NIH3T3细胞与其癌变细胞的PARP酶被抑制后DNA损伤修复的差异研究

PARP酶 (聚ADP核糖基聚合酶Poly ADP ribosepolymerase ,PARP)对于DNA损伤修复具有重要功能 ,正常细胞及其癌变细胞的该酶对抑制剂的敏感程度可能会有差异 .为此 ,通过姐妹染色体交换频率 ,带报告基因的质粒转化频率 ,以及彗星测定等方法 ,对DNA的损伤修复进行初步的检测 .实验结果表明 ,正常细胞和癌变细胞PARP酶在抑制剂作用下酶活性都会降低 ,但是癌变细胞的PARP酶对抑制剂更为敏感 .     

降低PARP酶活性对培养细胞SCE及微核效应的影响

聚腺苷二磷酸核糖基化作用是细胞内的一种重要的核蛋白转译后加工修饰，它参与细胞内很多重要的生物事件。催化该反应的酶是聚腺苷二磷酸核糖合酶（ＰＡＲＰ），底物为ＮＡＤ。本文使用ＰＡＲＰ酶的抑制剂苯甲酰胺处理培养细胞，研究了降低ＰＡＲＰ酶活性对培养细胞姐妹染色单体交换及微核效应的影响，为全面评价ＰＡＲＰ酶抑制剂在细胞内的功效打下基础。     

重组PAI—2基因在NIH3T3细胞中的活性表达

构建了人ＰＡＩ—２ｃＤＮＡ睥达质粒，以ＮＩＨ３Ｔ３为转染宿主细胞，ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和ＰＡＩ活性扩散试验结果表明人ＰＡＩ—２ｃＤＮＡ可以在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中正确表达出ＰＡＩ—２蛋白，且具有抑制ＰＡ的活性，同时未能检测到ＮＩＨ３Ｔ３细胞表达ＰＡＩ—２蛋白质．为探讨ＰＡ—ＰＡＩ—２系统的调控机制打下基础．     

降低PARP酶活性对培养细胞SCE及微核效应的影响

聚腺苷二磷酸核糖基化作用是细胞内的一种重要的核蛋白转译后加工修饰，它参与细胞内很多重要的生物事件．催化该反应的酶是聚腺苷二磷酸核糖合酶（ＰＡＲＰ），底物为ＮＡＤ．本文使用ＰＡＲＰ酶的抑制剂苯甲酰胺处理培养细胞，研究了降低ＰＡＲＰ酶活性对培养细胞姐妹染色单体交换及微核效应的影响，为全面评价ＰＡＲＰ酶抑制剂在细胞内的功效打下基础．     

降低聚腺苷二磷酸核糖聚合酶活性对外源癌基因诱导的NIH…

用ＰＡＲＰ酶抑制剂苯甲酰胺（ＢＡ）处理经ｃ－Ｈａ－Ｔ２４－ｒａｓ活化癌基因转染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞得到转化细胞系，结果表明，经苯甲酰胺处理的细胞系，其细胞凝集，血清依赖性，形态特征等均发生了改变呈出现正常细胞的特征，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，已整合到细胞基因组中的外源Ｔ２４－ｒａｓ基因发生了丢失。     

Ce(NO3)3对不同细胞DNA的损伤作用研究

以体外培养３Ｔ３ 细胞和ｌｏｖｏ 细胞为研究对象, 运用单细胞凝胶电泳技术, 探讨了Ｃｅ（ＮＯ３）３ 对这２ 种细胞ＤＮＡ 的损伤作用．结果表明Ｃｅ（ＮＯ３）３ 对２ 种细胞均有损伤作用： 低浓度（１ ｍｍｏｌ／Ｌ） 时,ｌｏｖｏ 细胞的ＤＮＡ 损伤率要明显高于３Ｔ３ 细胞ＤＮＡ 的损伤率, 高浓度（５ｍｍｏｌ／Ｌ） 时, 则２ 种细胞的损伤率几近相同, 提示较低浓度Ｃｅ （ＮＯ３） 对正常细胞和癌细胞存在着不同的作用, 稀土对癌细胞具有选择性杀伤作用; Ｃｅ （ＮＯ３） 具有一定的遗传毒性     

