植病生防木霉菌的RAPD分析

对分离自不同植物根际的38株木霉菌菌株(包括哈茨木霉菌，绿色木霉菌，康宁木霉菌和绿木霉菌)进行了棉花立枯病盆栽防治试验以及用290条随机引物进行了RAPD分析。结果表明，38株木霉菌都能够降低病害严重度，按照防治效果的高低，38个菌株可以分为6个组。共有59条引物产生多态性扩增条带，根据UFGMA聚类分析，其中9条引物(S1，S42，S60，S122，S146，S147，S171，S180，S181)在防效最高的菌株中产生相近的与其他菌株不同的扩增条带，表明这RAPD技术可以用于本霉菌类生防菌株的筛选。     

木霉菌的形态学和可溶性蛋白质电泳鉴定与分类

对61株来自不同植物根际的木霉菌（Trichoderma spp.)进行了形态学鉴定，其中哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum)有47株，绿色木霉菌（Tricoderma viride)10株，康宁木菌（Trichoderma koningii)和绿色木霉菌（Trichoderma virens)分别为两株，对这些菌株进行了可溶性蛋白质电泳分析，并采用UPGMA选取和类分析，结果表明，将距离系数D＝13.8作为聚类分析阈值，61个菌株可分为A，B，C三个组，距离系数D＝9．1时，A组可分为A1，A2，A3，A4，A5五个亚组，A组包括47株哈茨木霉菌，是主要成员。此外A组还有8株绿色木霉菌，两株绿木霉菌和一株康宁木霉菌，B组只有一株绿色木霉菌，C组由一株绿色木霉菌和一株康宁木霉组成，表明木霉菌具有明显的形态学多样性，而哈茨木霉是存在种下分类群，还发现蛋白质电泳分类结果与菌株的地缘有关。     

怀地黄85-5品种内遗传多样性的RAPD和ISSR分析

采用CTAB法提取了怀地黄85-5品种16个单株的基因组DNA,使用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和大小,利用RAPD及ISSR分析其品种内遗传多样性.从24个RAPD引物和43个ISSR引物中分别筛选出具有稳定多态性条带的RAPD引物3个和ISSR引物2个,分别对16个单株基因组DNA进行PCR扩增.3个RAPD引物共扩增出7条带,其中多态性条带为4个,多态性比率为57.14%.2个ISSR引物共扩增出17条带,其中多态性条带为11个,多态性比率为64.7%.结果表明,怀地黄85-5品种内存在遗传差异,但遗传多样性比地黄品种间的低.     

基于ISSR标记的5个南京椴种群的遗传多样性分析

采用ISSR标记技术分析了5个南京椴种群共147单株的遗传多样性。从55条简单重复序列引物中筛选出11条多态性引物,共扩增出80条带,其中76条多态性带,多态性比率为95.00%,平均每条引物可扩增出7.0条带。南京椴Shannon多样性指数变化范围为0.211 7~0.322 7,物种水平多样性为0.407 7;Nei基因多样性为0.140 5~0.211 9,物种水平为0.264 3;有效等位基因数的变异范围为1.240 3~1.356 6,物种水平的有效等位基因数为1.432 6。AMOVA遗传变异巢式方差分析结果表明种群间变异占总变异的34.99%,种群内个体间的变异占总变异的65.01%,约为群体间变异的2倍,说明南京椴群体内个体间的变异在其遗传变异中占主导地位。遗传变异分析表明：种群内和种群间的变异系数分别为0.257 1和0.176 0;物种水平的基因分化系数为0.315 4,种群间的基因流Nm为1.085 5。基于遗传相似系数的UPGMA聚类分析将5个种群明显聚为3支。     

来源于链霉菌Streptomyces albiflaviniger菌株YN-10-2的纳皮拉霉素类化合物的结构和活性

对分离自云南大学校园的攀枝花苏铁根际土壤的链霉菌Streptomyces albiflaviniger菌株YN-10-2的化学成分进行结构和活性的研究.从20L固体表面发酵产物的提取物中经过多种层析方法的综合运用,共分离纯化出6个纳皮拉霉素(napyradiomycin)家族化合物.通过对核磁共振谱图和质谱数据的解析以及文献的对照,确定了化合物的化学结构,分别为napyradiomycin B1(1)、napyradiomycin B3(2)、napyradiomycin C1(3)、napyradiomycin A2a(4)、napyradiomycin A2b(5)和3-chloro-6,8-dihydroxy-8-a-lapachone(6),其中化合物4和5是差向异构体.在滤纸片抗菌实验中,化合物1~3显示出对金黄色葡萄球菌的抑制活性.     

