用低能氩离子束介导将水稻几丁质酶基因导入小麦

用低能氩离子束介导将构建的ｐＣＡＭＢＩＡ１３０８质粒载体上携带的几丁质酶基因（ＲＣＨ８）导入３个小麦栽培品种扬麦１５８，皖９２１０，皖麦３２号的成熟胚细胞，来自成熟胚的初生愈伤组织转Ｈｍ浓度为１０－２０ｍｇ／Ｌ潮霉素（ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ，Ｈｍ）的培养的筛选培养，获得的抗性伤组织转入Ｈｍ浓度为１０－２０ｍｇ／Ｌ的培养基上进行分化培养，３个小麦品种都获得了再生植株，再生苗ＰＣＲ和ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅ     

P15^INK4b／MTS2对人肝癌细胞增殖的影响

利用自行构建的稳定高表达Ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ的人肝癌细胞，研究了抑癌基因Ｐ１５在细胞增殖中的作用。首先将抑癌基因Ｐ１５的ｃＤＮＡ构建到高效真核表达的质粒载体ＰＸＪ４１－ｎｅｏ中的ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ位点，构建成Ｐ１５真核表达质粒ＰＸＪＰ１５。通过脂质体法将ＰＸＪＰ１５质粒转梁人肝癌细胞ＸｈｏＩ位点，构建成Ｐ１５真核表达质粘ＰＸＪＰ１５。通过脂质体法将ＰＸＪＰ１５质粒转染人肝癌细胞ＸｈｏＩ位点，构建成Ｐ     

P15INK4b/MTS2对人肝癌细胞增殖的影响及其机理的初步分析

利用自行构建的稳定高表达Ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ的人肝癌细胞，研究了抑癌基因Ｐ１５在细胞增殖中的作用．首先将抑癌基因 Ｐ１５的 ｃＤＮＡ构建到高效真核表达的质粒载体 ｐＸＪ４１－ｎｅｏ中的 ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ位点，构建成 Ｐ１５真核表达质粒 ｐＸＪＰ１５．通过脂质体法将 ｐＸＪＰ１５质粒转染人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１，进一步用 Ｇ－４１８筛选，获得了稳定高表达Ｐ１５的人肝癌细胞模型ＳＨＴ及相应的表达空载体的对照细胞模型ＳＶＸＪ．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ，Ｗｅｓｔｅｒｎ分子杂交分析，表明ＳＨＴ细胞中Ｐ１５基因表达和蛋白水平都明显高于对照组细胞，证实成功地建立了Ｐ１５高表达的人肝癌细胞模型，与对照组相比，Ｐ１５高表达的ＳＨＴ１细胞的增殖受到抑制，流式细胞光度术和ＭＩ值测定表明Ｐ１５阻抑细胞由Ｇ１期向Ｓ期和由Ｇ２期向Ｍ期的转换．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析结果表明，癌基因ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ的蛋白水平表达下降可能是Ｐ１５抑制细胞增殖的分子机理之一。     

去甲肾上腺素对不同初始表达水平α1B-肾上腺素受体表达的调节

选用α１Ｂ-肾上腺素受体（α１Ｂ－ＡＲ）密度分别为（６３３６±９１３）和（７７３±１６４）ｆｍｏｌ·ｍｇ－１的两株克隆ＨＥＫ２９３细胞，分别用高表达和低表达α１Ｂ-ＡＲ表示，比较去甲肾上腺素（ＮＥ）持续作用下不同初始表达水平的α１Ｂ－ＡＲ发生密度改变的差别．结果显示： １０μｍｏｌ·Ｌ－１ＮＥ持续作用４８ｈ可使高表达以α１Ｂ－ＡＲ的密度发生下调，却可使低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度发生上调．蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＲＯ－３１－８２２０或Ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ　Ｃ可消除ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，但对低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度上调无影响．ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ不仅可模拟ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，而且使低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度也发生下调．肌浆网／内质网钙泵抑制剂ＣＰＡ和内钙螯合剂ＢＡＰＴＡ－ＡＭ不影响ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，但可部分抑制低表达α１Ｂ－ＡＲ的上调．以上结果提示，ＮＥ持续作用可对初始表达水平不同的α１Ｂ－ＡＲ密度产生不同方向的调节作用，作用机制亦不尽相同．     

