重组毕赤酵母细胞壁蛋白的抽提和分析

建立稳定有效的细胞壁蛋白(CWPs)抽提方法,是开展毕赤酵母细胞壁蛋白质组学及甲醇代谢调控相关性研究的基础.为此,以具重组非共价结合壁蛋白Flo1p絮凝素的酵母GS115/KFS-CALB、具共价结合壁蛋白α凝集素的酵母GS115/KNS-CALB和具重组共价结合壁蛋白Pir1的酵母GS115/Pir1-CALB为对象,用热十二烷基磺酸钠(SDS)、昆布多糖酶、氢氟酸吡啶和温和碱水解对上述壁蛋白进行抽提,结果表明:3种壁蛋白已成功地展示于毕赤酵母细胞壁的表面;用这3种毕赤酵母锚定蛋白展示脂肪酶,对细胞的生长状况影响不大,而对展示酶的表达量影响较大,GS115/KFS-CALB、GS115/KNS-CALB和GS115/Pir1-CALB的脂肪酶水解比酶活最高达855.02、1239.40和210.47 U/g(以干细胞计);热SDS可有效抽提GS115/KFS-CALB上的Flo1p絮凝素,昆布多糖酶和氢氟酸吡啶可释放GS115/KNS-CALB上的α凝集素,而昆布多糖酶和温和碱可释放GS115/Pir1-CALB上的Pir1.     

碱抽提强化的麦草浆ClO_2漂白及ECF漂白流程

采用常规碱抽提(E)、氧加强的碱抽提(EO)、H2O2强化的碱抽提(EP)、氧和H2O2强化的碱抽提(EOP)对ClO2脱木素(D0)麦草浆进行改性,考查不同碱抽提方式的改性效果在后续漂段(D1)的体现,并就不同无元素氯(ECF)漂白流程(D0ED1、D0P、D0A/QP、D0EP、D0EPD1、D0EPP)进行对比.结果表明:不同碱抽提方式对D0浆木素的改性效果不同,就对后续漂段D1的影响而言,4种不同碱抽提方式下纸浆的可漂性顺序为D0EOPD0EPD0EOD0E;在4种碱抽提方式所对应的D0ED1漂白流程中,D1段ClO2用量的增加对白度的提升是有限的,以0.8%~1.0%为佳;D0EPD1和D0EPP流程漂白效果优于其它流程,采用D0EPD1和D0EPP流程漂后白度可分别达到82.3%ISO和83.8%ISO,均适用于麦草浆短序ECF漂白.     

与光系统Ⅱ颗粒结合的蛋白酶的进一步分析

依次用三种溶液抽提处理菠菜光系统Ⅱ颗粒，离心后分离得到主要含１８ｋＤ，２４ｋＤ和３３ｋＤ水溶性蛋白的三种抽提液，利用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到前两种抽提液中均含蛋白酶。抽提液分别温育时，１８ｋＤ蛋白被降解而产生１７．１ｋＤ，１６ｋｄ，１４．４Ｋｄ．１３．５ｋＤ和１２ｋＤ片段；２４ｋＤ蛋白被孜解成２２ｋＤ，２０ｋＤ和１８ｋＤ。     

碱提法回收猪骨蛋白质的探讨

对碱提法回收猪骨蛋白质工艺参数的研究表明，4种工艺参数对蛋白质得率均有不同程度的影响。其顺序为浸提液pH＞浸提时间＞沉降pH＞浸提温度。碱提法回收猪骨蛋白质的最高得率为25．7％，最佳工艺参数为浸提时间105min，浸提液pH12．0，浸提温度30℃和沉降pH5．0。     

