人可溶性TRAIL蛋白在衣藻叶绿体中的表达

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无毒性. 以衣藻叶绿体基因组的clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2为同源重组片段, 壮观霉素抗性基因为选择标记, 构建了编码TRAIL胞外区可溶性片段(sTRAIL)的cDNA衣藻叶绿体表达载体p64TRAIL, 通过基因枪将其导入衣藻叶绿体中, 经壮观霉素抗性筛选, 获得了3个抗性衣藻转化子. 转化子经过抗性继代筛选后, 经PCR, Southern blot检测分析及暗培养, 证实sTRAIL编码区DNA已整合到衣藻叶绿体基因组中, Western blot检测分析表明, sTRAIL编码区在衣藻叶绿体中获得了表达. Western blot影像摄录分析表明, 表达的sTRAIL蛋白占衣藻细胞可溶性总蛋白的0.43%~0.67%. 实验结果证明, 用衣藻叶绿体作为生物反应器生产医药蛋白是可行的.     

丙型肝炎病毒多表位抗原在小鼠与家兔中的免疫应答

在丙型肝炎病毒基因组中优选５个具有良好免疫原性的高度保守Ｔ／Ｂ细胞表位,组合成一个ＨＣＶ多表位抗原基因,并与β－并乳糖苷酶基因融合后在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达了具有ＨＣＶ免疫特异性的ＧＺ－ＰＣＸ抗原。     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞,ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用,为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．     

烟草花器官实体基因的部分序列及其表达

以烟草花芽的ｃＤＮＡ一链为模板扩增出３个花器官实体基因的同源序列ＮＴＳＱＵＡ４,ＮＴＳＱＵＡ１２和ＮＴＳＱＵＡ１５。这３个克隆都包含有典型的花器官实体基因所拥的的结构域：Ｉ区,Ｋ区和Ｃ末端区。同Ａ类基因ＡＰ１和ＳＱＵＡ的氨基酸序列相比,这３个克隆有５０％－６０％的残基与它们相同。     

小鼠乳清酸蛋白启动区指导人促红细胞生成素在转基因小鼠乳腺的表达

以小鼠乳清酸蛋白基因（ｍＷＡＰ）调控区与人促红细胞生成素基因（ｈＥＰＯ）构建晤基因,经动物个体暂态表达方法确证ｈＥＰＯ可在乳特异表达后,用显微注射方法将融合基因导入小鼠受精卵,再将受精移植到假孕小鼠,获得８６只Ｇ０代小鼠,经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实,有５８只整合阳性小鼠,整合率为６７％,ＥＬＩＳＡｋｉｔ,ｄｏｔＥＬＩＳＡ等方法检测小鼠３９只,有１６只表达阳性,     

高粱psbA基因启动子“-35”元件的突变效应

应用化学合成的２０ｎｔ寡核苷酸引物,诱导高粱ｐｓｂＡ基因启动子“－３５”元件（ＴＩＧＡＣＡ）中的第１位Ｔ碱基和第３位Ｇ碱基发生突变,获得３个突变体ＡＴＴＡＣＡ,ＧＴＧＡＣＡ和ＡＴＧＡＣＡ,在菠菜叶绿体蛋白质提取物系统中,检测突变的及野生型的高粱ｐｓｂＡ基因启动子与蛋白质的结合能力。凝胶阻滞实验结果表明,野生型的具有很强的蛋白质结合条带,单碱基突变的ＡＴＧＡＣＡ和ＧＴＧＡＣＡ的蛋白质条带的强度明显下     

一种新的小鼠被毛突变基因定位

分别尝试用ＲＡＰＤ（随机扩增多态ＤＮＡ）法和重组率测定法对所发现的被毛突变进行基因定位。结果为所选用的１００个１０ｂｐＲＡＰＤ引物中,８７个获得了扩增产物,由于所获得的产物与小鼠表现间缺乏相关性,利用ＲＡＰＤ法未能交闰到染色体上。以分布于小鼠１１条染色休下的Ｉｄｈ１,Ｃａｒ２,Ｍｕｐ１,Ｐｇｍ１,Ｈｂｂ,Ｅｓ１０,Ｅｓ１,Ｍｏｄ１,Ｇｄｃ１,Ｃｅ２,Ｅｓ３等生化基因位点为遗传标记,对分别对与ＣＡＢ     