EPO激活HEL细胞内CREB转录因子

ＣＲＥＢ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｌｔｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）是一种细胞核内转录因子，激活的ＣＲＥＢ能与特异调控元件ＣＲＥ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ）结合研究结果显示，ＥＰＯ（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｎｔｉｎ）诱导ＨＥＬ细胞（ＵＭＡＮＥＲＹＴＨＲＯＬＥＵＫＥＭＩＡＣＥＬＬ）２０ｍｉｎ后分子筛的ＨＥＬ细胞核内ＣＲＥＢ的１３３位丝氨酸残基被磷酸化，并具有转录因子功能，用１３     

带有preS抗原决定簇的乙肝表面抗原的DNA免疫研究

构建了３种融合了ｐｒｅＳ抗原决定簇的乙肝表面抗原的表达质粒。在ＣＯＳ－Ｍ６细胞中暂时表达的结果显示,在ＣＭＶ启动子转录调控下融合基因表达的蛋白可以有效地分泌至细胞外,并且同时具有ＨＢｓＡｇ,ｐｒｅＳ１和ｐｒｅＳ２抗原性。带有ｐｒｅＳ抗原决定簇顺序的质粒ＤＮＡ直接免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后,能诱发小鼠产生抗Ｓ抗体,抗体滴度高于仅带有Ｓ基因的表达质粒。     

多菌灵抗性基因在木霉菌中的转化方法

通过基因工程手段,对多菌灵抗性基因转化到木霉菌中的方法进行了研究比较,发现转化后杀菌剂的筛选时间对转化木霉的获得具有重要影响。通过此方法得到的抗多菌灵木霉转化子能在含１５０μｇ／ｍＬ多菌灵的培养基上正常和平共处,在非选择性培养基上连续转接１０代,其抗药性稳定不变。     

人外周血单个核细胞不同亚群对猪内皮细胞的粘附作用

细胞介导的免疫应答是异种器官移面临的主要障碍，细胞粘附是细胞间相互识别的第一步。采用流式细胞术粘附测定法研究了人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中单核细胞（Ｍｏ）、自然杀伤细胞（ＮＫ）和Ｔ淋巴细胞（Ｔ）对猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）粘附的差异性，以及人细胞因子γ－干扰素或／和肿瘤坏死因子－α（ｈＴＮＦ－α）预刺激ＰＡＥＣ２４ｈ对ＰＢＭＣ不同亚群粘附的影响。ＰＢＭＣ不同亚群对ＰＡＥＣ粘附能力大小以Ｍｏ，     

一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法

利用２型腺病毒伴随病毒（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ２，ＡＡＶ－２）能够抵抗氯仿的特性，采用“氯仿处理－ＰＥＧ／ＮａＣｌ沉淀氯仿抽提”３个步骤分离，浓缩和纯化重组腺病毒伴随病毒（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ，ｒＡＡＶ），整个纯化过程可在４ｈ内完成，最终从５个转瓶生长的４＊１０＾９个载体生产细胞中可得到５＊１０＾３病毒颗粒／ｍＬ，ＳＤ     

玉米自交系P9-10遗传转化体系的建立

在Ｎ６培养基中添加１０＾－４ｍｏｌ．Ｌ＾－１ＡｇＮＯ３可促进玉米Ｐ９－１０自交系幼胚诱导产生Ｉ型胚性愈伤组织,把这些胚性愈伤组织经高渗处理后作为受体,用基因枪转化含Ｂｔ基因的ｐＭＧ６质粒,通过选择压递增式筛选,得到了１４个抗性克隆。抗性克隆３种不同的培养基中共诱导出１０个胚状体,经分化得到１０个再生植株累ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析证实有８个再生植株的基因组中整合有Ｂｔ基因。ＥＬＩＳＡ分析结果     

