大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因克隆及其原核表达载体构建、表达

通过ＰＣＲ方法克隆出大肠杆菌株Ｈ－３０的胞嘧啶脱氨酶基因，并将其起始密码子ＧＴＧ突变为ＡＴＧ，构建了ＣＤ基因的原核重组表达载体ＰＢＶ２２０－ＣＤ，通过测定胞嘧啶脱氨酶活性筛选出ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０ＣＤ－１１５－氟胸嘧啶对ＣＤ活性克隆有杀灭毒性，ＤＮＡ序列分析显示ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０－ＣＤ－１１较基因文库中所报道的ＣＤ基因存在１６个位点碱基改变，引起肽链中氨基酸改变的位点有５人。     

带有preS抗原决定簇的乙肝表面抗原的DNA免疫研究

构建了３种融合了ｐｒｅＳ抗原决定簇的乙肝表面抗原的表达质粒。在ＣＯＳ－Ｍ６细胞中暂时表达的结果显示,在ＣＭＶ启动子转录调控下融合基因表达的蛋白可以有效地分泌至细胞外,并且同时具有ＨＢｓＡｇ,ｐｒｅＳ１和ｐｒｅＳ２抗原性。带有ｐｒｅＳ抗原决定簇顺序的质粒ＤＮＡ直接免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后,能诱发小鼠产生抗Ｓ抗体,抗体滴度高于仅带有Ｓ基因的表达质粒。     

衣藻叶绿体表达体系的建立

构建了甲型肝炎病毒ＶＰ３Ｐ１区和丙型肝炎病毒Ｃ区融合抗原基因的衣藻叶绿体转化载体ｐＡＣⅢ，并用基因枪法将其导入衣藻叶绿体内，转化子通过抗性培养和暗培养筛选，经ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ，Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定，证实融合抗原基因已整合于衣藻叶绿体基因组中的ｃｈｌＬ结构基因位置，并在衣藻叶绿体本身的双启动子５’ｃｈｌＬ－５‘ａｔｐＡ调控下，得     

IL-2与HBV前S抗原融合蛋白的真核细胞分泌表达

为使完整的ＨＢＶ前Ｓ抗原能在真核细胞中分泌表达,构建了新型真核表达克隆,以人白细胞介素－２的前导序列为分泌信号肽,在ＩＬ－２Ｃ端与ｐｒｅＳ１ＡｇＮ端之间以高亲水性氨基酸片段相连。由此构建的质粒转染ＣＯＳ－７细胞能分泌表达ＩＬ－２ｐｒｅＳ融合蛋白,其表达效率与表达天然ＩＬ０－２分子一致。     

中国番茄黄化曲叶病毒小环状DNA分子的发现与证实

番茄黄化曲叶病毒为－Ｂｅｇｏｍｏｖｉｒｕｓ联体病毒。在中国番茄黄化曲叶病毒（ＴＹＬＣＶ－ＣＨＩ）中发现并主宰了与ＴＹＬＣＶ－ＣＨＩ有关一些小环状ＤＮＡ分子的存在。这些小环状ＤＮＡ分子的大小为ＴＹＬＣＶ－ＣＨＩＤＮＡＡ全长基因组的一半，１．２～１．４Ｋｂ左右。序列分析表明，这些小分子序列中间均有一段未知来源的ＤＮＡ片段插入。分子杂交证实这些未知来源的ＤＮＡ片段既不与ＤＮＡＡ同源也不与ＤＮＡＢ同源，可     

蜂毒新多肽部位BVⅠ-2H的分离纯化及其生物学活性

利用蜂毒治疗类风湿性关节炎（ＲＡ）已有悠久的历史，并取得了良好的治疗效果．为研究其抗炎机制及确定有效的抗炎成分，利用凝胶过滤层析、肝素亲和柱层析、高效液相色谱等方法分离蜂毒多肽，并观察蜂毒多肽对小鼠脾淋巴细胞细胞周期、细胞因子合成及ＩκＢα（蛋白磷酸化的影响．高效液相色谱检测分离得到的蜂毒多肽ＢＶⅠ－２Ｈ为单一对称峰，电喷雾质谱检测结果表明ＢＶⅠ－２Ｈ是蜂毒多肽混合物，其主要成分的分子量为６４４．８　ｕ．ＢＶⅠ－２Ｈ可抑制ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖和ＩＬ－１合成，可使ＣｏｎＡ诱导的脾淋巴细胞呈现明显的Ｇ２／Ｍ期阻滞．此外，ＢＶⅠ－２Ｈ可抑制ＰＭＡ诱导ＴＨＰ－１细胞合成ＴＮＦα，抑制ＴＮＦα　ｍＲＮＡ的表达及ＩκＢα蛋白磷酸化．实验结果提示，蜂毒多肽ＢＶⅠ－２Ｈ是蜂毒发挥抗炎作用的重要组成成分．     

