烟草花叶病毒及番茄花叶病毒弱毒疫苗N14基因组重组体的构建与侵染性分析

用基因交换的方法将烟草花叶病毒普通株（中国分离物，ＴＭＶ－Ｃｖ和番茄花叶病毒弱毒疫苗Ｎ１４基因组的运动蛋白（ＭＰ）、外壳蛋白（ＣＰ）基因编码区和３＇非编码区嵌合于Ｎ１４和ＴＭＶ－ＣＶ ５＇非编码区和复制酶基因的下游，构建重组病毒克隆ｐＴＮ和ｐＮＴ，并进行体外转录和烟草侵染试验结果 ｐＴＮ和 ｐＮＴ体外转录物对烟草均具侵染性：前者感染枯斑三生烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ．Ｓａｍｓｕｎ ＮＮ），等量感染的枯斑形成数比 ＰＴＭＶ－Ｃｖ少；感染普通烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｈｕａｎｇｍ－ｉａｏｙｕ，黄苗榆品种），出现典型系统症状，但叶片畸形率较低．后者感染枯斑三生烟，等量感染的枯斑形成数比ｐＮ１４多；感染普通烟仍不出现系统症状．结果表明：重组病毒ＴＮ和ＮＴ仍能在试验用烟草中增殖，前者在普通烟上基本表现为ＴＭＶ－Ｃｖ的强病毒性状，后者在普通烟上表现为Ｎ１４的弱病毒性状； ＴＭＶ－ＣＶ和 Ｎ１４的复制酶与 ＭＰ， ＣＰ和 ３＇非编码区之间为非严紧型连接，两者在类似的各亚基因组之间可进行功能互补．初步推测，Ｎ１４复制酶编码基因的突变区对Ｎ１４的致弱起主要作用；其运动蛋白编码基因的突变区对被侵染烟草     

利用烟草花叶病毒载体系统在烟草中表达丙型肝炎病毒的核心抗原

烟草花叶病毒能在侵染植物细胞中大量积累，具有作业表达载体的潜力，本研究建立了一种新的ＴＭＶ互补表达系统。ＴＭＶ外壳蛋白缺失的突变体ＴＳＨｃ带有分泌型丙型肝炎病毒的核心抗原基因，为体ＴＳＢＤ是ＴＭＶ复制酶缺失突变体，它们共同接种烟草之后因功能上互补而产生系统侵染。     

白鲫鱼金属硫蛋白全长cDNA: MT-A, MT-B的克隆及其基因分型

应用阻抑性ＲＡＣＥ方法克隆得到白鲫鱼的两个ＭＴ全长ＣＤＮＡ（ＭＴ－Ａ和ＭＴ－Ｂ），它们可读框间的同源性为９２．３％．用封闭式充氮层析系统得到高纯度的两个白鲫鱼肝ＭＴ蛋白，并用Ｅｄｍａｎ法测定了Ｎ－端氨基酸序列．据此证明了ＭＴ－Ｂ是表达ＭＴ－２蛋白的基因，ＭＴ－Ａ是表达ＭＴ－１蛋白的基因．此外测序过程中发现ＭＴ－１的Ｎ－端被封闭，而ＭＴ－２则是非封闭的，这提示它们在转录及翻译后调控机制的不同．白鲫鱼ＭＴ两基因的核酸序列和尾部非翻译区长度的差异（ＭＴ－Ａ约１５０ ｈｐ， ＭＴ－Ｂ约３６０ ｂｐ），以及两 ＭＴ蛋白亚型的Ｎ－端封闭情况的不同，都为解释它们在组织中分布及其功能的差异性提供了线索．     

白鲫鱼金属硫蛋白全长cDNA: MT-A, MT-B的克隆及其基因分型

应用阻抑性ＲＡＣＥ方法克隆得到白鲫鱼的两个ＭＴ全长ｃＤＮＡ（ＭＴ－Ａ和ＭＴ－Ｂ），它们可读框间的同源性为９２．３％，用封闭式充氮层析系统得到高纯度的两个白鲫鱼肝ＭＴ蛋白，并用Ｅｄｍａｎ法测定了Ｎ－端氨基酸序列。据此证明了ＭＴ－Ｂ是表达ＭＴ－２蛋白的基因，ＭＴ－Ａ是表达ＭＴ－１蛋白的基因。此外测序过程中发现ＭＴ－１的Ｎ－端被封闭，而ＭＴ－２则是非封闭的。这提示它们在转录及翻译后调控机制的不同。白鲫鱼     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法，扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因，将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上，构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示，经ＩＰＴＧ诱导，７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原，免疫家兔，首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

CD2胞内区结合蛋白的分子克隆与鉴定

为了探讨ＣＤ２分子的信号传递功能，以编码ＣＤ２胞内区（Ｔｈ４２１１－Ｇｌｎ３３６）肽段的ｃＤＮＡ为“钓饵”，采用酵母双杂交系统从激活的人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中筛选与之相互作用蛋白ｃＤＮＡ序列，并采用免疫共沉淀法鉴定该蛋白在体内ＣＤ２胞内区结合的特异性，克隆并鉴定了一个与ＣＤ２胞内区特异性结合的胸内蛋白分子与ｖ－ｆｏｓ转化效应蛋白（Ｆｔｅ－ｌ）同源，Ｆｔｅ－１参与细胞转化、生长、蛋白合成及向线粒体     