短枝木麻黄地理种源遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记对35个短枝木麻黄（Casuarina equise fifolia）种源的遗传多样性和亲缘关系进行了分析．15个随机引物共扩增了出201条DNA带．其中148条为多态性带，占73．63％．平均每个引物扩增出9．9条多态性带．种源的Shannon’s多样性指数为0．4354，Nei’s基因多样度为0．2884，表明短枝木麻黄种源的遗传多样性水平较高．35个种源彼此的遗传距离在0．0884～0．7539之间，平均0．4045．经过UPGMA聚类分析将35个种源划分为A、B、C、D、E、F6个类群。其中A群5个种源，B群17个种源，C群4个种源．D群2个种源，E群1个种源．F群6个种源．     

川西北高原野生垂穗披碱草遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记技术对25份来自川西北高原的野生垂穗披碱草(Elymus nutans Griseb.)种质进行遗传多样性研究.研究结果如下:(1)筛选出10条ISSR引物对25份材料共扩增出120条清晰的条带,其中多态性条带85条,多态性条带比率为70.8%;每条引物扩增条带数变化为9-17条,平均每条引物总扩增的带数为12条,其中多态性的条带数变幅为3-16条,平均每条引物的多态性条带数为8.5条.(2)供试的25份垂穗披碱草种质间的遗传相似系数变幅为0.703-0.974,平均值为0.828,供试材料间表现出了丰富的遗传多样性.(3)基于遗传相似系数对供试材料进行了聚类分析和主成分分析,聚类分析结果可以将供试的野生垂穗披碱草种质资源分明显分成3类,聚类分析结果与材料的地理来源间具有一定的相关性.     

南召辛夷SRAP遗传多样性分析及指纹图谱的构建

利用毛细管电泳技术，鉴定SRAP(Sequence-related amplified polymorphisms)引物在34个南召辛夷种系中扩增条带的遗传多样性，聚类分析并构建DNA指纹图谱，为南召辛夷的种系鉴定和分子育种提供理论依据。结果表明：(1)5对SRAP引物共扩增出71条带，其中59条多态性的条带(83.1%),每对引物扩增出多态性位点为9～15条，平均为11.8条；(2)选用多态性高、鉴别能力强的2对引物构建了34份南召辛夷种系基于22个位点的DNA指纹图谱；(3)34份南召辛夷的遗传相似系数为0.58～0.97。UPGMA聚类结果显示，34个南召辛夷样品可分为6大类群，且与采摘地无直接关系。     

宿州辣椒地方品种分子遗传多样性分析

利用优化的辣椒SRAP—PCR反应体系,研究宿州辣椒地方品种的遗传多样性．从30个引物组合中筛选出条带清晰、多态性好的15个引物组合,共扩增出62条谱带．其中,多态性谱带有40条,多态率为64．5％;不同引物扩增的条带为3～7条,谱带大小范围为100～1000bp．供试品种的遗传相似系数为0．52～1．00之间,当遗传距离D=0．52时,可将27份材料分为两大类．结果表明,宿州辣椒种质资源遗传多样性丰富．     

川渝部分地区野生黄鳝RAPD引物筛选及其在绵阳群体的验证

采用RAPD技术对产自四川绵阳、内江、雅安和重庆忠县的24尾野生黄鳝基因组DNA进行引物筛选,40条随机引物中有4条引物扩增出片段。选择在4个地区黄鳝个体间多态性较丰富的RAPD引物A10在绵阳黄鳝群体进行扩增分析。RAPD引物A10在6个绵阳黄鳝个体的扩增,产生比较清晰的条带并且呈现一定的多态性,绵阳黄鳝群体内的平均遗传相似率为0.8947,群体内的平均遗传距离为0.1053,从一定程度反映出绵阳地区黄鳝较低的遗传多样性。本研究所筛选引物可为黄鳝分子标记和遗传多样性的分析、亲缘关系和种质的鉴定以及遗传资源的保护利用提供参考。     

