双向电泳检测技术综述

目前蛋白质组学（proteome）正在成为分析化学的研究热点，双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）以其高通量和极高的分辨率成为蛋白质组学的核心技术，本文综述了不同类型的双向电泳检测技术的原理，比较分析了各种技术的优势和不足，并对双向电泳技术在蛋白质组学中今后的发展作了展望．     

蛋白质组技术研究进展

探讨了蛋白质组的由来，分析了蛋白质组学研究的特点和内容。综述了研究蛋白质组的技术和方法．其主要包括：双向电泳技术、质谱分析、生物信息学等，并对蛋白质组研究的前景作出了展望。     

正常与性早熟河蟹视神经节蛋白的二维电泳初步分析

利用双向电泳技术比较正常和性早熟河蟹视神经节蛋白的表达差异,旨在探索蛋白质组学技术在甲壳动物中尤其是河蟹的性早熟研究当中的应用.结果发现,明显差异的蛋白点共24个,为以后通过蛋白质组学手段筛选出真正影响性早熟发生的蛋白质或酶奠定了基础.     

蛋白质组学研究的有效工具——双向电泳鉴定技术

在当今生命科学研究的热门领域蛋白质组学研究中,双向电泳技术是分离检测细胞、细胞系、器官和组织的总蛋白质组的最有效的方法.双向电泳技术是根据蛋白质等电点和分子量两个相互独立的参数,在相互垂直的两个方向进行二次电泳的过程,其主要步骤包括样品制备、电泳、凝胶染色和图像分析.本文就双向电泳的步骤、技术特点、缺陷和发展前景进行简述.     

基于双向电泳-MALDI质谱分析的蛋白组学本科教学实验

蛋白质组学已成为研究生物学过程及直接描述细胞和组织变化的有力手段。双向电泳结合生物质谱技术是蛋白质组学研究中的最常用的蛋白质分离和鉴定技术之一。该项技术是生物技术专业本科生必须掌握的一门实验技术。通过双向电泳-MALDI质谱分析的蛋白组学本科教学实验的设计,建立了完善的本科教学实验方案,让大型仪器全面支撑本科教学实验,进一步提高了大型仪器的利用率。     

蚯蚓蛋白质组学研究中3种总蛋白提取方法的比较

双向电泳(2-DE)技术在现阶段的蛋白质组学研究当中,由于其价格相对便宜,仪器设备相对简单而被广泛应用.合适的总蛋白质样品制备方法,可以提高双向电泳蛋白点的数目和分辨率以保证蛋白质组信息的完整性,是整个实验的关键.蚯蚓作为土壤污染和土壤生态毒理学研究的重要生物,其总蛋白质提取的方法学研究还不完善.通过对已发表的文献中的蛋白提取方法进行筛选和优化,利用SDS-PAGE电泳和双向电泳的结果,对三氯乙酸-丙酮沉淀法、裂解液法和酚抽提法对蚯蚓总蛋白提取结果进行了评价,建立了适合蚯蚓蛋白质组学研究的总蛋白样品制备方法.     

虎纹蛙蝌蚪与幼蛙肌肉蛋白质的双向电泳图谱对比分析

双向电泳技术是蛋白质组研究的核心技术之一。通过对虎纹蛙蝌蚪与幼蛙的肌肉进行双向电泳并对其图谱对比分析,为其今后进行蛋白质组学的研究打下基础。     

用蛋白质组学技术分析家兔MODS血清蛋白质组的方法初探

应用蛋白质组学技术比较家兔肠源性多器官功能障碍综合征(MODS)模型复制前后的血清蛋白质组表达差异,探索该技术在家兔肠源性MODS研究中应用的可能性.取家兔肠源性MODS模型复制前后血清各50 μL,去除高丰度蛋白后用丙酮将洗脱液中的蛋白沉淀,加入水化液使沉淀中的蛋白充分裂解,离心后取上清液上样.双向电泳后银染,用PDQuest7.4软件进行胶图分析,比较两组血清双向电泳图谱中的差异蛋白点.家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好,可以满足进一步研究的需要.其中11个点在复制MODS后表达上调,8个点下调.复制家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱存在显著差异;初步建立的家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

人表皮组织蛋白质组双向电泳技术的建立

目的:建立和优化人表皮组织蛋白质组双向电泳技术,为后续的皮肤蛋白质组学研究奠定基础.方法:组织匀浆法制备表皮组织总蛋白,采用固相pH 梯度胶条进行双向电泳,凝胶银染后用PDQuest 7.4软件对电泳图谱进行分析.结果:人表皮组织蛋白质组在7cm pH 5～8 IPG胶条的最佳上样量为200 靏,平均蛋白斑点数为414±19,平均匹配斑点数为346±31,匹配率达83.6%.结论:通过优化双向电泳条件,获得了分辨率高、重复性好的人表皮组织蛋白质组双向电泳图谱.     

双向电泳技术在昆虫研究中的应用

随着生命科学进入后基因组学研究时代,蛋白质组学成为其研究热点.双向电泳技术(Two-dimensional electro-phoresis,2-DE)凭借其高灵敏度,高分辨率以及能将数千种蛋白质同时分离等优点,成为蛋白质组学的核心技术之一,在生命科学研究中发挥着不可替代的作用.近年来,随着黑腹果蝇(Drosophil...     

