雷公藤内酯醇改善IMQ诱导的银屑病样小鼠模型症状的初步探究

银屑病是一种以角质形成细胞过度增殖和异常分化为主要病理特征的慢性炎症性皮肤病,非甾体类免疫抑制剂雷公藤多苷是目前临床使用的治疗银屑病的主要药物之一.雷公藤内酯醇能够抑制人永生化表皮细胞株HaCaT细胞的增殖,因此可能通过增殖抑制作用来减缓银屑病的症状.利用5%咪喹莫特乳膏诱导的银屑病样小鼠模型,对雷公藤内酯醇抑制表皮细胞增殖的作用进行初步探究.经腹腔注射20μg·kg-1及100μg·kg-1雷公藤内酯醇后,银屑病模型小鼠背部皮肤的红斑和皮肤鳞屑等症状均出现不同程度的减轻.皮损区HE(hematoxylineosin)染色结果证实雷公藤内酯醇能明显抑制表皮细胞的过度增殖;免疫组化结果显示雷公藤内酯醇抑制了表皮细胞中增殖细胞核抗原的表达.对皮损区进行Western blot和RT-PCR分析,结果提示雷公藤内酯醇抑制了STAT3和PD-L1的激活.此外雷公藤内酯醇还抑制了TNF-α和IL-17A的表达.     

C57Black／6小鼠全脑缺血后海马神经元损伤的研究

目的:C57black/6小鼠采用双侧颈总动脉夹闭的方法制造全脑缺血模型并进行研究,为这种新的模型在脑缺血研究中的应用提供试验依据.方法:双侧颈总动脉夹闭10 min及30 min诱发全脑缺血模型,术后28 d处死小鼠,制作石蜡切片进行HE染色;术后1 d,3 d,5 d,7 d处死小鼠,制作冰冻切片进行TUNEL及PI免疫染色.结果:在全脑缺血中,10 min组和30 min组小鼠海马CA1区均存在神经细胞受损现象,30 min组神经受损情况严重,30 min组海马CA1区锥体细胞存在明显的凋亡和坏死两种死亡形式.结论 30min全脑缺血更易于引起C57Black/6小鼠海马CA1区神经细胞坏死,30 min全脑缺血试验动物模型更能模拟临床脑缺血.     

2012年秋季北京地区啮齿类实验动物健康状况的病理学调查和分析

随着现代科技的发展,实验动物在多方面起着越来越重要的作用。2012年10月,本实验室参与了北京市实验动物管理办公室组织的北京市啮齿类实验动物健康状况调查。采集心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠进行组织病理学观察,通过石蜡切片HE染色、冰冻切片油红O染色、PAS染色等方法对啮齿类实验动物的健康状况进行鉴定。结果显示,部分动物肝脏表现出不同程度的肝细胞肿胀、轻度肺脏病变,少数表现出肾脏管型、肾小囊腔蛋白样物质渗出和大肠寄生虫感染,但是啮齿类实验动物总体水平属健康状况。以上病变的出现可能与动物的生存环境、饲料营养成分和运输处死过程中的应激有关。     

一种制作高质量动物组织石蜡切片的方法

石蜡切片是组织学和病理学制片技术中最为常用的方法,广泛应用于临床诊断和科研教学中。石蜡切片制作步骤繁琐,影响因素众多,且不同组织类型具有不同的特点,每个操作环节的失误都将影响切片的最终质量。详细介绍了辽宁师大生科院实验室经过长期实践和改进后的动物组织石蜡切片制作方法。从石蜡的选择与处理、动物组织取材与固定、透明浸蜡与包埋、切片和烤片、HE染色几个方面探讨了石蜡切片制作过程中的经验或改进措施,具有一定的参考价值。     

香鳞毛蕨擦剂的药效学研究

研究香鳞毛蕨擦剂对鼠尾鳞片表皮模型颗粒层形成的影响以及对兔耳痤疮模型的作用.香鳞毛蕨擦剂每日给药2次,连续15d后,取鼠尾表皮,石蜡包埋,切片,HE染色.光学显微镜下观察有颗粒层的鳞片数.三氯乙酸涂抹兔耳管开口处,建立兔耳痤疮模型,肉眼观察香鳞毛蕨擦剂对此模型的影响.香鳞毛蕨擦剂可促进鼠尾鳞片表皮模型颗粒层形成,可改善三氯乙酸所致兔耳痤疮模型的表面症状.香鳞毛蕨擦剂可通过促进表皮颗粒层的形成而对银屑病起一定的治疗作用.     