分子生物学方法在木霉菌分类研究中的应用

木霉是一类常见的生防真菌,具有重要的科研价值和广阔的应用前景。对木霉进行准确的分类鉴定具有重要的意义。传统的形态学特征分类方法受条件所制约还存在着一些不足。近年来,随着分子生物学技术的不断发展和广泛应用,人们已经将其与形态学分类方法相结合用于解决木霉属的分类和系统进化,并在木霉鉴定方面获得了巨大的成功。本文综述了包括随机扩增多态性DNA(RAPD)、通用引物PCR(UP-PCR)、扩增片段长度多态性(AFLP)、ITS序列分析等在内的多种分子生物学技术在木霉鉴定与多样性分析中的应用;此外,我们还在研究中发现了一种新的分子系统发育标记——木霉植酸酶基因,为木霉的分类鉴定提供了新的参考。     

多功能植病生防木霉的分离筛选与鉴定

从采集的120份土壤样品中分离获得木霉244株。对峙培养发现其中对棉花立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）具有拮抗能力的有114株;固体培养检测木霉的解磷和固氮能力,发现所有菌株都能够水解植酸钙,有74株能够水解磷酸钙,未发现具有固氮能力的菌株。对抑菌圈和解磷圈最大的19株木霉在液体培养条件下检测了解磷和解钾能力,其中菌株T13—8（1．792μg／mL）、123（1．652μg／mL）显示出较高的解磷能力,部分菌株在液体培养条件下不能解磷;部分菌株在液体培养下显示出解钾功能,其中菌株T47-4（20．585μg／mL）显示出较高的解钾能力。上述19个菌株的形态学和ITS序列分析鉴定表明,其中9个菌株为Trichoderma longibrachiatum,8个菌株为rharzianum,另外2个菌株分别为rvirens和zcitrinoviride。     

南澳大利亚麦田茄丝核菌抑病土中木霉菌的特性和鉴定

从抑制Rhizoctonia solani的麦田土中分离到木霉菌,依据形态特征,鉴定为Trichoderma pseudokoningii,T.parceramosum,T longibrachianum和T.harzianum。取样土壤为灰质砂壤土,pH8．4(H2O),位于南澳大利亚的埃文。研究了与生物防治作用机制相关的生理学特性包括几丁质酶活性、β-1,3-葡聚糖酶活性、内切葡聚糖酶活性、抗菌活性以及重复寄生能力。T。pseudokoningii生长速度快但是产分生孢子少,但是T.parceramosum产分生孢子多。与其他种类相比,Trichoderma pseudokoningii的分离频率高,在盆载条件下对小麦Rhizoctonia solani根腐病以及全蚀病防治效果高,对R．solani的重复寄生能力强。Trichoderma pseudokoningii菌株问的重复寄生能力差异不明显,但在几丁质酶活性和β-1,3-葡聚糖酶活性上有明显差别。依据平板抑菌能力,可将木霉菌株分为3个组。菌株在不同pH培养基上的生长速度不同,但没有发现特别能适应碱性条件而快速生长的菌株,虽然这些菌株都分离自碱性土壤。     

植物病原菌凝集素用于筛选生防木霉菌

提取并纯化了番茄早疫病、黑根霉、棉花立枯病菌和黄瓜灰霉病菌等8个植物病原菌菌株的凝集素，试验观察凝集素与供试19个木霉菌株的凝集反应效价，结果表明除番茄早疫病外，木霉菌分生孢子不同浓度悬浮液与植物病原菌产生的凝集素均有凝集反应，并且木霉菌分生孢子与病原菌凝集素的凝集反应效价与木霉菌对其防效有显相关性，统计分析表明镰刀菌产生的凝集素与木霉菌的凝集反应效价与木霉菌对它的防效具有显相关性．因此可以利用凝集素筛选木霉高效生防菌株．     