缺铁诱导玉米根cDNA文库的构建及铁胁迫基因(fdr3)的筛选和鉴定

为了分离铁缺乏相关基因，构建了一个滴度为４．５ｘ１０~５ｐｆｕ／μｇ的λＺＡＰ表达型缺铁胁迫玉米根 ｃＤＮＡ文库．通过差异筛选得到 ６个阳性克隆．经 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ验证在缺铁条件下加强表达的有ｆｄｒ３（Ｆｅ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｒｅｌａｔｅｄ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｅ。     

genistein抑制人TNF-α诱导的猪内皮细胞对人单核细胞和自然杀伤细胞的黏附

研究了蛋白质酷氨酸磷酸化在ｈＴＮＦ－α诱导猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）黏附分子Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）和血管细胞黏附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达以及在增强人外周血单核细胞（ＰＢＭｏ）和自然杀伤细胞（ＰＢＮＫ）黏附中的作用，以选择性的蛋白质酷氨酸激酶（ＰＴＫｓ）抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ预处理ＰＡＥＣ，剂量依赖性也抑制了ｈＴＮＦ－α增强的ＰＡＥＣ对ＰＢＭｏ和ＰＢＮＫ的黏附。这种抑制作用发生在     

神经节苷脂可延缓培养的神经细胞内脂褐素的积累

我们以前的工作曾报道[1,2],外源性神经节苷脂可改善老龄鼠的学习和记忆功能.本工作则试图在体外培养条件下,来探讨神经节苷脂及其主要成分ＧＭ1的抗神经细胞老化作用.实验采用分化的ＮＧ108＿15杂交细胞.将对数生长期的未分化细胞接种于直径为35ｍｍ的培养皿中分化培养,细胞密度为2×105/皿,分化培养液为含95%ＤＭＥＭ(Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅａｇｌｅｍｅｄｉｕｍ),5%小牛血清以及1ｍｍｏｌ/ＬｄＢｃＡＭＰ,50μｇ/ｍＬ链霉素和50Ｕ/ｍＬ青霉素.实验分3组进行,对照组只加2ｍＬ分化培养液,ＧＭ1组是在分化培养液中加25μｇ…     

携带人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因重组腺相关病毒的大量制备与体内外表达研究

构建了一系列携带有人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因（ｈⅨＲ３３８Ａ）及不同调控元件的腺相关病毒 表达载体，并经体外转导不同的细胞系，筛选、优化，挑取高表达质粒及其转导稳定细胞克隆，然后， 以一个携带有腺相关病毒包装蛋白的ｒＡＡＶ/ＨＳＶ杂合病毒包装系统介导进行重组腺相关病毒的大量制 备，建立了可进行产业化制备的技术路线及高滴度、大量制备重组腺相关病毒的技术方法，所获得的重 组病毒滴度达 １．２５ × １０１２病毒颗粒／ｍＬ，然后，利用这一重组病毒，对ｒｈＦⅨＲ３３８Ａ进行离体及在体表达， 获得了 ｒｈＦⅨＲ３３８Ａ在肌细胞系 Ｃ２Ｃ１２及血友病 Ｂ小鼠体内的高效表达，表达峰值分别达（２５５１．３２± ９２．１４）ｎｇ·（１０６细胞）－１·（２４ｈ）－１及４６３．２８ｎｇ·ｍＬ－１，与野生型Ⅸ因子的表达水平（２５６５．７６±６４．３６）ｎｇ· （１０６细胞）－１·（２４ ｈ）－１及４５３．９２ ｎｇ· ｍＬ－１无显著性差异．然而，其凝血活性却成倍增加，约为后者的 ２．４６倍.．将人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因引入血友病 Ｂ基因治疗研究之中，同时，探讨了一个新的包装 系统──ｒＡＡＶ／ＨＳＶ杂合病毒包装系统──在重组ＡＡＶ载体大量制备中的应用     

沙冬青抗冻蛋白的分离、纯化及其理化特性分析

用ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ－５２，丙烯葡聚糖Ｓ３００柱层析，热处理及等速电泳技术分离纯化了热稳定的冬季沙冬青叶片抗冻蛋白（ＡＦＰ），获得了电泳纯的分子量约为５０ｋｕ的ＡＦＰ，经Ｓｈｉｆｆ试剂检验为含糖的ＡＦＧＰ，显微镜观察冰点熔点差异技术和差示扫描量热法（ＤＳＣ）测定了该蛋白热滞活性（ＴＨＡ），用ＤＳＣ测定ＴＨＡ在５ｍｇ／ｍＬ时约为０．３５℃．圆二色性（ＣＤ）分析表明，该ＡＦＧＰ中ａ－螺旋为１１％，反     

