SARS冠状病毒核衣壳蛋白基因的表达及其在SARS诊断中的应用

目的为SARS感染后建立一种特异性免疫学诊断方法,为基因疫苗的研制提供备选实验材料.方法利用基因重组的方法,在大肠杆菌中表达了SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白全长基因,经包涵体的初步纯化,金属螯合层析进一步纯化N蛋白,SDS-PAGE电泳和ELISA方法进行结果检测.结果N蛋白抗原与30名SARS感染患者血清结合全部为阳性,对照组30名正常人血清为阴性,30名发热但非SARS患者血清为阴性.结论利用基因重组的方法对SARS-CoV N蛋白进行了表达和纯化,证明该重组N蛋白抗原具有良好的反应特异性,是良好的应用于病毒感染早期诊断的抗原.完全可用于组构检测核心抗体的诊断试剂.并建立了免疫学的检测方法,为抗体检测提供了安全、方便的手段,并为基因工程疫苗研究奠定了基础.     

SARS-CoV刺突蛋白受体结合区的表达及高潜在中和性人源抗体的制备

为表达SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)受体结合区(RBD)并从中筛选高潜在中和性人源抗体,我们用原核表达并纯化的SARS-CoVSRBD进行抗体库的筛选。从多个曾患SARS的健康人血中获得淋巴细胞,PCR扩增全部抗体基因,插入Pcomb3x载体中,构建抗SARS病毒人源噬菌体抗体库。利用噬菌体表面呈现技术,从中筛选结合SARS-CoVSRBD的人源抗体并用ELISA及Westernblot鉴定阳性克隆,竞争ELISA检测人源抗体阻断SARS-CoVSRBD与其受体ACE2的结合情况。结果为构建了库容量6.2×107的免疫Fab噬菌体抗体库,重组率为75%,从中筛选获得9株特异抗SARS-CoVSRBD的人源Fab抗体,ELISA及Westernblot检测均为阳性。其中有一株能阻断SARS-CoVSRBD与其受体ACE2的结合。本实验结果表明:人源抗SARS-CoVSRBD基因工程抗体的获得,一方面将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径,同时也提示SARS-CoV亚单位疫苗可以用于SARS疾病的预防。     

用RT-PCR方法检测血液及尿液中肾综合征出血热病毒

目的应用逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)对临床诊断或拟诊为肾综合征出血热(HFRS)的患者的血液及尿液标本进行检测.方法对临床拟诊断或拟诊HFRS患者198名(Ⅰ型为147例,Ⅱ型为51例)的血清、尿液标本进行RT-PCR方法抗体检测,并设置对照血清.结果紫外灯下,165例在237 bp处出现橙黄色带,阳性率为83.3%,对尿液进行检测,其结果均为阳性.标准病毒株、阳性对照血清为阳性.阴性对照、健康人血清、尿液标本均为阴性;免疫荧光抗体检测,血清抗体阳性173例,阳性率为87.2%.尿液阳性仅为116例,阳性率为58.4%.结论用RT-PCR方法检测HFRSV具有灵敏度高、特异性好、快速等优点,方法简便,适于临床应用.     

ELISA检测姜片虫病患者抗体的研究

研究了姜片吸虫成虫冷浸抗原检测姜片吸虫病患者血清抗体的敏感性和特异性及其在流行病和临床上的应用价值．超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原．以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性．按常规ELISA方法操作，目视与酶标仪判断结果．普查2189人中姜片吸虫卵阳性者168例；168例中165例ELISA阳性，ELISA与改良加藤法的阳性符合率98．21％；健康居民血清147份，阳性6份，阳性率4．08％；与血吸虫病交叉阳性为9．38％，肺吸虫病交叉阳性为5．36％．姜片吸虫成虫冷浸抗原1：3500工作浓度包被酶标板，检测姜片虫病血清抗体具有敏感性高、特异强和交叉反应率低的特点．     