水稻金属硫蛋白核基因的克隆及其序列特征

经ＲＮＡ杂交分析发现ｒｉｃＭＴ基因在水稻茎部高效特异表达,其表达是叶片中的１００多倍,暗示出该基因的５‘上游可能贮藏着１个高效特异表达的启动子。为了弄清ｒｉｃＭＴ基因的表达调控及启动子结构特征,从水稻基因组文库中筛选出ｒｉｃＭＴ的核基因克隆,并测出了４０８４ｂｐ序列,其中包括２９７０ｂｐ的５‘上游区,约６９０ｂｐ的转录区和４２０ｂｐ的３’下游区。     

缺铁诱导玉米根cDNA文库的构建及铁胁迫基因(fdr3)的筛选和鉴定

为了分离铁缺乏相关基因,构建了一个滴度为４．５ｘ１０~５ｐｆｕ／μｇ的λＺＡＰ表达型缺铁胁迫玉米根 ｃＤＮＡ文库．通过差异筛选得到 ６个阳性克隆．经 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ验证在缺铁条件下加强表达的有ｆｄｒ３（Ｆｅ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｒｅｌａｔｅｄ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｅ。     

烟草花叶病毒及番茄花叶病毒弱毒疫苗N14基因组重组体的构建与侵染性分析

用基因交换的方法将烟草花叶病毒普通株（中国分离物,ＴＭＶ－Ｃｖ）和番茄花叶病毒弱毒疫苗Ｎ１４基因组的运动蛋白（ＭＰ）、外壳蛋白（ＣＰ）基因编码区和３’非编码区嵌合于Ｎ１４和ＴＭＶ－Ｃｖ５’非编码区和复制酶原下游,构建重组病毒克隆ＰＴＮＴ和ＰＮＴ,并进行体外转录和烟草染试验。结果ｐＴＮ和ｐＮＴ体外转录物对烟草均具侵染性：前者感染枯斑三生烟（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔｏｂａｃｕｍｃｖ．ＳａｍｓｕｎＮＮ）,等     

转甜菜碱醛脱氢酶基因烟草叶片中抗氧化酶活性增高

转甜菜碱醛脱氢酶（ＢＡＤＨ）基因烟草叶片超氧物歧化酶（ＳＯＤ）的活性比对照增加约３６％,过氧化氢酶（Ｃａｔ）和过氧化物酶（ＰＯＤ）活性分别提高约的６２％和８８％,定位于叶绿体中的抗坏血酸－谷胱甘肽途径的抗坏血酸过氧化物酶（ＡｓＡＰＯＤ）,脱氢抗坏血酸还原酶（ＤＡｓＡＲ）和谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）活性分别提高６７．７％,４７．９％和３８．８％,表明由ＳＯＤ催化阴离子自由基Ｏ２所产生的活性氧Ｈ２Ｏ２能被     

Pn空间群绿辉石晶体结构的测定

绿辉石的化学式可以表示为（ＭⅡ）（ＭⅠ）（Ｓｉ,Ａｌ）２Ｏ６,ＭⅡ位代表Ｃａ或Ｎａ,Ｎａ／（Ｎａ＋Ｃａ）值在０．２－０．８之间。ＭⅠ位代表八面体配位的阳离子Ｍｇ,Ｆｅ＾２１＋,Ａｌ,Ｆｅ＾３＋,Ａｌ／（Ａｌ＋Ｆｅ＾３＋）〈０．５。已发现绿辉石的空间群有Ｃ２／ｃ,Ｐ２,Ｐ２／ｎ,Ｐ２／ｃ,晶胞参数：ａ０＝９．６００－９．６３０Ａ,ｂ０＝８．７５０－８．８３０Ａ,ｃ０＝５．２３０－５．２９０Ａ,β＝１     

带有preS抗原决定簇的乙肝表面抗原的DNA免疫研究

构建了３种融合了ｐｒｅＳ抗原决定簇的乙肝表面抗原的表达质粒。在ＣＯＳ－Ｍ６细胞中暂时表达的结果显示,在ＣＭＶ启动子转录调控下融合基因表达的蛋白可以有效地分泌至细胞外,并且同时具有ＨＢｓＡｇ,ｐｒｅＳ１和ｐｒｅＳ２抗原性。带有ｐｒｅＳ抗原决定簇顺序的质粒ＤＮＡ直接免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后,能诱发小鼠产生抗Ｓ抗体,抗体滴度高于仅带有Ｓ基因的表达质粒。     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