利用烟草花叶病毒载体系统在烟草中表达丙型肝炎病毒的核心抗原

烟草花叶病毒能在侵染植物细胞中大量积累，具有作业表达载体的潜力，本研究建立了一种新的ＴＭＶ互补表达系统。ＴＭＶ外壳蛋白缺失的突变体ＴＳＨｃ带有分泌型丙型肝炎病毒的核心抗原基因，为体ＴＳＢＤ是ＴＭＶ复制酶缺失突变体，它们共同接种烟草之后因功能上互补而产生系统侵染。     

烟草花叶病毒及番茄花叶病毒弱毒疫苗N14基因组重组体的构建与侵染性分析

用基因交换的方法将烟草花叶病毒普通株（中国分离物，ＴＭＶ－Ｃｖ和番茄花叶病毒弱毒疫苗Ｎ１４基因组的运动蛋白（ＭＰ）、外壳蛋白（ＣＰ）基因编码区和３＇非编码区嵌合于Ｎ１４和ＴＭＶ－ＣＶ ５＇非编码区和复制酶基因的下游，构建重组病毒克隆ｐＴＮ和ｐＮＴ，并进行体外转录和烟草侵染试验结果 ｐＴＮ和 ｐＮＴ体外转录物对烟草均具侵染性：前者感染枯斑三生烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ．Ｓａｍｓｕｎ ＮＮ），等量感染的枯斑形成数比 ＰＴＭＶ－Ｃｖ少；感染普通烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｈｕａｎｇｍ－ｉａｏｙｕ，黄苗榆品种），出现典型系统症状，但叶片畸形率较低．后者感染枯斑三生烟，等量感染的枯斑形成数比ｐＮ１４多；感染普通烟仍不出现系统症状．结果表明：重组病毒ＴＮ和ＮＴ仍能在试验用烟草中增殖，前者在普通烟上基本表现为ＴＭＶ－Ｃｖ的强病毒性状，后者在普通烟上表现为Ｎ１４的弱病毒性状； ＴＭＶ－ＣＶ和 Ｎ１４的复制酶与 ＭＰ， ＣＰ和 ３＇非编码区之间为非严紧型连接，两者在类似的各亚基因组之间可进行功能互补．初步推测，Ｎ１４复制酶编码基因的突变区对Ｎ１４的致弱起主要作用；其运动蛋白编码基因的突变区对被侵染烟草     

线性及超支化共轭聚合物的合成及光物理性质

利用Ｗｉｔｔｉｎｇ反应合成了超支化ＰＰＶ及线性ＰＰＶ（包括对位和间位ＰＰＶ），产物经ＦＴＩＲ，＾Ｈ－ＮＭＲ，＾１３Ｃ－ＮＭＲ，凝胶渗透色谱（ＧＰＣ）等手段进行了表征，研究了它们在溶液和薄膜状态下的光物理性质。在二氯甲烷溶液中，超支化ＰＰＶ和具有间位结构的线性ＰＰＶ的最大吸收和发射波长的位置基本相同，都在对位ＰＰＶ吸收和发射的短波方向。说明超支化ＰＰＶ分子的电子结构与对位ＰＰＶ明显不同，处在一种特殊     