脂多糖—被动血凝试验早期诊断伤寒的价值

为评估脂多糖－被动血凝试验（ＬＰＳ－ＰＨＡ）早期诊断伤寒的应用价值,对病程不同的１０２例伤寒患者用ＬＰＳ－ＰＨＡ、肥达反应和细菌培养进行检测,２００例非伤寒发热患者作为对照。结果显示：伤寒患者病程第一周ＬＰＳ－ＰＨＡ阳性率为８０％（２４／３０）,第二周达９７７３％（４３／４４）;细菌培养阳性率２４５１％;肥达反应的伤寒与副伤寒鞭毛抗体交叉阳性率达３７２５％;对照组ＬＰＳ－ＰＨＡ有２％的假阳性。结果表明：ＬＰＳ－ＰＨＡ可早期、简便及快速诊断伤寒,有较高的敏感性和特异性。     

建立Raji细胞免疫酶抑制法对血清抗HLA—DR抗体的检测

由于Raji细胞表面具有表达HLA-DR抗原特点,利用被测血清中抗HLA-DR抗体与抗人HLA-DR单克隆抗体竞争和Raji细胞表面HLA-DR抗原结合的特征,建立了Raji细胞免疫酶抑制法检测血清中抗HLA-DR抗体的方法。进行了方法学特异性,重复性和实验条件确定研究,并用此方法检测了72例系统性红斑狼疮患者和113例健康者血清。结果显示:该方法特异性强(中性粒细胞无显色反应);重复性好(抗体阳性血清变异率C.V为4.66％,抗体阴性血清C.V为0％);抗体滴度范围1∶5-1∶40。系统性红斑狼疮患者中抗HLA-DR抗体阳性率为30％;而健康阳性率为1.8％。作者认为:用Raji细胞免疫酶抑制法检测血清中抗HLA-DR抗体是一种特异性强,重复性好,操作简便和假阳性率低的方法,这种方法值得推广应用。     

实验大鼠和小鼠多种病毒的血清学检测结果分析

摘要:目的　评估近期大鼠和小鼠的病毒感染情况,为我国大、小鼠质量控制和标准化提供参考。 方法　应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2012年至2013年国内36家单位送检的小鼠和大鼠血清进行病毒抗体检测,检测出现阳性的样品再用免疫荧光试验(IFA)进行复检。 结果　检测小鼠病毒抗体18项,出现阳性结果的有9项,小鼠诺如病毒和小鼠肝炎病毒阳性率最高,分别是42.2％和19.9％,检测大鼠病毒抗体14项,出现阳性结果的有8项,大鼠细小病毒有5项,阳性率最高达13.6％—34.4％。 结论　我国大、小鼠病毒监测、净化和控制工作仍需加强。     

传染性非典型肺炎病毒核蛋白的表达与活性检测

用PCR方法，人工合成传染性非典型肺炎病毒(SARS-CoV)核蛋白(N)全编码基因，并构建原核表达载体．在大肠杆菌中进行表达．结果重组N蛋白表达产量占菌体总蛋白的40％以上，主要以可溶形式存在．用SARS患者急性期血清进行蛋白印迹检测，表明可溶形式和包含体形式均有明显活性．包含体形式的重组蛋白经纯化后纯度可达90％以上，活性与纯化前相当，可作为SARS抗体诊断试剂盒的抗原原料．     

SLE患者血清ENA抗体的检测及临床意义

系统性红斑狼疮(Systemic Lupus erythematosus, SLE)是一种病因不明的自身免疫病,病人体内由于B淋巴细胞多克隆激活而产生多种自身抗体,这些抗体能与细胞核或胞浆内的许多成分反应,对SLE的诊断有重要意义,如抗ds—DNA抗体,抗组蛋白抗体,抗Sm抗体等。由Halman等(1959)首先报导某些SLE患者血清中有一种自身抗体,能和细胞核的盐水可溶性成分反应,命名为可提取核抗原(extractable nuclear antigen, ENA)抗体。后经学者研究,发现ENA含多种抗原成分,如Sm、RNP、SSA、SSB、ScL—70、Jo—1、Ku、HSP—90等,其相应抗体对风湿病的诊断和鉴别诊断有重要价值,如抗Sm抗体对SLE特异性较高,高滴度RNP抗体对混合性结缔组织病(MCTD)特异性较高,SSA及SSB抗体是干燥综合征(SS)特异性抗体。研究较多的是Sm和RNP抗体。 1 ENA抗原的分子特性 ENA属非组蛋白核蛋白,因其大多数是酸性蛋白,所以又称酸性核蛋白。ENA常从兔或小牛胸腺、猪胸腺、Hela细胞、Wi1—2细     

