乳腺癌自身抗体标志物的筛选和鉴定

目的:应用自身抗体技术从乳腺癌cDNA T7噬菌体展示文库筛选乳腺肿瘤相关抗原。方法:运用生物淘洗富集技术、噬菌斑转印分析和免疫化学检测方法,用正常人和乳腺癌病人血清从一个乳腺癌cDNA T7噬菌体文库中筛选肿瘤相关噬菌体克隆。通过PCR和测序的方法分析开放阅读框架内的序列,BLAST比对识别出这些噬菌体表达蛋白。然后用酶联免疫吸附(ELISA)的方法对87个乳腺癌病人和87个正常人血清样品,检测每一个开放阅读框架内的噬菌体表达蛋白的自身抗体。用逻辑回归模型和留一交叉验证评估单个标志物和多标志物联合诊断的准确率。结果:筛选得到3个开放阅读框架之内的噬菌体克隆ASB-9,SERAC-1和RELT。用87份乳腺癌病人血清和87份正常人血清对这3个噬菌体表达蛋白进行验证,逻辑回归模型联合检测的敏感性达到80%,特异性达到100%;留一交叉验证3者联合的预测值敏感性和特异性分别达到76.5%和82.4%。ROC曲线分析和留一法都表明多个标志物联合检测的价值要高于单标志物,预示着多标志物联合在诊断中的重要性。结论:对乳腺癌来说,血清自身抗体是其早期检测和诊断的一种有效方法,而且多抗体联合应用可实现更高的诊断准确率。     

免疫PCR方法检测乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体

目的为乳腺癌诊断提供血清学新方法.方法免疫PCR方法检测血清抗p53蛋白抗体,酶免疫组化方法检测组织p53蛋白表达.结果乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体阳性率为39.5%,而非癌患者和正常人血清抗p53蛋白抗体均为阴性,乳腺癌患者血清中抗p53蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人(P＜0.01).p53蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p53蛋白抗体阳性率为64.2%,明显高于p53蛋白阴性表达组,血清p53抗体测定与p53蛋白表达密切相关(P＜0.01).结论检测血清抗p53蛋白抗体是检测组织p53蛋白理想的替代工具抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.     

微波ELISA法在日本血吸虫病流行区现场应用的初步观察

目的观察微波ELISA在日本血吸虫病流行区现场的应用价值。方法用微波ELISA和快速ELISA对江西203例有疫水接触史患者的血清进行检测。结果微波ELISA抗体阳性检出率为12.3%(25/203),快速ELISA为13.3%(27/203)(2χ=0.088,P>0.05),61例杭州市区正常人血清,微波ELISA阳性检出率为3.3%,快速ELISA阳性检出率为1.6%(2χ=0.34,P>0.05),两法无显著性差异。结论微波ELISA与快速ELISA检测日本血吸虫病抗体的敏感性和特异性相近,可应用于血吸虫病的流行病学调查。     

展示p53蛋白表位噬菌体phage-SD的制备及应用

[目的]利用噬菌体展示技术制备一种可用于检测血清p53抗体的噬菌体.[方法]利用基因工程手段将编码p53蛋白N端20～31位的多肽SD的基因克隆到丝状噬菌体载体fADL-le的pIII蛋白基因中，制备展示该外源肽的噬菌体phage-SD并进行了Western blot鉴定.在此基础上，分别以phage-SD和重组p53蛋白为检测抗原，利用ELISA方法对乳腺癌患者血清p53抗体进行检测.[结果]成功制备出能特异性识别血清p53抗体的噬菌体phage-SD.ELISA检测结果表明，60例乳腺癌患者中phage-SD检测到13例p53抗体阳性患者，检出率为21.67%,与重组p53蛋白检测效率(21.67%)一致.[结论]成功制备一种灵敏度高、特异性强的可用于血清p53抗体检测的噬菌体phage-SD,为新型血清p53抗体检测试剂的开发及临床应用奠定基础.     

唾液IgG抗体测定在幽门螺杆菌感染诊断中的价值

目的 :探讨唾液抗幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)IgG测定对Hp感染的诊断价值。方法 :用ELISA法测定67例Hp阳性及20例Hp阴性患者的唾液内抗HpIgG ,并与血清抗体测定结果比较。结果 :唾液抗HpIgG对Hp感染的敏感性为91 1% ,特异性为85 0% ,准确性为89 7 % ,与血清测定结果接近(分别为92 6 % ,90 0%和91 9 %)。结论 :唾液抗Hp抗体测定对Hp感染的诊断有较好的应用价值。     