正交试验设计探索小鼠不同组织冰冻切片的优化制备方法

摘要:目的 针对小鼠各种常规组织,优化冰冻切片的实验条件。 方法 选择固定、脱水方法,切片温度及切片厚度,三因素、三水平设计正交实验,经组织处理、包埋、冰冻切片、HE 染色后,按照冰冻切片质量标准评分,经 SPSS21. 0 软件分析,得到小鼠各常规组织冰冻切片制备的优化条件。 结果 不同固定脱水程序的差异有统计学意义,肝脏组织最佳切片条件为固定后脱水,切片厚度控制在 5 μm,-18 ℃ 切片;肌肉、心、脾、脑、肾、主动脉组织最佳切片条件为不固定、不脱水,切片厚度控制在 5 μm,-18 ℃ 切片。 结论 应用正交试验设计和分析,可以高效、快速而经济的获得小鼠各常规组织冰冻切片优化实验条件,减少了实验动物的使用数量及试验次数,提高了实验动物的利用率和实验的准确性。     

4种外用方剂对DNFB致小鼠慢性湿疹的影响

探讨4种方剂对慢性湿疹模型小鼠的影响及初步作用机制,为临床应用及深度开发提供参考.采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)复制小鼠慢性湿疹模型,分别连续21 d外用4种方剂药液及阳性对照进行干预,比较各用药组皮损评分、耳廓肿胀度、免疫器官系数、血清炎症因子及皮肤组织病理学改变.各方剂药液均能明显降低DNFB复制慢性湿疹小鼠的...     

12月龄ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠主要动脉病理学变化

目的探讨12月龄ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠主要动脉病理学变化。方法12月龄雌雄各半动脉粥样硬化小鼠6只,选取主动脉根部、颈动脉、腹主动脉及肾动脉进行冰冻切片,油红染色,光学显微镜观察血管病理变化,采集图像。结果6例小鼠主动脉根部及肾动脉血管均可见油红染色,4例小鼠腹主动脉血管可见油红O染色,而6例小鼠颈动脉均不见油红O染色斑块。结论北京大学医学部实验动物部饲育的ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠是研究动脉粥样硬化的良好动物模型。     

维生素D受体免疫组织荧光染色方法建立

建立维生素D受体(Vitamin D Receptor,VDR)特异性免疫荧光染色方法,对人十二指肠组织中VDR进行测定。采用石蜡包埋的方法对组织进行永久性固定、并制作组织石蜡切片,利用苏木精-伊红(Hematoxylin&Eosin,H&E)方法鉴定组织形态结构的完整性,利用免疫荧光(Immunofluorescence,IF)染色方法对组织中VDR进行免疫荧光染色,确定抗体使用最佳浓度范围并优化实验条件。结果表明:人十二指肠VDR在绒毛上皮细胞的胞质中高表达,一抗D-6的最佳稀释比率为1∶100,二抗A594的最佳稀释比率为1∶250,抗原最佳复性条件为0.01 mol/L p H 6.0柠檬酸缓冲液中850 W功率微波煮沸20 min。按照此方法制作的石蜡切片组织形态结构完整,VDR染色特异性高,重复性好。     

不同粘片剂对油茶叶片石蜡切片效果的影响

比较不同粘片剂处理对油茶叶片石蜡切片粘片效果的影响,优化植物石蜡切片粘片方法,笔者在制作油茶叶片石蜡切片过程中,用4种不同的粘片剂(甲醛明胶液、铬矾明胶液、明胶甘油液、蛋清甘油液)处理石蜡切片,比较其粘片效果.结果显示,经蛋清甘油液处理的切片的形态结构完整度最佳,切片完整率高,而且染色效果清晰.不使用粘片剂处理的切片,叶片结构完整度最低,染色效果一般.最终得到结论为蛋清甘油液是制作植物石蜡切片的理想粘片剂.     