抗Sa抗体和RF对RA诊断的比较研究

目的：比较抗Sa抗体和FR对RA诊断的效果。方法：用Wextenn－blot方法检测抗Sa抗体,用胶乳凝集法检测RF。结果：抗Sa抗体对RA诊断的敏感度为42．7％,特异度为100％,阳性确诊率为100％,阴性确诊率为71．1％。RF对RA的诊断敏感度为72O％,特异度为79．2％,阳性确诊率为71．2％,阴性确诊率为80.0％。结论：两种方法比较表明,抗Sa抗体诊断RA的特异性和阳性确诊率均优于RF.     

血清灭活法对消除ELISA假阳性结果的比较研究

目的建立一种简便、易行的方法,对酶联免疫吸附试验的结果进行质量控制。方法依据国标ELISA方法对578份小鼠血清进行11种病毒抗体检测,共检测抗体3677份。对初步检测出的242份抗体阳性血清,经56℃30min水浴灭活处理后进行复检。结果可疑阳性血清经灭活处理后复检,正常抗原孔A值和特异抗原孔A值明显低于初检的正常、特异抗原孔A值,差异显著(P<0.05);初检和复检的特异抗原孔A值与正常抗原孔A值的比值有显著性差异(P<0.05);血清灭活前后阳性率有显著性差异(P<0.01),分别为6.58%和2.86%。阳性对照灭活前后A值无显著差异(P>0.05)。结论血清经灭活处理后,使检测结果的假阳性率显著降低。     

IFA诊断巴尔通体感染

目的：了解间接免疫荧光抗体测定法(IFA)的技术路线及其在巴尔通体(Bartonella)诊断中的应用。方法：查阅相关文献，认识IFA的敏感性及特异性、交叉反应。结果：IFA对巴尔通体感染的诊断尤其是在属的水平上的敏感性及特异性均较高。结论：IFA通过抗原抗体的特异性反应而对感染病原作出诊断，尽管有部分交叉反应存在，IFA仍以其高度的敏感性及特异性，以及操作简便而成为诊断巴尔通体感染最实用的方法。     

SARS冠状病毒的诊断性实验研究

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新的人类感染性疾病，其致病菌为SARS冠状病毒(SARS-CoV)。本文就SARS-CoV发现过程、病毒特点及检测方法的研究进展和应用情况加以概述。     

基层医院开展抗CCP检测在诊断RA中的价值

目的:观察抗CCP检测在诊断类风湿性关节炎(RA)中的价值,方法:检测了710例RF阳性和阴性患者血清中的CCP抗体,其中RF阳性满足美国风湿病学会(ACR)的诊断标准的125例;RF阳性但不满足ACR的诊断的205例;正常对照组即RF阴性380例;结论:开展anti—CCP抗体检测,对RA的早期诊断有积极的意义。     

小鼠腺病毒在鼠群中心感染及血清学检测方法的比较

本文采用ELISA法、间接免疫荧光法(IFA)和酶免疫分析(EIA)三种方法检测小鼠腺病毒血清抗体,并对三种方法的敏感性和特异性进行了比较。同时对国内14个省市的38个单位的开放饲养和SPF小鼠腺病毒的感染情况做了调查。用131只SPF小鼠的检测结果确定鼠腺病毒的阳性界限。结果表明:开放饲养的鼠群有程度不同的感染,而SPF小鼠的感染率为0％。三种血清学方法均可应用,其中以ELISA法最为敏感。     

