普通油茶体胚再生体系研究

为构建农杆菌介导的油茶遗传转化受体系统,选择普通油茶‘长林'4号、53号和166号的幼胚为外植体材料,进行多因素多水平的组织培养试验。结果表明:培养基的pH对愈伤组织诱导率影响不显著,愈伤组织的诱导率受油茶品种影响极显著; ‘长林'53号的幼胚极易实现胚性愈伤组织诱导和完整植株再生,MS培养基是最佳培养基,2,4-D和TDZ为幼胚较敏感的植物激素,对愈伤组织诱导影响最大; 当MS+2 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ处理时,‘长林'53号体胚诱导率为98%; MS+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+500 mg/L CH处理时,‘长林'53号体胚诱导率为89.6%。在不同2,4-D、KT、TDZ和添加物水平的L₉(3⁴)正交试验中,除3个处理外,其他处理组合的‘长林'53号体胚诱导率都达到100%。已分化的胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上,可以实现胚状体的萌发、生长及完整植株再生。     

杜仲细胞的悬浮培养

杜仲外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上可诱导出生长速度快、离散性好、适合于悬浮培养的愈伤组织；愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的液体培养基上进行振荡培养，经３～４次继代，即可建立起悬浮细胞系；悬浮细胞的形状为长形、椭圆形、圆形和“月牙”形。     

小冠花高效体细胞胚胎发生与植株再生的研究

目的建立小冠花稳定高效体细胞胚胎植株再生体系。方法采用植物离体组织培养技术,通过优化外植体,基本培养基及其激素组合,提高体细胞胚发生和植株再生频率。结果子叶外植体在附加1.0mg/L 2,4-D,1.0mg/L NAA,0.5mg/L KT和100mg/L脯氨酸的MSB培养基上35d100%形成体细胞胚,产生体细胞胚数量达625个/g,在MS KT 1.0mg/L IBA 0.1mg/L 脯氨酸300 mg/L培养基上转换成完整植株的平均数为21棵/g。再生植株移栽成活率为80%,其形态特征和生长习性未见变异。外源激素是体细胞胚胎诱导所必需的,2,4-D是其中最关键的一种。结论建立了小冠花高频稳定高效体细胞胚胎发生和植株再生体系。     

外源激素对防风体细胞胚发生和发育的影响

目的探讨生长素和细胞分裂素对防风体细胞胚发生和发育过程的影响。方法组织培养和石蜡切片。结果0．5mg／L2，4-D是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度，0．5mg／LNAA在胚性愈伤组织的长期继代培养中替代0．5mg／L2，4-D可减少畸形胚的发生，NAA浓度降至0．2mg／L时促进体细胞胚的发生和分化；生长素加一定比例的细胞分裂素(6-BA或KT)可有效促进体细胞胚的发生；通过逐步降低生长素和细胞分裂素的浓度，可促进体细胞胚的分化和生长；体细胞胚在无附加激素或附加激素浓度分别低于0．2mg／LNAA和0．5mg／L6-BA的MS培养基上，均能发育成完整的植株。结论一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素，细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起协同作用。     

蛇床愈伤组织的形态发生及植株再生

蛇床幼茎外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２ｍｇ／ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／ｌ培养基上形成淡黄绿色松软状愈伤组织。愈伤组织在转入培养基ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／ｌ＋２Ｔ０．８ｎｇ／ｌ以后分化出不定芽，在１／２ＭＳ＋ＩＡＡ２ｍｇ／ｌ培养基中可产生不定根，进而发育成为完整植株。愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．２ｍｇ／ｌ＋ＺＴＺＴ０．４ｍｇ／ｌ培养基中继代３～４次以后，再转入ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／ｌ＋ＺＴ０．８ｍｌ／ｌ培养基中继代１～２次，形成了大量胚状体。胚状体经过球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚最终发育成再生植株。器官发生和体细胞胚胎发生这两种形态发生方式在发生顺序、形态特征和所需激素条件等方面都是不同的。     

高羊茅高频再生体系的建立

目的建立高频再生体系,为相关基因的转化提供良好的受体系统。方法以高羊茅(Fes-tuca.arundinacea)成熟种子为外植体,以MS为基本培养基,进行高羊茅胚性愈伤组织诱导、继代、分化及生根培养。结果初生愈伤组织在MS 2,4-D5 mg/L CH400 mg/L 蔗糖60 g/L 琼脂12 g/L的继代培养基诱导出体细胞胚后,在含6-BA2.0 mg/L NAA0.5 mg/L的MS培养基上分化形成丛生苗,分化率达78.9%;再生苗在1/2 MS NAA0.5 mg/L生根培养基上生根,生根率达100%。结论MS 2,4-D 9 mg/L为最佳愈伤组织诱导培养基,MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.5mg/L为最佳分化培养基,1/2 MS NAA0.5 mg/L为最佳生根培养基。     

一品红离体培养及体细胞胚高频率发生的研究

一品红苞片为外植体进行离体培养,以MS+2,4-D 2.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1固体培养基愈伤诱导率及相对生长量最高。此培养基中继代的愈伤组织转入MS+2,4-D 1.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1+水解酪蛋白80 mg.L-1固体培养基时体细胞胚分化率最高。加入活性碳1 g.L-1有利于高频率体细胞胚发生。MS培养基优于N6和B5培养基,有利于高频率体细胞胚发生。胚性愈伤组织及时转入液体培养基中悬浮振荡培养有利于高频率体细胞胚发生。     

薄荷固定化细胞培养产生薄荷醇

薄荷叶片外植体经诱导形成了颗粒状愈伤组织。愈伤组织转人附加８ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ液体培养基以后，逐步成为小而分散的悬浮状态。将悬浮细胞和小愈伤组织用３％海藻酸酸钠固定，然后培养在附加０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养液中。     

不同生长调节物质对宣木瓜愈伤组织的诱导

以宣木瓜(Chaenomeles speciosa Nakai)种子的子叶、胚轴为外植体,研究不同生长调节物质对愈伤组织诱导的影响.结果表明:(1)在子叶诱导实验中,2,4-D比NAA更高效地诱导出愈伤组织,且愈伤组织生长量大,经过继代培养后仍能保持较好的长势.2,4-D与KT组合的效果好干2,4-D与BA的组合.筛选试验表明:MS 2,4-D(1.0 mg/L) KT(0.1 mg/L)对子叶愈伤组织诱导及其生长效果较好.(2)胚轴愈伤组织诱导率达到87%,而子叶的诱导率较低,为69%.虽然NAA的诱导效果较好,但愈伤组织生长速度较慢;2,4-D能高效诱导愈伤组织,但容易出现玻璃化.提高NAA,2,4-D和BA的浓度,愈伤组织呈现水浸状的比例和程度都会相应提高.试验中,2,4-D(0.1 ng/L) BA(0.3 mg/L)处理对胚轴愈伤组织的诱导效果较好.