,法氏囊指数明显变小(p<0.05);染毒组法氏囊淋巴滤泡个数显著少于对照组(p<0.01),胸腺皮质、髓质厚度极显著小于对照组(p<0.01);光镜观察发现,双酚A染毒组法氏囊淋巴滤泡和胸腺髓质中的髓细胞明显多于对照组,扫描电镜下可见细胞间隙明显增大,显现针孔样结构。研究结果表明,双酚A对AA鸡胚和SPF鸡胚中枢免疫器官有毒性作用,对鸡胚法氏囊和胸腺的发育有显著的抑制作用。     

应激及地塞米松对小鼠胸腺细胞和脾脏细胞凋亡的作用

目的：研究应激对小鼠胸腺细胞及脾脏细胞凋亡的作用机理,方法：以小鼠为模型,采用碘化丙啶染色结合流式细胞仪分析,研究应激（将四肢固定用水淹至颈部）,注射地塞米松（dexamethasone,DEX)或应激同时注射DEX对胸腺细胞及脾脏细胞的凋亡的作用）。结果：胸腺细胞和脾脏细胞的凋亡百分率与腹腔注射DEX的剂量呈正相关,其中胸腺细胞更易于调亡,应激能引起胸腺细胞及脾脏细胞的凋亡（P＜0．01）,DEX能增强应激对胸腺细胞及脾脏细胞的凋亡作用（P＜0．01）,结论：应激可通过诱导免疫细胞凋亡而削弱机体的免疫力,引起疾病发生;DEX在应激诱导细胞凋亡时所起的协同作用提示两者可能通过类似的机制发挥作用。     

鸡胚胸腺、法氏囊组织免疫功能发育研究

实验选取12-19胚龄的鸡胚和1日龄雏鸡的胸腺、法氏囊,石蜡切片HE染色后,对组织结构发育进行动态连续观察.通过MTT法检测胸腺T淋巴细胞和法氏囊B细胞的增殖率,了解不同胚龄T细胞、B细胞的免疫功能发育的状态.结果表明:随着胚龄的增加,鸡的胸腺和法氏囊发育逐渐完善,免疫功能随之增强;T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖率不断增加.     

蓖麻毒素气源感染小鼠后炎性因子的定量分析

蓖麻毒素会引起机体内蛋白合成终止和细胞凋亡,通过测定组织器官内细胞因子的表达情况可监测机体中毒后免疫应答反应的发生与发展。本试验以气溶胶的方式将蓖麻毒素感染给小鼠,采用荧光定量聚合酶链式反应对攻毒后小鼠的肺脏、脾脏及胸腺中的6种炎性因子进行定量分析。研究结果显示:与对照组(生理盐水组)相比,试验组(蓖麻毒素组)小鼠肺脏、脾脏、胸腺中的趋化因子(CCL2、CXCL2)、白介素2(IL-2)和γ干扰素(INF-γ)的信使RNA(mRNA)表达均显著升高;而白介素1(IL-1)的信使RNA(mRNA)在肺脏、脾脏中高表达,在胸腺中为低表达;白介素4(IL-4)的信使RNA(mRNA)在肺脏、胸腺中高表达,在脾脏中为低表达。由此可知:经毒素气源感染后的小鼠,肺组织及免疫器官组织炎性因子分泌水平发生显著改变,局部及整体免疫调节机能紊乱。     

TCRαβ+CD4-CD8-细胞在胚胎胸腺器官培养中的发育特征

为研究TCRαβ + CD4 - CD8 - 双阴性(DN)胸腺细胞在胚胎胸腺中的发育特征,采用胚胎胸腺器官培养(FTOC)体系、免疫荧光标记与流式细胞仪检测技术,对FTOC体系中不同发育阶段(第9天和第18天)的TCRαβ +DN细胞的增殖、分化及凋亡特性进行了分析.结果表明,抗CD3单抗能够显著促进FTOC第18天的TCRαβ + DN细胞的增殖,对FTOC第9天的TCRαβ + DN细胞作用相对较弱.IL-7能够促进FTOC第9天的TCRαβ + DN细胞向TCRαβ + CD4 + /CD8 + SP细胞分化;对FTOC第18天的TCRαβ + DN细胞促分化作用明显减弱.胸腺基质细胞系MTEC5细胞可调节IL-7的促分化作用.同时,实验发现在FTOC体系中的TCRαβ + DN细胞是一群不易凋亡的细胞,从而对该特殊亚群胸腺细胞的发育分化特性获得了新的认识.     