水花微囊藻多糖复合物的提取

研究了热水和碱提取法在不同溶剂体积、不同时间和不同温度条件下,对水花微囊藻多糖提取率的影响．结果表明：藻干重与水体积之比为 １∶１５、１００ ℃、提取６ ｈ 的条件下多糖提取率最高,为３４５．５ ｍ ｇ／ｇ 干藻,为最佳提取条件．在 ３０ ℃、６０ ℃、１００ ℃下以碱抽提,以 ４％ Ｎａ Ｏ Ｈ 浓度下多糖得率最高,分别为９９．５、２７３．２ ｍ ｇ／ｇ 干藻;热水提取效果好于碱提取．用冷水预浸泡结合等电点沉淀的方法脱蛋白对粗提取物进行纯化,结果使提取液中水溶蛋白除去率达 ６３．０％ ．用最佳提取条件获得的多糖溶液,经氯仿脱蛋白,乙醇沉淀得多糖１４．５％ ．     

碱处理对剩余污泥预处理的研究

污泥固体的水解是厌氧消化的限速步骤,污泥预处理的目的就是破坏污泥的结构及细胞壁,使污泥的絮体结构发生变化,细胞内含物溶出,进入水相,加快厌氧消化速率。本文研究了加碱对污泥性质的影响,全面了解剩余污泥减量化过程中细胞物质的释放规律,还对碱预处理方法对污泥的融胞机理进行了分析。结果表明,碱处理效果最好,释放的SCOD最高（937.984mg/L）,处理后污泥液相中蛋白质、总糖、DNA均增加最多。     

博落回生物碱对八种真菌的抑菌作用研究

以20%的甲醇作溶剂,将盐酸血根碱,盐酸小檗碱、博落回碱和博落回总碱配成9600ug/m l的溶液,测定了这四种物质对8种真菌的抑菌效力(抑菌圈直径)及最低抑菌浓度(M IC)。结果表明,这些物质具有不同程度的抗真菌效力,其中盐酸血根碱具有很强的广谱抑菌作用,对木霉、根霉、黄曲霉、黑曲霉、米曲霉、毛霉、酵母的最低抑菌浓度均低于40 ug/m l,具有较好的开发应用前景。     

碱抽提强化的麦草浆二氧化氯漂白及ECF漂白流程研究

摘要：采用四种不同的碱抽提方式对麦草浆二氧化氯漂白(D0)进行强化,考查了不同碱抽提方式的强化效果,并对不同ECF漂白流程进行了对比研究。结果表明：在D0ED1漂白流程中,不同碱抽提方式对D0木素的修饰效果不同,就后续D1漂段而言,四种不同碱抽提模式下纸浆的可漂性顺序为：D0EOP>D0EP>D0EO>D0E。在D0ED1漂白流程中,D1段ClO2对白度的提升是有限的,达到白度极限后再增加ClO2用量对白度提高不明显。本实验条件下D1段ClO2用量以1.0%~1.2%为佳。从D0ED1与D0EP各漂白流程的对比来看,在终段漂白中以P取代D1效果要好,表明H2O2用于终段漂白其效果要好于ClO2。从其它ECF漂白流程的对比来看,D0EPP和D0EOPP流程漂白效果优于其它流程。本实验条件下采用D0EPP和D0EOPP漂白流程,麦草浆漂后白度可分别达到83.8%和85.7%。     

调控酶解底物初始pH制备低聚木糖

研究在木聚糖酶定向酶解纯木聚糖及木聚糖碱抽提液制备功能性低聚木糖时,酸和缓冲溶液调控底物的初始ｐＨ对低聚木糖的影响。结果表明,木聚糖酶在ｐＨ５．０左右的活力最高;酸调控纯木聚糖底物的低聚木糖得率低于缓冲溶液调控的低聚木糖得率,但两者相关不大;而当底物为木聚糖碱抽提液是,由于木素的存在,两种调控方式的低聚木糖得率相差较大,酶解液出现浑浊状态;酸调控纯木聚糖,木聚糖碱抽提液时,低聚木糖得率最高的初始ｐ     