胶体金免疫层析法在结核病快速诊断中的应用

目的:探讨用胶体金免疫层析法检测血清及胸水中结核抗体,评估其在结核病快速诊断试验的相关指标。方法:应用免疫层析技术来检测血清及胸水中的结核抗体。检测临床诊断肺结核患者112例(其中分菌阳组、菌阴组)和96例无结核病史的健康体检者的血清结核抗体水平;52例结核性胸膜患者胸水中的结核抗体水平,同时对胸水进行抗酸染色镜检。计算诊断试验的相关指标。结果:该检测方法临床诊断肺结核的敏感性为60.7%,特异性为95.83%,准确性为79.2%,诊断指数为156.53%,阳性预期值为94.44%,阴性预期值为67.6%;胸水中结核抗体阳性22例,敏感性为42%,胸水结核抗体阳性率和胸水抗酸染色阳性率结果有显著性差异p(0.05。结论:血清结核抗体检测具有较高的敏感性和特异性,可用于临床肺结核的辅助诊断,对评价肺结核的疗效有较高的实用价值。胸水中结核抗体检测对结核性胸膜炎的诊断也具有重要的临床参考价值。     

血清抗Sm抗体ELISA检测方法的建立

目的：建立血清抗Sm抗体的ELISA检测方法。方法：应用纯化的Sm抗原,采用棋盘滴定等方法确立ELISA方法检测血清抗Sm抗体的最适实验条件。结果：建立了血清抗Sm抗体的ELISA检测方法。SLE患者血清抗Sm抗体的阳性率为29．2％,正常人和其它自身免疫病患者未查到此抗体。结论：本文建立的血清抗Sm抗体检测方法敏感性达到国外进口试剂盒的水平,且操作简便,重复性好,因此临床很有实用价值。     

急性脑梗死患者血清基质金属蛋白酶-9测定的临床意义

目的探讨血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量对急性血栓形成性脑梗死(ACI)患者并发出血性脑梗死(HI)、多脏器功能障碍(MODS)影响的临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(ELSA),对72例ACI患者及50例正常人血清MMP-9定量分析,对72例血清MMP-9含量不同程度增高ACI患者并发HI、MODS发生率进行比较分析。结果 ACI患者血清MMP-9含量病后6 h明显高于正常人(P0.01),病后2 d达最高,6 d恢复正常。ACI患者急性期血清MMP-9含量越高,HI、MODS发生率越高(P0.01)。结论 ACI患者急性期血清MMP-9含量增高是CI发生的重要的病理学基础,MMP-9含量与HI、MODS发生率呈正相关,提示检测MMP-9含量可为临床评估ACI的病情及预后提供有价值的依据。     

血清hK2 ELISA方法的建立及在前列腺癌诊断中的应用

目的通过建立血清hK2 ELISA检测方法,探讨血清hK2水平对前列腺癌的诊断意义,为临床鉴别前列腺癌与前列腺增生提供一种特异、敏感、实用的方法.方法利用hK2单克隆抗体建立检测血清hK2水平的ELISA方法,并利用本实验建立的方法对30例前列腺癌患者,26例前列腺增生患者,30例正常对照的血清进行hK2水平的检测.结果 1)血清hK2水平测定值(A450nm)分别为:a.前列腺癌组(0.701±0.113);b.前列腺增生组(0.212±0.145);c.正常对照组(0.198±0.015).前列腺癌组血清hK2水平与前列腺增生、正常对照组相比较有显著差异(P<0.01).2)本研究建立的检测血清hK2水平的ELISA方法的敏感度为83.3%,特异度为94.6%,准确度为87.2%.结论 1)前列腺癌患者血清hK2水平与前列腺增生患者及正常人血清hK2水平差异显著,不存在重叠.血清hK2水平能够对前列腺癌、前列腺增生进行鉴别诊断.2)在鉴别前列腺癌和前列腺增生方面,本研究建立的检测血清hK2水平的ELISA方法,与临床上应用的病理学诊断方法符合率高,具有临床实用价值.     

酶联免疫吸附分析(ELISA)检测抗ss-DNA自身抗体

本实验用小牛胸腺单股DNA(ss-DNA),通过酶联免疫吸附分析(ELISA)测定了可疑全身性红斑狼疮(SLE)及相关患者血清标本21个,其中7个病人血清与ss-DNA反应阳性,存在抗ss-DNA自身抗体。这7个病人血清在SLISA检测O.D值比健康人对照血清的O.D值高出1.5倍以上。方法简便、准确,重复性好,对SLE病人暴发前检测具有参考价值。     