实验性鸭瘟的病原动态分布及病理组织学观察

针对30只DPV攻毒试验鸭及30只同居鸭的体内DPV-DNA动态分布及病理组织学变化,采用PCR技术和常规病理学方法进行研究、结果显示：（1）DPV攻毒后6h,用PCR方法在肝、脾、法氏囊、胸腺、血液、直肠粪便可检测到DPV-DNA（2）DPV经不同途径感染成年鸭后,病毒在体内的动态分布有一定的差异．（3）在自然感染的情况下,肝、肺、血液．胸腺、直肠粪便可作为鸭瘟病原DNA早期检测的首选取材样本．（4）DPV感染后,患鸭的肝脏、肾小管上皮细胞．脾脏、法氏囊及胸腺网状细胞可见核内包涵体．（5）组织病变与病原分布的时序性相关,试验组鸭在DPV攻毒后24h,同居感染组鸭在同居后72h,心、肝、肺、肾、大脑、脾脏、法氏囊、胸腺、十二指肠等组织均表现出程度轻微的实质细胞肿胀、变性;继而发展为细胞水肿、坏死,间质严重出血（6）免疫器官胸腺、脾、法氏囊、骨髓的病原检出及组织病变皆发生在DPV感染的早期,病变器官从组织水肿、充血、出血、淋巴细胞数量减少,迅速发展为坏死．上述结果为研究DPV的致病机理、鸭瘟的早期诊断和鸭瘟的防制提供了依据．     

小鼠胸腺的结构、功能与日龄的关系

目的　探讨小鼠胸腺的结构、功能变化与日龄的关系。方法　以不同日龄的小鼠为研究对象,采用免疫组织化学方法观察胸腺细胞的凋亡情况和胸腺中T淋巴细胞的数目变化。结果　不同日龄小鼠均可见胸腺细胞凋亡,新生小鼠、第1 4、2 8d小鼠组间无明显区别(P >0 0 5 ) ,日龄4 2、5 6d小鼠相比于幼龄小鼠胸腺细胞凋亡显著增多(P <0 0 5 ;P <0 0 1 ) ,且T细胞数目明显减少(P <0 0 5 )。结论　幼龄小鼠胸腺功能已成熟,并不随小鼠的发育而增强。至日龄4 2d后,胸腺细胞凋亡明显加快,胸腺萎缩,成熟T细胞减少,功能降低。     

胸腺素α_1对鸡生长性能及免疫器官发育的影响

通过对照试验在 4日龄和 7日龄时 ,低剂量组、中剂量组和高剂量组每只鸡分别肌注 0 .0 1 5 mg·kg- 1 ,0 .0 3 mg· kg- 1 和 0 .0 6mg· kg- 1 体重剂量的胸腺素α1 ( Tα1 ) ,对照组注射等量的生理盐水。试验期为 5 6d,观察 Tα1 对鸡体重、饲料转化率、法氏囊指数、胸腺指数、和脾脏指数的影响。结果表明 :在 3 5 ,42和 5 6日龄时 ,低剂量组鸡的体重显著高于其他各组 ( P<0 .0 5 ) ,而在 1 4和 2 1日龄时各组平均体重差异不显著 ( P>0 .0 5 )。在整个试验期间 ,低剂量组的饲料报酬均高于其他三组 ;低剂量组的法氏囊指数均高于其他三组 ,并在 1 4日龄时与对照组和中剂量组差异显著 ( P <0 .0 5 ) ,而在 3 5日龄与对照组和高剂量组差异显著 ( P <0 .0 5 ) ;低剂量组的胸腺指数也高于其他三组 ,1 4日龄时与对照组差异显著 ( P <0 .0 5 ) ,而与中剂量组和高剂量组差异不显著( P>0 .0 5 ) ,但在 3 5和 5 6日龄时差异显著 ( P <0 .0 5 ) ;低剂量组的脾脏指数高于其他三组 ,且在 3 5和 5 6日龄差异显著 ( P <0 .0 5 )。     