玉米秸杆发酵生产蛋白饲料的研究

利用产生纤维素酶的菌种与不同的酵母菌，使玉米秆转化为具有高蛋白含量和生物活性的蛋白饲料。通过生物糖化、发酵实验，分离出适合玉米秆发酵的菌种，生产出含糖量高的蛋白饲料。结果表明：单株菌种中，用绿色木霉糖化后含糖量可达334．36mg／g，白腐真菌 绿色木霉 黑曲霉等糖化效果最好，糖化后含糖量可达389．56mg／g。从牛胃内含物中分离出的假丝酵母、牛胃白、牛胃红均有较好的产蛋白率，其中以假丝酵母最佳，3种菌有较好的共生性。     

废弃菌体水解液作氮源发酵产腈水合酶的研究

工业生产中微生物细胞在发酵结束后常被作为废弃物丢弃,容易造成环境污染和资源浪费.对废弃细胞进行破壁处理,废弃菌体水解液可替代酵母膏作有机氮源用于发酵产腈水合酶.通过采用超声波、冻融、热碱3种方法破碎细胞,测定水解液中氨基氮含量的高低,确定选择热碱法为最佳细胞破碎方法.通过正交实验选出最优破壁条件为:N aOH加入量5g.L-1,水解温度100℃,水解时间1.5h.在最佳破壁条件下,细胞破碎液中氨基氮含量为24.5 g· L-1.并考察了酵母膏与水解液的不同配比对腈水合酶发酵酶活的影响,确定了酵母膏与废弃菌体水解液的最佳配比为3:2.实验结果表明:利用热碱法处理废弃菌体的水解液作为氮源部分代替酵母膏,发酵酶活为1 063万U·mL-1,而完全利用酵母膏作为氮源的发酵酶活为1 055万U·mL-1.     

川芎超声浸提物的GC-MS分析

采用气相色谱质谱(GC-MS)联用技术对川芎的超声浸提物进行了分析,发现其主要成分为内酯类化合物.样品采用超声波处理后,GC-MS分离出了2种含量相对较低的未见报道的内酯,它们分别占到总内酯质量分数的0.36%和0.31%.浸提溶剂采用了3种(三氯甲烷、石油醚和酸性乙醇),并对3种不同溶剂的浸提物进行分析比较,结果显示用三氯甲烷和石油醚为溶剂可高效提取川芎中挥发性成分,而酸性乙醇提取脂肪酸类物质时优于上述2种溶剂.无论采用哪种溶剂超声浸提,川芎提取物中主要成分为内酯,萜类物质和脂肪酸类居次.     

白花菜子不同溶剂提取物总多酚、总黄酮含量及抗氧化活性测定

测定了白花菜子四种不同溶剂提取物的总多酚含量、总黄酮含量和体外抗氧化活性。以没食子酸为对照品,采用福林-酚试剂法测定白花菜子提取物中总多酚的含量;以芦丁为对照品,采用可见-紫外分光光度法测定白花菜子提取物中总黄酮的含量。通过测定DPPH自由基清除率、氢氧基清除率和还原能力来评价白花菜子提取物的抗氧化活性。在四种白花菜子不同溶剂提取物中,总黄酮含量从高到低的顺序为乙酸乙酯提取物(CAEE)甲醇提取物(CME)石油醚提取物(CPEE)二氯甲烷提取物(CCE);总多酚含量从高到低的顺序为CMECAEECPEECCE。白花菜子提取物各种方法抗氧化活性从高到低的顺序为CMECAEECPEECCE,与总多酚含量顺序一致。结果表明白花菜子乙酸乙酯提取物总黄酮含量最高,白花菜子甲醇提取物总多酚含量最高,且甲醇提取物具有很强的抗氧化活性,可以用作抗氧化药物或食品添加剂,因此有必要对白花菜子的化学成分、体内抗氧化活性和机理进行深一步的研究。     

真菌细胞破壁方法的研究

用4种处理对真菌细胞进行破壁，使其释放出细胞内物质．处理后的菌液用血细胞计数板计数，得到每毫升菌液中的孢子数和菌体碎片数，观察比较机械破碎的效果．以可溶性蛋白为参照，通过蛋白质的SDS-PAGE分析，比较4种处理方法使细胞破壁后释放蛋白质效果的差异．结果表明，方法2的破碎效果和细胞可溶性蛋白质释放效果都较好，是一种首选真菌细胞破壁的方法。     