木霉菌制剂对禾谷全蚀病的防治作用

木霉菌是对多种植物病原真菌有作用的拮抗体,包括Gaeumannomyces graminis var.tritici(Ggt),Pythium spp.,Rhizoctonia solani以及Fusarium spp．木霉菌能产生抑制植物病原真菌生长与活力的抗菌物质,是理想的植物病害生物防治菌。有效的生物防治方法可为农民提供低风险而又灵活的病害防治措施,特别是在需要减缓病原菌对化学杀菌剂产生抗药性的情况下。本文综合介绍了在南澳大利亚田间进行的利用康宁木霉菌(T.koningii)防治禾谷类根部病害的结果,并重点介绍澳大利亚在商品化开发方面的工作进展。在病害发生严重的情况下,康宁木霉菌可降低小麦全蚀病和丝核菌根腐病发病程度分别达2,4％和48％。小麦产量增加7％,也能降低大麦丝核菌根腐病发病程度达59％。康宁木霉菌也能够防治由Ceratocystis paradoxa引起的甘蔗凤梨病。     

铁钉菜乙酸乙酯提取物抗真菌活性的研究

分别采用纸片法、菌饼法及玻片法测定了铁钉菜乙酸乙酯提取物对3种真菌的抑制作用.实验结果表明:乙酸乙酯提取物对3种真菌具有普遍的抑制作用,对绿色木霉的抑菌圈达到2.60cm;经薄层层析分离后,得到7条层析带,用纸片法测定大部分分离带只对1种真菌显示抑制活性,其中Rf0.40带和Rf0.50带活性较强,它们对菌丝生长和孢子...     

松材线虫病死木中真菌和细菌的分离

从来自江苏省和浙江省几个疫区的松材线虫(PWN)病病死木的木质部中分离出111个真菌菌株，经鉴定种类为木霉(Trichoderma spp．)、轮枝霉(Verticillium spp．)、青霉(Penicillium spp．)、镰孢霉(Fusarium spp．)、曲霉(Aspergillus spp.)、毛壳菌(Chaetomium spp．)、茎点菌(Phoma spp．)、短梗单孢霉(Dicoccum sp．)、头孢霉(Cephalosporium sp．)、交链孢霉(Alternaria sp．)，这些真菌约占分离真菌总数的60％；在43％的未鉴定菌中，除3个菌株为有孢菌外，其余均是无孢菌。可以分离出真菌的病死木占56．42％，从病死木中可分离出细菌的比例达86％，可同时分离到真菌和细菌的比例为43．6％。     

松树两种病原菌拮抗微生物的筛选

采用组织分离法从健康的和感染松枯梢病的松树针叶上分离了叶栖微生物1 862株.选取有代表性的菌株通过室内平皿对峙培养,初步筛选出对松枯梢病菌和松赤枯病菌具有较好生防潜力的菌株12株.其中,拮抗细菌菌株6株、酵母菌3株、丝状真菌木霉(Trichoderma sp.)3株,拮抗效果由强到弱依次为细菌、木霉、酵母菌,细菌无菌滤液的拮抗效果明显好于菌体本身.拮抗菌的筛选以相对抑菌效果为准,同时应考虑被抑制率和菌种本身具有的致病性.     

松色二抱菌7个菌株酯酶同工酶的比较研究

<正>应用聚丙烯酰胺凝胶电泳,对松色二孢菌７个菌株进行了酯酶同工酶测定。来自湖南、湖北两省致病力较强的４个ＨＺ型（华中型）菌株共分离出８条酶带,菌株间酶谱相似系数为０．６７－０．８３;来自广东省致病力较弱的３个ＨＮ型（华南型）菌株共分离出１２条酶带,菌株间酶谱相似系数为０．４６－０．５７。ＨＺ型菌株与ＨＮ型菌株之间酶谱相似系数在０．１８－０．５７范。围内,平均值为０．３８,反映出这两种类型的菌株在酯类分枝代谢途径上存在分化,这种分化与它们在子实体形态、产孢条件、致病力强弱等方面存在显著差异的表现是一致的。