小鸡接种新城疫Ⅱ系苗后体内抗体生成细胞的分布

本试验首次利用间接荧光抗体技术(Indirect fluorescent antibody technique)检查了小鸡接种新城疲Ⅱ系苗后体内抗体生成细胞的分布,并比较了小鸡以点眼滴鼻及肌肉注射两种途径接种后抗体生成细胞的出现及分布,结果表明:两种途径接种后一定时间内均可在脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体、肠道(十二指肠、空肠、盲肠)及胸腺等器官、组织中检出特异性抗鸡新城疫抗体生成细胞。这些细胞的出现与消失,与血中HI抗体消长呈正相关。滴鼻点眼接种后,在肺泡、各级支气管和哈德氏腺检出了特异性抗体生成细胞,但肌肉注射则不出现,说明不同接种途径对局部免疫应答有重要影响。     

南方鲶幼鱼血细胞发生的研究

对南方鲶 (Silurusmeridionalis)幼鱼肝脏、脾脏、头肾和肾脏中血细胞的发生过程进行观察 ,发现白细胞主要在头肾和肾脏产生 ,肝脏和脾脏是红细胞发生的场所 .由原始型血细胞到晚幼血细胞 ,细胞由小到大 ,然后再变小 .鱼类血细胞分化水平相当于哺乳动物晚幼血细胞时期 .     

总状蕨藻盾叶变种多糖对小鼠T细胞亚群及NK细胞免疫功能的调节

目的:观察总状蕨藻盾叶变种多糖对正常小鼠T细胞亚群及NK细胞的免疫调节作用.方法:腹腔注射总状蕨藻盾叶变种多糖溶液,用流式细胞仪检测血中免疫参数(CD3 ,CD4 ,CD8 T细胞亚群百分比)和脾脏NK细胞百分比,并测定胸腺、脾脏指数.结果:总状蕨藻盾叶变种多糖能明显降低小鼠血中CD3 ,CD4 ,CD8 百分比(P＜0.05),同时增强脾脏NK细胞百分比(P＜0.05),并显著降低胸腺指数(P＜0.05),增加脾脏指数(P＜0.05).结论:总状蕨藻盾叶变种多糖对小鼠T细胞亚群和NK细胞具有双向的免疫调节作用.     

胸腺素α1对鸡生长性能及免疫器官发育的影响

通过对照试验在4日龄和7日龄时,低剂量组、中剂量组和高剂量组每只鸡分别肌注0.015 mg*kg-1,0.03 mg*kg-1和0.06 mg*kg-1体重剂量的胸腺素α1(Tα1),对照组注射等量的生理盐水.试验期为56 d,观察Tα1对鸡体重、饲料转化率、法氏囊指数、胸腺指数、和脾脏指数的影响.结果表明在35,42和56日龄时,低剂量组鸡的体重显著高于其他各组(P<0.05),而在14和21日龄时各组平均体重差异不显著(P>0.05).在整个试验期间,低剂量组的饲料报酬均高于其他三组;低剂量组的法氏囊指数均高于其他三组,并在14日龄时与对照组和中剂量组差异显著(P<0.05),而在35日龄与对照组和高剂量组差异显著(P<0.05);低剂量组的胸腺指数也高于其他三组,14日龄时与对照组差异显著(P<0.05),而与中剂量组和高剂量组差异不显著(P>0.05),但在35和56日龄时差异显著(P<0.05);低剂量组的脾脏指数高于其他三组,且在35和56日龄差异显著(P<0.05).     

黄连素对脑缺血再灌注小鼠胸腺细胞的保护作用

目的:研究黄连素(Ber)对脑缺血再灌注(MCAO/R)小鼠胸腺细胞的保护作用.方法:用线栓法建立小鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,缺血1h,再灌注24h,实验动物共分为3组:正常组、手术组和给药组(腹腔注射黄连素质量分数为5 mg/kg),缺血0.5h和再灌注12 h各给药1次.24h后取小鼠胸腺计算其胸腺指数,并取胸腺细胞利用SYTOX Green染色法联合荧光酶标仪检测细胞活性;AFM检测细胞形貌的变化;流式细胞仪结合Calcein/CoCl2或JC-1染色检测早期细胞凋亡率.结果:MCAO/R可引起胸腺明显萎缩;SYTOX Green染色结果显示MCAO/R损伤引起细胞高死亡率(P ＜0.05);AFM结果表明细胞表面形态发生显著变化(细胞高度差显著减小(P＜0.01);粗糙度变大(P＜0.05);Calcein/CoCl2和JC-1结果显示脑缺血再灌注后小鼠胸腺细胞的凋亡率显著增高(P＜0.01),而黄连素能显著改善胸腺的萎缩(P＜0.01),降低细胞的死亡率(P＜0.05),改善MCAO/R引起的细胞高度(P＜0.01)、粗糙度的变化(P＜0.05)和降低细胞的凋亡率(P＜0.05).结论:黄连素可能通过抑制胸腺细胞的凋亡而发挥对脑缺血再灌注的保护作用.     