TMV-RNA 非翻译区对外源基因在整体植物中表达水平的影响

利用ＧＵＳ基因及ＴＭＶ－ＲＮＡ非翻译区序列构建了４种ＧＵＳ基因的植物表达载体，即ｐＢＧ４３７，ｐＢＧ４３８，ｐＢＧ４４０和ｐＢＧ４４０△ＮＯＳ。在这４种表达载体中带双增强子的３５Ｓ启动子的下游分别由ＧＵＳ－ＮＯＳ，Ω－ＧＵＳ－ＮＯＳ，Ω－ＧＵＳ－３’ＵＴＲ－ＮＯＳ和Ω－ＧＵＳ－３’ＵＴＲ组成４个不同的表达框架。转基因烟草ＧＵＳ活性检测表明，转ＰＢＧ４４０植株的ＧＵＳ活性是转ｐＢＧ４３７的５倍，是转     

genistein抑制人TNF-α诱导的猪内皮细胞对人单核细胞和自然杀伤细胞的黏附

研究了蛋白质酷氨酸磷酸化在ｈＴＮＦ－α诱导猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）黏附分子Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）和血管细胞黏附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达以及在增强人外周血单核细胞（ＰＢＭｏ）和自然杀伤细胞（ＰＢＮＫ）黏附中的作用，以选择性的蛋白质酷氨酸激酶（ＰＴＫｓ）抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ预处理ＰＡＥＣ，剂量依赖性也抑制了ｈＴＮＦ－α增强的ＰＡＥＣ对ＰＢＭｏ和ＰＢＮＫ的黏附。这种抑制作用发生在     

棉纤维相关cDNA的克隆及其在4个纤维突变体中的结构变异

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从陆地棉遗传标准系“ＴＭ－１”的纤维细胞ＲＮＡ中克隆了一种纤维细胞优势表达的ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡ，记为ＴＭ－Ｅ６基因），该基因不含内含子，可读框长为７７１ｂｐ，可编码２４６个氨基酸的多肽。从４个纤维突变体中分别克隆同源性基因，并与野生型“ＴＭ－１”的ＴＭ－Ｅ６基因进行了同源性分析，发现纤维突变体不但在基因结构而且在密码组成上有明显变异。在距转录起始位点的第２７９碱基对处有ＧＧＣＴＣ     

CD2胞内区结合蛋白的分子克隆与鉴定

为了探讨 ＣＤ２分子的信号传递功能，以编码ＣＤ２胞内区（Ｔｈｒ２１１－Ｇ１ｎ３３６）肽段的ｃＤＮＡ为“钓饵”，采用酵母双杂交系统从激活的人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中筛选与之相互作用蛋白的ｃＤＮＡ序列．并采用免疫共沉淀法鉴定该蛋白在体内与ＣＤ２胞内区结合的特异性．克隆并鉴定了一个与ＣＤ２胞内区特异性结合的胞内蛋白分子，与ｖ－ｆｏｓ转化效应蛋白（Ｆｔｅ－１）同源 Ｆｔｅ－１参与细胞转化、生长、蛋白合成及向线粒体转运蛋白质．蛋白数据库检索表明，Ｆｔｅ－１具有蛋白激酶ＰＫＣ的结合与作用位点，提示Ｆｔｅ－１参与ＣＤ２分子介导的信号传递     

人外周血单个核细胞不同亚群对猪内皮细胞的粘附作用

细胞介导的免疫应答是异种器官移面临的主要障碍，细胞粘附是细胞间相互识别的第一步。采用流式细胞术粘附测定法研究了人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中单核细胞（Ｍｏ）、自然杀伤细胞（ＮＫ）和Ｔ淋巴细胞（Ｔ）对猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）粘附的差异性，以及人细胞因子γ－干扰素或／和肿瘤坏死因子－α（ｈＴＮＦ－α）预刺激ＰＡＥＣ２４ｈ对ＰＢＭＣ不同亚群粘附的影响。ＰＢＭＣ不同亚群对ＰＡＥＣ粘附能力大小以Ｍｏ，     

导致田间烟草曲叶病的又一病毒(非中国烟草曲叶病毒)

对病毒分离物ＤＮＡ序列分析的结构表明，除曾报道的中国烟草曲叶病毒，还存在另一种能引起我国广西地区烟草曲叶病的双生病毒。该病毒ＤＮＡ－Ａ由２７３４个核苷酸组成，与ＴｂＬＣＶ－ＣＨＩ的已知的部分序列不同。其大基因间隔区（ＬＩＲ）长２６９ｎｔ，病毒链有两个ＯＲＦ：ＡＶ１（１１５ａａ）和ＡＶ２（外壳蛋白基因，２５６ａａ）；病毒互补链有４个ＯＲＦ：ＡＣ１（复制酶基因，３６１ａａ）、ＡＣ２（反式激活蛋白，１３     