Global landscape of protein complexes in the yeast Saccharomyces cerevisiae

Identification of protein-protein interactions often provides insight into protein function, and many cellular processes are performed by stable protein complexes. We used tandem affinity purification to process 4,562 different tagged proteins of the yeast Saccharomyces cerevisiae. Each preparation was analysed by both matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry and liquid chromatography tandem mass spectrometry to increase coverage and accuracy. Machine learning was used to integrate the mass spectrometry scores and assign probabilities to the protein-protein interactions. Among 4,087 different proteins identified with high confidence by mass spectrometry from 2,357 successful purifications, our core data set (median precision of 0.69) comprises 7,123 protein-protein interactions involving 2,708 proteins. A Markov clustering algorithm organized these interactions into 547 protein complexes averaging 4.9 subunits per complex, about half of them absent from the MIPS database, as well as 429 additional interactions between pairs of complexes. The data (all of which are available online) will help future studies on individual proteins as well as functional genomics and systems biology.     

利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中 的差异表达蛋白质

比较了牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异; 应用双向电泳-质谱技术, 对牦牛和犏牛的睾丸组织中差异蛋白质进行分离和鉴定; 对获得的22个差异表达点进行质谱鉴定和数据库搜索, 获得了19个蛋白质, 其中有3种分子伴侣可能与犏牛雄性不育有关; 研究结果表明, 牦牛和犏牛睾丸组织中存在差异表达蛋白, 并可利用双向凝胶电泳进行分离, 为进一步分析犏牛雄性不育的原因提供了线索.     

用双向电泳-质谱初步分析大熊猫初乳和常乳中差异表达的乳清蛋白

目的 是分析大熊猫初乳和常乳中差异表达的乳清蛋白.利用双向电泳-质谱技术首次对一只大熊猫产后第1d和第22 d的乳清蛋白进行初步的分离与鉴定,结果成功得到11种差异表达的蛋白质,值得注意的是,其中有3种蛋白质与免疫、抗菌有关,包括抗白细胞蛋白酶、溶菌酶C,C反应蛋白.推测这3种蛋白质可能参与大熊猫乳腺或幼仔的防御功能.研究结果表明,用双向电泳-质谱技术可以分析大熊猫初乳和常乳中的差异表达蛋白质,有助于认识大熊猫乳的组成和功能特性.     

葡萄（Vitis vinifera L．）籽蛋白的生化组成分析

葡萄（Vitis vinifera L．）籽蛋白是葡萄籽的重要组分之一,具有开发成膳食蛋白或功能性蛋白的潜力．在确定葡萄籽各主要成分和金属元素含量的基础上,通过双向电泳结合质谱鉴定手段,确定了葡萄籽蛋白的主要成分为11s球蛋白;通过氨基酸组成检测及与大豆分离蛋白的比较,明确了葡萄籽蛋白的营养价值;最后利用红外光谱分析,对葡萄籽蛋白的二级结构进行了初步分析．研究结果将为葡萄籽蛋白的综合利用及功能性产品的研发提供理论基础．     

COC1/DDP亚细胞中波形纤维蛋白的肽质谱指纹分析

目的寻找与鉴定卵巢癌耐药株中的差异表达蛋白质。方法应用高分辨二维凝胶电泳分离卵巢癌细胞中差异表达的波形纤维蛋白,并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对其进行分析与鉴定。结果获得了分辨率和重复性均较佳的凝胶电泳图谱,图像分析显示波形纤维蛋白表达明显下调。结论与其他方法相比,应用凝胶电泳和生物质谱联用技术分析与鉴定未知蛋白具有简单快捷的特点。     

DNA序列分析

综述了DNA测序技术。对DNA序列分析方法,包括毛细管电泳、阵列毛细管电泳、芯片毛细管电泳、超薄层毛细管电泳、质谱法、原子探针法、杂交法、流动式单分子荧光检测法,作了详细评述。     

利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中的差异表达蛋白质

比较了牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异;应用双向电泳-质谱技术,对牦牛和犏牛的睾丸组织中差异蛋白质进行分离和鉴定;对获得的22个差异表达点进行质谱鉴定和数据库搜索,获得了19个蛋白质,其中有3种分子伴侣可能与犏牛雄性不育有关;研究结果表明,牦牛和犏牛睾丸组织中存在差异表达蛋白,并可利用双向凝胶电泳进行分离,为进一步分析犏牛雄性不育的原因提供了线索.     

Capillary zone electrophoresis-MS

Coupling the separation capabilities of capillary zone electrophoresis with the analytical specificity of mass spectrometry yields a tool for detecting levels of substances down to 10 attomoles.     

质谱技术在蛋白质组学研究中的应用

随着蛋白质组学研究的迅速发展,质谱技术已成为应用于蛋白质组学研究中的强有力工具和核心技术。质谱技术的先进性在于为蛋白质组学研究提供的通量和分子信息。笔者重点概述了基于质谱路线的蛋白质组学研究,介绍了基于质谱的定量蛋白质组学﹑翻译后修饰蛋白质组学、定向蛋白质组学、功能蛋白质组学以及基于串联质谱技术的蛋白质组学数据解析的研究进展。