2012年春北京抽检的啮齿类实验动物健康状况的病理学调查和分析

2012年5月本实验室对北京16家实验动物单位的啮齿类实验动物的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠进行组织病理学观察,通过石蜡切片HE染色、冰冻切片油红O染色、PAS染色等方法对啮齿类实验动物的健康状况进行鉴定。结果显示,绝大多数啮齿类实验动物为健康状态,部分非健康动物主要有肝脏脂肪变性、轻度肺脏病变、心脏颗粒变性和肾脏蛋白管型。这可能与饲养环境、饲料状况以及采样运输的应激有关,通过加强饲养管理可以使这种情况改善。     

2018年5月北京市啮齿类实验动物质量抽查的病理检测

目的 2018年5月本实验室对北京地区22家实验动物机构送检的400只啮齿类实验动物进行病理检测。根据检测结果对实验动物的饲养管理提出合理建议。方法 采取心脏、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、大肠、小肠,制成石蜡切片或冰冻切片,经H.E.染色、PAS染色或油红O染色后置于光学显微镜观察,采集数码图像,记录结果。结果大鼠、小鼠、豚鼠有少数病例表现为肝细胞肿胀,肺脏、心脏局灶性炎性细胞浸润,大肠出现疑似球虫感染的病变;地鼠组织脏器均未见明显异常。结论 本次病理学抽检中的实验动物基本为健康状态,但需要加强和改善饲养管理条件。     

维医证候异常黑胆质动物模型微循环状态的改变

为探讨异常黑胆质证候动物模型微循环状态的改变,选择健康ICR雄性小鼠30只,分为模型组和正常对照组,每组15只。正常对照组和模型组造模后的实验动物眼球放血处死,并迅速取出舌和前右侧趾,一部分采用石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜下进行组织学观察;另一部分采用透射电镜观察细胞超微结构改变。采用对比研究的方法观察和比较两组实验动物微循环状态的改变。结果显示,与正常对照组相比,模型组小鼠舌和甲床组织病理学有明显地改变和细胞器损伤。光镜下观察,模型组蕈壮乳头和上皮下结缔组织内微血管扩张、淤血,血管周围偶见少量炎性细胞;甲床真皮浅层血管与骨髓内血管扩张、充血。电镜下观察,模型组毛细血管管腔狭窄,呈不规则状,管壁粗糙,内皮细胞异染色质增多;甲床毛细血管内皮细胞异染色质明显增多。由此得出结论:异常黑胆质的产生过程中机体有微循环状态的改变。     

开口箭对小鼠5-羟色胺分泌的影响

目的:采用灌胃、石蜡切片、免疫组化染色和ELISA等方法,探讨开口箭对小鼠5-羟色胺(5-HT)分泌的影响.方法选取20²2g健康昆明小鼠20只,均分成A,B,C,D 4组,分别以蒸馏水和0.25、0.50、1.00mg/mL的开口箭灌胃,0.20mL/次/d,连续灌胃7d.第8d对全部小鼠摘眼球取血,ELISA检测血清5-HT质量浓度;取血后立即处死小鼠,取十二指肠,4%甲醛固定,石蜡切片,免疫组化染色,镜下统计5-HT阳性细胞数量.结果与A组相比,B,C,D组小鼠血液5-HT质量浓度逐渐降低,十二指肠肠壁组织中5-HT阳性细胞数也明显减少.结论开口箭会下调小鼠5-HT的分泌.     