棉花曲叶病毒外壳蛋白基因启动子不是组织特异表达的启动子

双生病毒是一种单链ＤＮＡ病毒，来自番茄金色花叶病毒（ＴＧＭＶ）的资料表明，其外壳蛋白基因（ｃｐ）启动子在韧皮部特异表达，对新近发现并鉴定的棉花曲叶病毒（ＣＬＣｕＶ）ｃｐ启动子的研究表明，它不是韧皮部特异表达的启动子，该启动子驱动的ｇｕｓ基因表达活笥不仅存在于韧皮部，而且出现在叶肉组织和根尖分生组织中，瞬时表达研究表明，ＡＣ２激活后的ｃｐ启动子在叶肉及叶脉组织均有表达活性。     

一个猪免疫球蛋白 IgG H 链基因的克隆、序列分析及表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从猪脾脏中分离到于段１４２５ｂｐ的ＤＮＡ片段，该片段编码免疫球蛋白基因。经全序列分析证明此片段与前人报道的序列有较高同源性，其Ｃ区属于猪Ｉｇγ链基因亚类３。用ＥｃｏＲＩ和ＮｓｉＩ切点将该片段切焉插入ｐＥＴ－３ｂ（ＮＳＥＢ）（－＿中，表达出约５２ｋｕ的蛋白质，表达量约为２１％。     

人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响

用凝胶迁移改变实验研究了人δ珠蛋白基因启动子区－６４Ｃ→Ｔ点突变对ＤＮＡ结合蛋白的影响,人工合成两条３６ｂｐ该基因启动子区－８３－－４８ｂｐ之间的片段ＷＯＧ和ＭＯＧ,ＷＯＧ含有野生型“ＣＡＡＴ样盒”以及,ＭＯＧ含有变异型“ＣＡＡＴ样盒”。结果表明：（１）在红系细胞ＭＥＬ,ｋ５６２以及经Ｈｅｍｉｎ诱导的ｋ５６２细胞中,ＭＧ对ＣＣＡＡＴ结合蛋白和ＧＡＴＡ－１的要和力显著增加;（２）经Ｈｅｍｉｎ诱导的ｋ     

VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

ＶＫ３可诱导烟草细胞的凋亡，表现为：染化体凝集，凋亡小体形成，ＤＮＡ末端断裂、降解形成梯状电泳，此过程伴随特异核酸酶的激活，其活性依赖于Ｃａ＾２＋，Ｍｇ＾２＋，可被Ｚｎ＾２＋和ＥＤＴＡ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ）抑制。ＤＮＡ降解可被ＤＥＶＤ（Ａｃ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ａｌｄｅｈｙｄｅ）抑制。核纤层蛋白降解为３５ｋｕ片段，ＤＥＶＤ，ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔ     

EPO激活HEL细胞内CREB转录因子

ＣＲＥＢ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｌｔｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）是一种细胞核内转录因子，激活的ＣＲＥＢ能与特异调控元件ＣＲＥ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ）结合研究结果显示，ＥＰＯ（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｎｔｉｎ）诱导ＨＥＬ细胞（ＵＭＡＮＥＲＹＴＨＲＯＬＥＵＫＥＭＩＡＣＥＬＬ）２０ｍｉｎ后分子筛的ＨＥＬ细胞核内ＣＲＥＢ的１３３位丝氨酸残基被磷酸化，并具有转录因子功能，用１３     

人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

通过筛选人胎儿脑ｃＤＮＡ文库，克隆了编码一个新的ＲＮＡ结合蛋白的人ｃＤＮＡ，命名为ＧＲＹ－ＲＢＰ，人ＧＲＹ－ＲＢＰ ｃＤＮＡ的长度为２９３２ｂｐ，编码一个具６２３个氨基酸，分子量为６９．６ｋｕ的ＲＮＡ结合蛋白。ＧＲＹ－ＲＢＰ蛋白含有３个ＲＮＡ识别基序（ＲＮＡ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ，ＲＲＭｓ）和一个富含甘氨酸（Ｇ）、精氨酸（Ｒ）、酷氨酸（Ｙ）的羧基端，经数据库比较发现该蛋白与许多ＲＲ     

衣藻叶绿体表达体系的建立

构建了甲型肝炎病毒ＶＰ３Ｐ１区和丙型肝炎病毒Ｃ区融合抗原基因的衣藻叶绿体转化载体ｐＡＣⅢ，并用基因枪法将其导入衣藻叶绿体内，转化子通过抗性培养和暗培养筛选，经ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ，Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定，证实融合抗原基因已整合于衣藻叶绿体基因组中的ｃｈｌＬ结构基因位置，并在衣藻叶绿体本身的双启动子５’ｃｈｌＬ－５‘ａｔｐＡ调控下，得     

血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应

ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验，测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ，ＰＦ４（５８－７０），ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长，并有明显的剂量依赖关系；非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移；显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成；上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长，１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的，ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．