降低聚腺苷二磷酸核糖聚合酶活性对外源癌基因诱导的NIH3T3转化的逆转作用研究

用ＰＡＲＰ酶抑制剂苯甲酰胺（ＢＡ）处理经ｃ－Ｈａ－Ｔ２４－ｒａｓ活化癌基因转染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞得到转化细胞系，结果表明：经苯甲酸胺处理的细胞系，其细胞凝集、血清依赖性、形态特征等均发生了改变，呈现出正常细胞的特征．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，已整合到细胞基因组中的外源Ｔ２４～ｒａｓ基因发生了丢失．     

t-PA在昆虫细胞中的表达

将含完整阅读框架的人ｔ－ＰＡ（ｔｉｓｓｕｅ－ｙｔｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ克隆至昆虫细胞表达转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８中,获得重组质粒ｐＢａｃ－ｔＰＡ。应用脂质体共转染法,将ｐＢａｃ－ｔＰＡ和线性化杆状病毒ＢａｃＰＡＫ６ ＤＮＡ共转染Ｔｎ－５Ｂ－１昆虫细胞。经空斑筛选获得１１株重组病毒。经ＰＣＲ鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达ｔ－ＰＡ的重且病毒ＢａｃｔＰ     

CaMBP—10调节生长素应答反应机理初探

前期研究发现ＣａＭＢＰ－１０参与植物细胞对生长素应答反应的调节，但调节机理有待阐明，本文表明ＣａＭＢＰ－１０是由于影响质膜Ｈ－ＡＴＰａｓｅ活性，进而影响了质子外泌和细胞伸长，并进一步证明，它对质膜Ｈ－ＡＴＰａｓｅ活性的调节是通过介导该酶磷酸化而实现的最终调节了细胞对激素的应答。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

用PCR扩增和克隆鸡贫血病毒衣壳蛋白VP2基因

接种鸡贫血病毒（ＣＡＶ）Ｃｕｘ－１毒株于ＭＤＣＣ－ＲＰ１细胞中,并用经狄高辛标记的ＣＡＶ衣壳蛋白ＶＰ１基因克隆ＤＮＡ作为探针在斑点杂交中检测和比较了各代细胞中ＣＡＶ ＤＮＡ水平。通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,从ＣＡＶ ＤＮＡ水平较高的ＭＤＣＣ－ＲＰ１细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ＣＡＶ衣壳蛋白ＶＰ２基因片段约６５０ｂｐ的编码序列,将该ＰＣＲ扩增的产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎＩ位点克隆到ｐＵＣ１９质粒载体中,     

DDP对裸鼠人体卵巢癌的治疗作用

通过测量肿瘤体积以及应用流式细胞仪、ＡＧ－ＮＯＲ、Ｐ５３抗癌基因检测细胞ＤＮＡ含量，观察ＤＤＰ对裸鼠人体卵巢癌的治疗作用，结果表明ＤＤＰ有抑制肿瘤细胞ＤＮＡ含量的作用，ｐ５３基因与ＤＮＡ损伤药物诱导的细胞凋亡有关，进一步证实ｐ５３基因参与细胞生长与调控。     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＣＲ１）性的方法,提高化疗效。本采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡ＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＾＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的     

几种沙生植物光合碳代谢途径关键酶的研究

研究了分布于甘肃省临泽地区的沙拐枣、珍珠、霸王、泡泡刺、胡杨等５种沙生植物的光合酶：果糖－１．６－双磷酸酯酶（ＦＤＰａｓｅ）、１．５－二磷酸核酮糖羧化酶（ＲＵＢＰｃａｓｅ）、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（ＰＥＰｃａｓｅ）、ＮＡＤ－苹果酸脱氢酶（ＮＡＤ－ＭＤＨ）活性的季节变化。结果表明，珍珠和沙拐枣的ＦＤＰａｓｅ酶活性远低于其它几种材料；珍珠、霸王、沙拐枣的ＰＥＰｃａｓｅ活性明显高于其它两种材料；珍珠、沙拐枣的ＮＡＤ－ＭＤＨ活性明显高于其它三种材料。可见，珍珠、霸王是ＣＡＭ植物，沙拐枣是Ｃ４植物，胡杨是Ｃ３植物，泡泡刺有可能在干旱协迫下由Ｃ３向Ｃ４或ＣＡＭ途径转化。     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