2014年春季北京地区啮齿类实验动物健康状况的病理学调查和分析

目的 2014年5月本实验室对北京市14家单位的啮齿类实验动物的健康状况进行病理学调查。方法采集啮齿类实验动物的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠后经10%福尔马林固定,通过石蜡切片H.E.染色、冰冻切片油红O染色、PAS染色于显微镜下观察。结果绝大多数实验用鼠为健康状态,仅部分非健康动物出现不同程度的肝细胞肿胀(32.6%)、轻度肺脏病变(24%)、肾脏蛋白样渗出物和管型(13.2%)。本次抽检结果与前两年抽检结果相比较,肝脏脂肪染色阳性率(6.2%)低于2013年春秋季的17.1%和6.25%,以及2012年春秋季的26.7%和14.8%,有降低的趋势。值得引起注意的是,肾脏病变从2010年春季在小鼠(2%)和2011年春季在大鼠(20%)中偶发,发展至今,已经在小鼠(6%)、大鼠(12%)和豚鼠(20%)中普遍存在,从偶发病变发展成为常发病变,应加强防范。结论本次调查结果表明北京地区啮齿类实验动物基本为健康状态,少数动物出现组织病理学变化可能与饲养环境、饲料营养成分以及运输、处死时的应激有关,宜提高饲养管理水平和避免应激来加以改善。     

脑组织细胞染色

本实验将一个月的昆明系小鼠经7天过氧化氢皮下注射处理后,用多种染色方法对其石蜡组织切片进行染色,如HE染色法,改良的HE氧化汞染色法,刚果红染色法,甲基绿——派若宁染色法,甲苯胺蓝染色法,中性红染色法。经过这几种染色方法的比较,得出对大脑组织尤其是海马组织凋亡细胞,坏死细胞观察效果好的染色方法。     

乳房外湿疹样癌20例临床分析

目的 分析乳房外湿疹样癌的临床及组织病理学特点.方法 对20例乳房外湿疹样癌患者的临床及组织病理学资料进行分析.结果 20例患者早期皮损均为湿疹样非特异性,极易误诊、漏诊.对老年男性发生于外生殖器部位的湿疹样皮损,在经局部外用药物治疗6～8周后无明显疗效者,应取活检以排除本病.通过组织病理学检查,发现了本病特有的Paget细胞,组织病理学改变并结合临床资料分析是诊断的关键.结论 要提高对本病的认识,早期诊断,早期治疗,以防癌细胞发生转移,错过治疗的最佳时期.     

链球菌制剂预防性治疗实验动物糖尿病机理研究

为了探讨链球菌制剂预防性治疗糖尿病的机理,以纯系的自发性糖尿病NOD小鼠和链脲霉素诱导糖尿病鼠为动物模型,从5周～20周皮下注射链球菌制剂0.1 mg/只,对照组注射等量生理盐水,观察其发病率.至40周时链球菌制剂组均未发病,而生理盐水组发病率为70%.取胰腺组织作病理切片,Fas、FasL染色及胰岛β细胞染色.未发病鼠无Fas表达,但有FasL的表达;已发病鼠有Fas的表达;经链球菌制剂免疫后小鼠有FasL表达.相同的结果也出现在以链脲霉素(STZ)诱导的迟发型糖尿病模型鼠中.链球菌制剂可能通过改变Fas L/Fas系统在胰腺组织的表达,来预防性治疗糖尿病,发挥免疫调节作用.     

小鼠在体肺灌注制样方法体重依赖的灌注量的探讨

为探讨小鼠在体肺灌注制样方法体重依赖的最适灌注量。通过采用在体肺灌注制样并根据体重从0至0.2ml/20g探索灌注量,固定后进行切片HE染色观察固定效果。结果表明在0.2ml/20g,肺组织灌注均匀,切片后组织结构清晰,人为假象较少。可见小鼠在体肺灌注制样灌注量为0.2ml/20g可取得良好的组织固定效果。     

植物石蜡切片制作（paraffin section）的试验流程探讨

石蜡切片（paraffin section）双重染色法是组织学常规制片技术中广泛应用的方法之一。本试验用常规石蜡包埋法进行植物叶片的石蜡切片制作,并进行一些创新性改动。观察植物叶片结构结果显示,组织经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤后完好保存细胞原有状态,而且能清晰辨认其形态结构。并且看到木质化的表皮细胞、木质部、导管壁细胞被番红染色液染成红色;其韧皮部、栅栏组织、海绵组织及部分皮层细胞被固绿染色液染成绿色。