血清结核抗体检测在肺结核患者中的辅助诊断价值

通过对武威市凉州医院所使用的血清结核抗体剂准确度进行评估,了解其是否能够为临床诊断提供帮助。以2016年5月至2017年1月在凉州医院就诊的肺结核患者199例为研究对象,另外选择同一时期因其他呼吸道疾病入院的非肺结核病患者113例为对照组。将收集到的所有患者标本进行结核抗体血清学检测,并对检测数据进行分析。该血清结核抗体灵敏度22.61%,特异度98.23%。与病原学检测方法相比,P0.05,两者无统计学差异。血清抗结核抗体检测在肺结核患者的筛查中有一定价值,且检测耗时更短,适用于临床快速筛查。     

血清结核分枝杆菌IgG抗体检测在肺结核诊断中的作用分析

探究血清结核分枝杆菌IgG抗体检测在肺结核诊断中的作用。选取2017年3月—2019年10月甘肃省高台县人民医院收治的肺结核患者137例作为肺结核组,另选取103例其他肺部疾病患者作为对照组,分析血清结核分枝杆菌IgG抗体检测在肺结核诊断中的价值。肺结核组结核杆菌抗原检测阳性率74.45%高于对照组32.04%,差异有统计学意义（P<0.05）;肺结核组中IgG+38kD+LAM联合检测阳性率最高为62.75%,高于对照组的21.21%(P<0.05);血清结核抗体IgG+38kD+LAM联合检测对肺结核的诊断灵敏度为73.56%(64/87),特异度为73.33%(11/15),阳性预测值为94.11%(64/68),阴性预测值为32.35%(11/34)。血清结核分枝杆菌IgG抗体检测可用于肺结核辅助诊断,联合38kD+LAM可显著提高肺结核诊断阳性率。     

阴道超声联合MMP-9、膜联蛋白A2检测在子宫腺肌病中的诊断价值

目的探讨阴道超声联合基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)、膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)检测在子宫腺肌病(Adenomyosis,AM)患者中的诊断价值.方法选取行子宫切除术的患者60例,根据术后病理结果分为AM患者26例,子宫肌瘤患者34例.所有患者于术前行经阴道超声检查,并术前检测MMP-9,ANXA2的表达水平.利用ROC曲线分析经阴道超声检查、血清MMP-9,ANXA2单独及联合检测的诊断价值.结果研究组血清中MMP-9和ANXA2的水平明显高于对照组(P0.05);研究组子宫动脉血流阻力指数显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);三者系列联合检测AM的特异度为85.29%,显著高于三者单独检测和平行联合检测的特异度(82.35%,5.88%,73.53%,47.06%)(P0.05),同时约登指数(0.622)和准确度(81.67%)最高; ROC曲线显示:经阴道超声、MMP-9和ANXA2系列联合检测的ROC曲线下面积显著高于经阴道超声、MMP-9和ANXA2单独检测,差异具有显著的统计学意义(P0.05).结论阴道超声联合检测MMP-9、膜联蛋白ANXA2可以提高AM诊断的准确度.     

非抗体结合蛋白-抗体组合的GPC3双夹心化学发光法在临床的初步应用

目的:探讨非抗体结合蛋白-抗体双夹心化学发光免疫诊断试剂检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)在肝细胞癌(HCC)血清学的临床诊断价值和鉴别诊断价值.方法:应用本课题前期研制的非抗体结合蛋白-抗体GPC3夹心化学发光法诊断试剂检测HCC、肝内胆管癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、正常人群等患者血清GPC3水平,同时用GPC3免疫组织化学(IHC)检测上述疾病患者的肿瘤组织,同时分析甲胎蛋白(AFP)和本实验方法对HCC的诊断效能,进一步分析GPC3表达于不同细胞结构部位与血清水平关系.结果:非抗体结合蛋白-抗体GPC3双夹心化学发光试剂盒检测HCC组GPC3血清水平明显高于其他组(21倍,P值均小于0.01),与GPC3 IHC结果相一致.联合GPC3和AFP的曲线下面积(AUC)为0.922,明显高于单一标志物(GPC3和AFP的AUC分别为0.899和0.821,P值均小于0.05)的诊断价值.GPC3主要表达于胞膜和混合表达(胞膜和胞质),且所有胞膜和混合表达阳性患者血清样本的GPC3均高水平表达.结论:非抗体结合蛋白-抗体GPC3双夹心化学发光试剂盒具有良好的诊断特异性及准确性,有可能用于HCC的鉴别诊断,且对分析GPC3胞膜型HCC的诊断、疗效评价及预后提供更多诊断价值信息.     