烟草花叶病毒及番茄花叶病毒弱毒疫苗N14基因组重组体的构建与侵染性分析

用基因交换的方法将烟草花叶病毒普通株（中国分离物,ＴＭＶ－Ｃｖ和番茄花叶病毒弱毒疫苗Ｎ１４基因组的运动蛋白（ＭＰ）、外壳蛋白（ＣＰ）基因编码区和３＇非编码区嵌合于Ｎ１４和ＴＭＶ－ＣＶ ５＇非编码区和复制酶基因的下游,构建重组病毒克隆ｐＴＮ和ｐＮＴ,并进行体外转录和烟草侵染试验结果 ｐＴＮ和 ｐＮＴ体外转录物对烟草均具侵染性：前者感染枯斑三生烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ．Ｓａｍｓｕｎ ＮＮ）,等量感染的枯斑形成数比 ＰＴＭＶ－Ｃｖ少;感染普通烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｈｕａｎｇｍ－ｉａｏｙｕ,黄苗榆品种）,出现典型系统症状,但叶片畸形率较低．后者感染枯斑三生烟,等量感染的枯斑形成数比ｐＮ１４多;感染普通烟仍不出现系统症状．结果表明：重组病毒ＴＮ和ＮＴ仍能在试验用烟草中增殖,前者在普通烟上基本表现为ＴＭＶ－Ｃｖ的强病毒性状,后者在普通烟上表现为Ｎ１４的弱病毒性状; ＴＭＶ－ＣＶ和 Ｎ１４的复制酶与 ＭＰ, ＣＰ和 ３＇非编码区之间为非严紧型连接,两者在类似的各亚基因组之间可进行功能互补．初步推测,Ｎ１４复制酶编码基因的突变区对Ｎ１４的致弱起主要作用;其运动蛋白编码基因的突变区对被侵染烟草     

人神经元电压门控钙通道 γ -3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析,得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在４３５ｂｐ中有７５％同源的ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｗ２９０９５）。在该ＥＳＴ中设计引物与ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式ＰＣＲ和ＲＡＣＥ反应,在人脑前叶皮质ｃＤＮＡ文库和人脑Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得ｃＤＮＡ序列１５４５ｂｐ,其中包含一个９４８ｂｐ的可读框,编码３１５个氨基酸。该可读框经确证命名为ＣＡＣＮＧ３     

表达cryIA/gna双价抗虫基因烟草兼抗棉铃虫和蚜虫

利用人工合成的、密码子优化后的雪花莲凝集素（ＧＮＡ）基因,与人工合成的ＣＦＭ ｃｒｙＩＡ构建了双价抗虫基因植物高效表达载体。通过根癌农杆菌介导转化烟草,获得２８株卡那酶素抗性植株,经ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹检测,证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合,转基因烟草杀棉铃虫试验表明,４０％转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性;Ｂｔ杀虫蛋白ＥＬＩＳＡ检测获得与虫试较一致结果,抗虫性较强株Ｋ１１号ＣｒｙＩ     

维甲酸激活新基因RA28 及其编码蛋白的定位

基因ＲＡ２８是用全反式维甲酸诱导肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２,用消减杂交方法分离得到的一个新的ｃＤＮＡ序列。作为体内报告分子的绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）,在激发光４８８ｎｍ,不加任何底物时,能发出绿色荧光。     

phbB基因在莱茵衣藻中的表达与分子检测

通过构建依赖NADPH的乙酰乙酰CoA还原酶基因(phbB)的衣藻表达载体, 用石英砂VOTEX转化技术, 将phbB基因导入细胞壁缺陷的莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii cc-849)中, 用含有10 μg/mL的Zeomycin的平板培养基进行筛选和实验室保持培养, 得到了表达phbB基因的转基因藻株. PCR和Southern blot结果显示phbB基因已整合到莱茵衣藻基因组中. RT-PCR与DNA杂交的检测结果显示, 导入的phbB基因在衣藻中具有转录活性.