光系统Ⅱ原初电子给体的体外模拟

组氨酸与叶绿素配位是生物体内叶绿素存在最明显的结构特征，采用Ｎ－甲基咪唑（Ｃ４Ｈ６Ｎ２）模拟生物体内的组氨酸，通过观测ＣＣｌ４中的Ｃｈｌａ与Ｃ４Ｈ６Ｎ２反应的可见吸收、ＣＤ和ＭＣＤ光谱得到以下结论：（１）在纯ＣＣｌ４中，每个Ｃｈｌａ处于五配位状态，Ｃｈｌａ形成不对称的双聚体内的组氨酸彼此之间存在较强的语作用，提出了两个Ｃｈｌａ通过不等价的两个Ｍｇ－Ｏ配位键（Ｏ分别来自于以３＾１位的酮基和Ｃ１７位酯     

硅酞菁染料与SiO2介质的结构关联及强光限幅效应

通过二氯硅酞菁染（ＳｉＰｃＣｌ２）中的活性γ－氨基丙基三乙氧基硅烷（３－ａｎｉｎｏｐｒｏｐｙｌｔｒｉｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ，ＮＨ２（ＣＨ２）３Ｓｉ（ＯＣ２Ｈ５）３，ＫＨ５５０）中氨基的亲核取代化学反应，把酞菁染料连接到ＫＨ５５０中，反应产物γ－缩水甘油醚基丙基三甲基硅烷（３－ｇｌｙｃｉｄｏｘｙｐｒｏｐｌｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ，ＣＨ２ＯＣＨＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）３Ｓｉ（ＯＣＨ３）３，ＫＨ５６     

稻米淀粉RVA谱特征主要受Wx基因控制

利用一个以窄叶青８号和京系１７为新本构建的加位单倍体（ＤＨ）群体及其分子连锁图谱，对稻米淀粉粘滞性谱（ＲＶＡ ｐｒｏｆｉｌｅ）各项参数进行了数量性状基因座位ＱＴＬ分析和定位。结果表明，稻米淀粉站滞性谱６项参数在ＤＨ群体中均为连续变异，各参数表征的性状均存在一定数量的超亲类型。除了最高粘度受第１２染色体上的微效基因ｑＰＰＫ－１２控制外，其他性状均检测到Ｗｘ主效基因效应。因此，认为稻米淀粉粘滞性谱主要     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用，为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．     

导致田间烟草曲叶病的又一病毒(非中国烟草曲叶病毒)

对病毒分离物ＤＮＡ序列分析的结构表明，除曾报道的中国烟草曲叶病毒，还存在另一种能引起我国广西地区烟草曲叶病的双生病毒。该病毒ＤＮＡ－Ａ由２７３４个核苷酸组成，与ＴｂＬＣＶ－ＣＨＩ的已知的部分序列不同。其大基因间隔区（ＬＩＲ）长２６９ｎｔ，病毒链有两个ＯＲＦ：ＡＶ１（１１５ａａ）和ＡＶ２（外壳蛋白基因，２５６ａａ）；病毒互补链有４个ＯＲＦ：ＡＣ１（复制酶基因，３６１ａａ）、ＡＣ２（反式激活蛋白，１３     

一种新的红细胞源性降压因子的作用机制

研究了一种来自红细胞的新的内源性降压因子（ＥＤＤＦ）的降压机制，重点探讨其对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）胞浆游离钙离子及核内钙离子转运的影响，以ｆｌｕｏ－３／ＡＭ作为Ｃａ＾２＋荧光探针，采用激光扫描共聚焦显微镜观察人脐静脉ＶＳＭＣ（ＨＵＶ），钙超载模型大鼠肠系膜ＶＳＭＣ（ＣａＯＭＶ）和正常对照Ｗｉｓｔａｒ大鼠肠系膜培养的ＶＳＭＣ（ＷＭＶ）「Ｃａ＆２＋」ｉ及（「Ｃａ＾２＿」ｎ）的变化；用流式细胞仪测定     

La3+和Gd3+对鼠肝癌H-35细胞Ca2+内流的影响

通过测定＾４５Ｃａ＾２＋摄取初速度的变化研究了Ｌａ＾３＋和Ｇａ＾３＋对鼠肝癌Ｈ－３５细胞Ｃａ＾２＋内流的影响。发现低浓度Ｌａ＾３＋和Ｇａ＾３＋能增加肝癌Ｈ－３５细胞Ｃａ＾２＋内流初速度达６－１０倍。Ｃａ＾２＋内流的初速度随Ｃａ＾２＋浓度变化的动力学研究表明,肝癌Ｈ－３５细胞中存在２类Ｃａ＾２＋亲和部位的通道,即高亲和位和低亲和位Ｃａ６２＋内流通道,而Ｌａ＾３＋和Ｇｄ＾３＋刺激的肝癌Ｈ－３５细胞则只     