肺癌肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对乳腺癌的诊断价值

目的:研究肺癌肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对乳腺癌的诊断价值。方法:利用双荧光标记的肺癌肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统对15份乳腺癌患者和15份正常对照人群血清样品进行检测,然后从系统中寻找可用于乳腺癌检测的肺癌肿瘤标志物,并根据ROC曲线评估其诊断价值。结果:在肺癌肿瘤标志物检测系统中,除了3E7噬菌体蛋白(P=0.0526,AUC=0.712),没有发现更多与乳腺癌相关的肿瘤标志物。结论:绝大多数的肺癌肿瘤标志物都不适宜作为乳腺癌的检测指标,但是3E7有可能是特异性标志物,对于诊断有一定的诊断价值,有待进一步研究。     

SARS冠状病毒核衣壳蛋白基因的表达及其在SARS诊断中的应用

目的为SARS感染后建立一种特异性免疫学诊断方法,为基因疫苗的研制提供备选实验材料.方法利用基因重组的方法,在大肠杆菌中表达了SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白全长基因,经包涵体的初步纯化,金属螯合层析进一步纯化N蛋白,SDS-PAGE电泳和ELISA方法进行结果检测.结果N蛋白抗原与30名SARS感染患者血清结合全部为阳性,对照组30名正常人血清为阴性,30名发热但非SARS患者血清为阴性.结论利用基因重组的方法对SARS-CoV N蛋白进行了表达和纯化,证明该重组N蛋白抗原具有良好的反应特异性,是良好的应用于病毒感染早期诊断的抗原.完全可用于组构检测核心抗体的诊断试剂.并建立了免疫学的检测方法,为抗体检测提供了安全、方便的手段,并为基因工程疫苗研究奠定了基础.     

ELISA检测姜片虫病患者抗体的研究

研究了姜片吸虫成虫冷浸抗原检测姜片吸虫病患者血清抗体的敏感性和特异性及其在流行病和临床上的应用价值．超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原．以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性．按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果．普查2189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与改良加藤法的阳性符合率98．21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4．08％;与血吸虫病交叉阳性为9．38％,肺吸虫病交叉阳性为5．36％．姜片吸虫成虫冷浸抗原1：3500工作浓度包被酶标板,检测姜片虫病血清抗体具有敏感性高、特异强和交叉反应率低的特点．     

血清AFP临界值判断对肝癌诊断的影响

为探讨血清AFP诊断肝癌的合理临界值,本研究收集肝癌患者35例、正常对照者35例。血清AFP检测采用电化学发光法和酶联免疫吸附法(ELISA)定量,结果用t检验和χ2检验进行统计学分析。2种方法检测血清AFP水平显著相关,相关系数为0.978,检测值无显著性差异,P>0.05。二者ROC曲线下面积分别为0.890、0.880,说明血清AFP水平对肝癌诊断价值较高。按照约登指数最大原则确定血清AFP电化学发光法诊断肝癌的临界值为3.25μg/L,其敏感度为74.3%,特异度为94.3%,准确度为84.3%;ELISA法诊断肝癌的临界值为1.118μg/L,其敏感度为62.9%,特异度为100%,准确度为81.4%。而以目前常规临界值20μg/L来分析,则电化学发光法检测AFP诊断肝癌的敏感度仅为45.7%,特异度100%,准确度72.9%;ELISA法敏感度48.6%,特异度100%,准确度74.3%。因此合理降低临界值可有效提高血清AFP水平对肝癌的诊断价值。     

肺癌患者血清P53抗体及肺癌组织P53表达对肺癌诊断价值的研究

目的探讨肺癌患者血清P53抗体水平及肺癌组织P53表达对肺癌诊断的价值.方法采用ELISA法检测肺癌患者血清P53抗体水平,并采用免疫组化法检测肺癌组织P53表达情况.结果肺癌患者血清P53抗体（17.84±8.73）ng/L水平比正常对照组（5.43±1.90）ng/L显著升高（P〈0.001）,肺癌患者血清P53抗体水平与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期有关.肺癌患者癌组织P53表达的阳性率为61.5%（168/273）,肺癌患者癌组织P53阳性表达率与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期、分化程度、病理类型有关.结论血清P53抗体水平与癌组织中的表达有着良好的平行关系,测定血清P53抗体水平或检查肺癌患者癌组织P53的表达可对肺癌的诊断、分期、治疗和预后提供重要依据.     

MCTD、SS和RA患者血清中SARS-CoV抗体阳性原因分析

为探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)抗体在SARS病原学诊断中的特异性及其在干燥综合征(SS)、混合结缔组织病(MCTD)和类风湿性关节炎(RA)患者血清中的假阳性问题，应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IFA)检测了111例正常对照和46例SS、MCTD和RA患者血清中SARS-CoV抗体的阳性率。结果在正常对照和SS、MCTD和RA患者中，应用ELISA测定SARS-CoV抗体的阳性率分别为3．6％(4／111)和19．6％(9／46)，经IFA检测，上述SARS-CoV抗体阳性者均为阴性。提示IFA诊断SARS的特异性为100％，ELISA诊断SARS存在一定的假阳性。