氮化钼钝化层中钼的价态特征及钼(5 )的发现

以ＭｏＯ_３为前身化合物，在Ｈ_２／Ｎ_２混合气氛中利用程序升温反应方法制备了钝化后比表面为 １１５ ｍ~２· ｇ~（－１）的γ－Ｍｏ_２Ｎ粉末催化剂．在低温条件下，该催化剂显示出良好的 ＣＯ氧化反应活性．借助Ｘ射线电子能谱（ＸＰＳ）、电子自旋共振（ＥＰＲ）及激光Ｒａｍａｎ光谱（ＬＲＳ）技术对氮化铝的表面钝化层进行了表征，结果表明其中钼以混合价态存在并得到了Ｍｏ~（５＋）（ｇ＝１．９３２，ｇ／／＝１．８９２）存在的证据，同时还发现了超氧负离子Ｏ~－（２_）（ｇ＝２．００１，Ｒａｍａｎ吸收峰１１２４ Ｃｍ~（－１））的存在．研究表明，它的产生与 ＭＯ~（５＋）／ＭＯ~（４＋）氧化还原电对的转换存在着协同性， Ｏ~－（_２）可能是 ＣＯ氧化反应的活性氧种．     

用微阵列研究鼻咽癌与正常鼻咽组织基因表达谱

用α－＾３２Ｐ－ｄＣＴＰ逆转录分别标记成人正常鼻咽和鼻咽癌组织总ＲＮＡ５μｇ，将合成的ｃＤＮＡ探针与具有５１８４个点阵的高密度ｃＤＮＡ微阵列杂交，用分析两者表达谱差异结构发现，鼻咽癌组织中，密度值在２００以上有１８７个ＥＳＴ，咎咽组织中３０７个ＥＳＴ，而３８个ＥＳＴ在鼻咽组织高表达但在鼻咽癌组织低表达。     

表达cryIA/gna双价抗虫基因烟草兼抗棉铃虫和蚜虫

利用人工合成的、密码子优化后的雪花莲凝集素（ＧＮＡ）基因，与人工合成的ＣＦＭ ｃｒｙＩＡ构建了双价抗虫基因植物高效表达载体。通过根癌农杆菌介导转化烟草，获得２８株卡那酶素抗性植株，经ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹检测，证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合，转基因烟草杀棉铃虫试验表明，４０％转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性；Ｂｔ杀虫蛋白ＥＬＩＳＡ检测获得与虫试较一致结果，抗虫性较强株Ｋ１１号ＣｒｙＩ     

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因克隆及其原核表达载体构建、表达

通过ＰＣＲ方法克隆出大肠杆菌株Ｈ－３０的胞嘧啶脱氨酶基因，并将其起始密码子ＧＴＧ突变为ＡＴＧ，构建了ＣＤ基因的原核重组表达载体ＰＢＶ２２０－ＣＤ，通过测定胞嘧啶脱氨酶活性筛选出ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０ＣＤ－１１５－氟胸嘧啶对ＣＤ活性克隆有杀灭毒性，ＤＮＡ序列分析显示ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０－ＣＤ－１１较基因文库中所报道的ＣＤ基因存在１６个位点碱基改变，引起肽链中氨基酸改变的位点有５人。     

Ba2ErCl7晶体的生长、结构和激光上转换机制

报道了新型上转换材料Ｂａ２ＥｒＣｌ７的单晶生长方法。用“一步合成法”直接将Ｅｒ２Ｏ３，ＢａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ和ＮＨ４Ｃｌ合成Ｂａ２ＥｒＣｌ７多晶料，并分别用提拉法和坩埚下降法得到４ｍｍ＊８ｍｍ＊１５ｍｍ的优质大块单晶；用８０３ｎｍ的ＬＤ泵浦时有强烈的黄绿光发射；