携带人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因重组腺相关病毒的大量制备与体内外表达研究

构建了一系列携带有人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因（ｈⅨＲ３３８Ａ）及不同调控元件的腺相关病毒 表达载体，并经体外转导不同的细胞系，筛选、优化，挑取高表达质粒及其转导稳定细胞克隆，然后， 以一个携带有腺相关病毒包装蛋白的ｒＡＡＶ/ＨＳＶ杂合病毒包装系统介导进行重组腺相关病毒的大量制 备，建立了可进行产业化制备的技术路线及高滴度、大量制备重组腺相关病毒的技术方法，所获得的重 组病毒滴度达 １．２５ × １０１２病毒颗粒／ｍＬ，然后，利用这一重组病毒，对ｒｈＦⅨＲ３３８Ａ进行离体及在体表达， 获得了 ｒｈＦⅨＲ３３８Ａ在肌细胞系 Ｃ２Ｃ１２及血友病 Ｂ小鼠体内的高效表达，表达峰值分别达（２５５１．３２± ９２．１４）ｎｇ·（１０６细胞）－１·（２４ｈ）－１及４６３．２８ｎｇ·ｍＬ－１，与野生型Ⅸ因子的表达水平（２５６５．７６±６４．３６）ｎｇ· （１０６细胞）－１·（２４ ｈ）－１及４５３．９２ ｎｇ· ｍＬ－１无显著性差异．然而，其凝血活性却成倍增加，约为后者的 ２．４６倍.．将人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因引入血友病 Ｂ基因治疗研究之中，同时，探讨了一个新的包装 系统──ｒＡＡＶ／ＨＳＶ杂合病毒包装系统──在重组ＡＡＶ载体大量制备中的应用     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞，ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验     

用dhfr非缺陷型细胞高效表达EPO基因的研究

用我们所克隆的促红细胞生成素基因组基因，构建了表达载体ｐＲＳＶ／ＥＰＯ。用脂质体法转染ＣＨＯ－Ｋ１２细胞，在４００μｇ／ｍＬ的Ｇ４１８浓度下筛选到了稳定表达ＥＰＯ的细胞株，表达量约为每天每１０＾６细胞１６０ＩＵ，在此基础上又构建了带有潮霉素Ｂ抗性的二氢叶酸还原酶基因表达载体ｐＨＹ／ｄｈｆｒ，再次这一表达载体用脂质体方法导入Ｃ１０细胞中，经２００μｇ／ｍＬ的潮霉素Ｂ筛选，获得了部分潮霉素Ｂ抗性的细胞     

硅酞菁染料与SiO2介质的结构关联及强光限幅效应

通过二氯硅酞菁染料（ＳｉＰｃＣ１２）中的活性氯与γ－氨基丙基三乙氧基硅烷（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌｔｒｉｅ－ｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ，ＮＨ_２（ＣＨ_２）_３Ｓｉ（ＯＣ_２Ｈ_５）_３，ＫＨ５５０）中氨基的亲核取代化学反应，把硅酞菁染料连接到ＫＨ５５０中．反应产物与γ－缩水甘油醚基丙基三甲氧基硅烷（３－ｇｌｙｃｉｄｏｘｙｐｒｏｐｌｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ，ＣＨ_２ＯＣＨＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_３Ｓｉ（ＯＣＨ_３）_３，ＫＨ５６０）相复合，随着系统物质的水解和聚合反应的进行，ＳｉＰｃ成功地嫁接于无机网络中，使得本来极难溶的酞菁有机分子以较大浓度以单体形式掺杂到无机介质中，制得较好物化性能与光学性能的复合材料．用红外光谱与紫外光谱表征了ＳｉＰｃＣ１_２与ＫＨ５５０的化学反应产物用波长５３２ｎｍ，脉宽８ｎｓ的 Ｎｄ~(３＋)． ＹＡＧ激光对获得的不同 ＳｉＰｃＣｌ_２掺杂浓度的复合材料的光限幅效应作了研究．