血小板衍化生长因子及其受体在人胰腺癌局部浸润转移中作用的实验研究

观察胰腺组织及其癌变标本中血小板衍生长因子（ＰＤＧＦ）及其受体（ＰＤＧＦＲ）基因表达的变化关系,以探讨它们在人胰腺癌局部侵袭和转移过程的作用,用诺真法（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ）和原位杂交（ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＩＳＨ）方法,采用ｃＤＮＡ探针（ＰＤＧＦＡ,Ｂ,ＰＤＧＦＲα,β）对两株胰腺细胞（Ｐａｔｕ８９８８,Ｐａｔｕ８９０２）１５例胰腺癌手术切除标本和８例正常胰腺组织标本进行     

用流式细胞术研究PKC及VRP，CsA对多药抗性细胞的调制与逆转

利用流式细胞术检测抗药性细胞内Ｒｈｏ－１２３的荧光强度作为检测抗性细胞抗性程度的指标，研究了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｈ７，肿瘤促进剂佛波酯（ＴＰＡ）对多药抗性细胞的调节；钙离子通道阻断剂维拉帕米（ＶＲＰ），免疫抑制剂（ＣｓＡ）对多药抗性的逆转作用．测定了抗性细胞细胞膜和胞浆ＰＫＣ活性水平，指出ＰＫＣ可能通过磷酸化细胞膜上的Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）来调节多药抗性细胞的抗性水平，并提供了一种筛选多药抗性逆转药物的简便方法．     

抗－DNA免疫复合物性质的研究

用聚乙二醇（ＰＥＧ）和硫酸铵从系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清中分离出免疫复合物（ＩＣ）和血浆核酸（ＰＮＡ）。分析结果表明，ＰＮＡ的主要成分是ＲＮＡ，仅有少量ＤＮＡ存在，并且ＰＮＡ中ＤＮＡ的ｄＧ＋ｄＣ含量（５５％）明显高于正常值（４２％）。一旦经过ＲＮａｓｅ处理，ＰＮＡ抑制抗－ＤＮＡ抗体结合ＤＮＡ的能力降低，说明抗－ＤＮＡ抗体和ＲＮＡ有交叉反应。动力学研究观察到，抗－ＤＮＡ免疫复合物中抗原抗体的分子比是１：１，结合能为３７ｋＪ／ｍｏｌ。这提示，除ＤＮＡ／抗－ＤＮＡ外，其他抗－ＤＮＡ免疫复合物也可能同ＳＬＥ患者的组织损伤有关。     

一种具有刺激红系细胞集落生成的螺旋藻（Spirulina…

从螺旋藻体中通过ＤＥＡＥ纤维素层析，硫酸铵分部沉淀和葡聚糖Ｇ７５凝胶过滤得到一种具有离体情况下刺激红系细胞集落生成的功能蛋白质。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测分子量为１５０００道尔顿，等电点为４．８，含有藻蓝胆素。该蛋白命名为螺旋藻１５０００蛋白（Ｓｐｉｒｕｌｉａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ１５０００，ＳＰ－１５０００）。     

人血清白蛋白诱发大鼠肝纤维化模型的建立及形态学观察

用人血清白蛋白诱发ｗｉｓｔａｒ大鼠肝脏纤维化模型。成功率可达８９．２３％。不同温度对成功率有显著影响（Ｐ＜０．０１）。同时证明，，不同日龄大鼠对成功率亦有影响。前列腺素ＥＩ（ＰＧＥＩ）的使用是本模型建立的技术关键，形态学观察，纤维化后细胞损伤轻微，汇管区纤维细胞增生明显。有假小叶形成。电镜观察见枯否氏细胞活跃，Ｄｉｓｓｃ腔间隙增宽，多量胶原纤维形成，肝血窦周围贮脂细胞呈增生状态，并见贮脂细胞内胶原纤维形成的现象。细胞组织化学检查，粗面内质网葡萄糖－６－磷酸酶（Ｇ－６６Ｐ酶）颗粒阴性，致密体，自噬泡酸性磷酸酶（ＡＣＰ）反应阳性；胞膜及胆小管５－核苷酸酶（５－Ｎ酶）反应阳性。