壮药“国虾薄”（绞股蓝）碱水解产物对A549细胞的抑制活性

本文比较了绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum）碱水解前后的正丁醇提取物对肺癌A549细胞的抑制活性.方法：绞股蓝叶用12倍量的80％乙醇超声提取3h,正丁醇萃取,90 ℃碱水解反应6h,利用HPLC分析方法,分析了绞股蓝碱水解前后的正丁醇提取物中色谱峰的变化,并对它们进行肺癌A549细胞的抑制活性检测.结果发现碱水解使绞股蓝中的成分有转化,而且绞股蓝的碱水解产物对肺癌A549细胞的抑制活性显著增强.从而证实,碱水解可使绞股蓝成分发生转化,并且增强了对肺癌A549细胞的抑制活性,为绞股蓝有效成分的转化提供实验依据.     

α-乙酰乳酸脱羧酶的提取条件与应用研究

从ＢＤ－５菌株中提取α－乙酰乳酸脱羧酶，为提高酶的得率，探讨了破壁方法、除杂蛋白、硫酸铵沉淀提取粗酶等的条件，以及提取过程中酶的损失情况和菌体存放时间对酶活力的影响等。结果表明：该菌株的菌体用超声波破壁、５０％饱和度硫酸铵除杂蛋白，８０％饱和度硫酸铵提取粗酶效果较好，菌体存放时间过长，酶活力明显降低。将用该菌株提取的酶应用于啤酒发酵中，证明有明显的降低双乙酰的效果。     

深绿短肠蕨抗氧化、降糖、抗炎活性研究

取干燥深绿短肠蕨Allantodia viridissima根状茎粉末适量,乙醇回流浸提法得本实验所用样品.采用紫外-可见分光光度法对深绿短肠蕨中多酚含量进行测定;分别对样品的乙醇提取部分(AVH),石油醚萃取物(AVP),乙酸乙酯萃取物(AVE)和正丁醇萃取物(AVB)进行DHHP法和ABTS~+法抗氧化活性研究;采用体外α-葡萄糖苷酶活性抑制模型对其进行降糖活性研究;并采用脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞炎症模型法研究其抗炎活性.结果表明,深绿短肠蕨乙醇提取物中多酚类物质含量为(172.8±0.7)mg没食子酸/g提取物;抗氧化活性最强部分为AVE,EC_(50)分别为16.2μg/mL和22.3μg/mL;AVH有较好的降糖和抗炎活性.本研究为深绿短肠蕨的深度研究和利用提供理论依据.     

“Anti-UV Clone”柴胡细胞提取物对HaCaT和HepG2细胞生长的影响研究

实验利用噻唑蓝比色分析法(MTT法)研究"Anti-UV Clone"柴胡细胞株不同溶剂提取物对人角质上皮细胞(HaCaT细胞)和人肝癌细胞(HepG2细胞)生长的影响.实验表明,75%乙醇提取剩余物在低浓度时对HaCaT细胞的生长具有显著的促进作用,其中以加入质量浓度为2.50mg/L时效果最好,添加后HaCaT细胞的生长速率比空白对照高(43.71±1.23)%.表明该提取物中存在促进HaCaT细胞生长的活性物质.而"Anti-UVClone"柴胡细胞株石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯提取物则都会抑制HaCaT细胞和HepG2细胞的生长.其中石油醚和乙酸乙酯提取物对HaCaT细胞生长的抑制作用最强,在加入质量浓度为7.50mg/L时对HaCaT细胞的抑制率分别达(39.70±0.61)%和(40.20±0.95)%;而石油醚提取物对HepG2细胞生长的抑制作用最强,在加入质量浓度为7.50mg/L时对HepG2细胞生长的抑制率达(44.97±1.01)%.     

灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉紫外光谱鉴别

利用不同溶剂在微波条件下对灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉进行提取,用紫外光谱对相同溶剂的提取产物进行分析,发现水提取物的紫外光谱有差异,可用于灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉的鉴别。