外源性补充Tα1对运动性免疫抑制发展过程中胸腺组织细胞的抗凋亡效应

研究了补充Tα1(胸腺素α1)对大鼠胸腺形态、结构与淋巴细胞凋亡的影响,分析了补充Tα1后改善运动性免疫抑制(Exercise-induced immunosuppression)的机制。将雄性SD大鼠48只,分为单纯运动组和运动+Tα1组。运动方案采用6周活动跑台递增负荷运动,分别在第0、2、4、6周末次运动后48h取材。结果发现,单纯运动组大鼠胸腺形态不断萎缩,胸腺结构发生进行性破坏,且细胞凋亡显著增加。补充Tα1后,大鼠胸腺形态结构明显改善,细胞凋亡情况显著降低。补充Tα1能够保护胸腺形态结构的完整性,减少胸腺细胞凋亡,有效提升机体的抗氧化能力,改善运动免疫抑制的程度。     

14MeV快中子辐照对大鼠免疫系统的损伤

用14 MeV快中子对Wistar雄性大鼠进行5 Gy的全身照射,观察其免疫系统损伤情况及氧化应激的相关变化.大鼠分为辐射组和对照组,分别在辐射后1,7,14d 3个时间点取血液、胸腺和脾脏进行研究.结果表明,辐照后第1d,辐照组大鼠白细胞和淋巴细胞数量降至最低,照后第7、14d有所恢复,但仍不足正常组的1/2.血小板数在照后第1d开始减少,至第7d达到最低值,第14d仍与正常组有显著差异.而大鼠骨髓有核细胞总数辐照后14d明显低于正常组.另外胸腺和脾脏均出现萎缩,脏器指数明显减小.血浆、胸腺和脾脏的总抗氧化能力T-AOC、SOD酶活性及MDA值含量均有不同程度的升高趋势.说明快中子辐射影响血浆、胸腺和脾脏的抗氧化应激能力,诱导细胞凋亡或坏死,造成胸腺和脾脏的萎缩以及一系列组织形态的改变,从而严重影响大鼠的正常免疫功能.      

淫羊藿煎剂对雌性贡鸡免疫和生殖器官的影响

目的：研究不同剂量的淫羊藿煎制剂对雌性贡鸡免疫器官和生殖器官指数的影响.方法：对3日龄雏鸡每日灌注不同剂量的淫羊藿煎制剂,于21日龄测定免疫器官和生殖器官指数.结果：法氏囊指数和胸腺指数升高不显著（P>0.05）,脾脏和雌性生殖器官指数升高显著（P<0.05）.结论：淫羊藿作为鸡饲料添加剂可以提高雌鸡抗病能力和繁殖性能.     

龙蔓藤茶增强免疫力功能的实验研究

目的:研究龙蔓藤茶增强免疫力功能的作用.方法:采用雌性昆明小鼠,设9.10、18.20、54.60 g·kg-13个剂量组,每日灌胃1次,连续给样品30 d,检测对小鼠体重、胸腺、脾脏器官、Con A诱导的脾淋巴细胞转化、DNFB诱导的DTH、溶血空斑数、血清半数溶血值(HC50)、碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性的影响.结果:与对照组比较,18.20、54.60 g·kg-1剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应能力、NK细胞活性、半数溶血值,54.60 g·kg-1剂量能显著提高小鼠抗体生成细胞数,各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、单核-巨噬细胞碳廓清能力及巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均无显著影响.结论:龙蔓藤茶具有一定增强免疫力功能的作用.     

鸽子法氏囊和脾脏的形态组织学观察

法氏囊、脾脏是肉鸽重要的免疫器官.本研究对10日龄乳鸽、45日龄童鸽的法氏囊、脾脏进行形态学观察和常规石蜡切片,苏木素-伊红染色,LEICADM 4000B显微镜观察.结果表明:随着鸽子的日龄增长,法氏囊淋巴小结增大,淋巴细胞数量增多,免疫力加强;脾脏各组织结构趋于完善,细胞排列紧密.