仙台病毒抗原的制备及初步应用

目的纯化和制备仙台病毒(Sendai Virus,SeV)抗原,初步应用于间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫印迹(Western-blot)试验对SeV抗体进行检测。方法通过鸡胚尿囊腔及BHK-21细胞增殖法培养增殖SeV,低温冻融去除细胞碎片后,用差速离心及超声破碎法纯化并制备SeV抗原,以SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定;优化确定间接SeV-ELISA抗原的最佳包被浓度,对比检测间接免疫荧光试验(IFA)初筛小鼠SeV阳性血清,同时用Western-blot检测法进行特异性验证。结果用BHK-21细胞培养增殖的SeV,病毒滴度HA为1∶128,SeV抗原的电泳纯度达80%;确定SeV-ELISA抗原最佳包被浓度为2.5μg/mL时,测得小鼠SeV抗体ELISA与IFA的阳性符合率为100%,并由Western-blot检测法得到了证实。结论通过BHK-21细胞增殖和差速离心及超声破碎法制备的SeV抗原,可用于ELISA及Western-blot法对小鼠SeV抗体的检测,进而验证了SeV具有较强的抗原特异性及蛋白活性。     

胶体金免疫层析法在结核病快速诊断中的应用

目的:探讨用胶体金免疫层析法检测血清及胸水中结核抗体,评估其在结核病快速诊断试验的相关指标。方法:应用免疫层析技术来检测血清及胸水中的结核抗体。检测临床诊断肺结核患者112例(其中分菌阳组、菌阴组)和96例无结核病史的健康体检者的血清结核抗体水平;52例结核性胸膜患者胸水中的结核抗体水平,同时对胸水进行抗酸染色镜检。计算诊断试验的相关指标。结果:该检测方法临床诊断肺结核的敏感性为60.7%,特异性为95.83%,准确性为79.2%,诊断指数为156.53%,阳性预期值为94.44%,阴性预期值为67.6%;胸水中结核抗体阳性22例,敏感性为42%,胸水结核抗体阳性率和胸水抗酸染色阳性率结果有显著性差异p(0.05。结论:血清结核抗体检测具有较高的敏感性和特异性,可用于临床肺结核的辅助诊断,对评价肺结核的疗效有较高的实用价值。胸水中结核抗体检测对结核性胸膜炎的诊断也具有重要的临床参考价值。     

PreS1抗原与HBeAg联合检测用于预测HBV-DNA的水平

目的:联合检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者的血清前S1(PreS1)抗原和乙肝e抗原(HBeAg)两项指标,判断其与HBV-DNA定量的相互关系.方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法(两步法)检测PreS1抗原,双抗体夹心ELISA法(一步法)检测HBeAg,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测HBV-DNA.结果:在335例慢性HBV携带者患者中,PreS1抗原阳性率为42.7％,HBeAg阳性率为36.4％,HBV-DNA阳性率为53.4％.在179例HBV-DNA阳性患者中,HBeAg阳性109例(60.9％);156例HBV-DNA阴性患者中,HBeAg阴性143例(91.7％).在179例HBV-DNA阳性患者中,PreS1抗原阳性89例(49.7％);在156例HBV-DNA阴性患者中,PreS1抗原阴性102例(65.4％).PreS1和HBeAg双阳性的感染者HBV-DNA阳性率为93.8％( 45/48);在PreS1和HBeAg双阴性的感染者中,HBV-DNA阳性率仅为22.0％ (26/118).结论:HBeAg与HBV-DNA的相关性比PreS1抗原与HBV-DNA的相关性高.PreS1和HBeAg双阳性的感染者HBV的复制程度高,而双阴性的感染者复制程度较低.因此,PreS1抗原与HBeAg联合检测可用于预测HBV-DNA的水平.     

CagA阳性幽门螺杆菌感染与消化性溃疡、胃炎相关性512例临床分析

目的探讨CagA阳性Hp感染与消化性溃疡、胃炎等胃及十二指肠疾病的关系.方法采用ELISA法对Hp阳性(~(13)C-呼气试验为阳性)、胃黏膜快速尿素酶联免疫法阳性的512例胃十二指肠疾病患者及80例对照者(健康体检:~(13)C-呼气试验为阴性、胃黏膜快速尿素酶联免疫法阴性)行血清CagA抗体检测.512例胃十二指肠疾病患者中慢性浅表性胃炎(CSG)184例,慢性萎缩性胃炎(CAG)120例,十二指肠球溃疡(DU)100例,胃溃疡(GU)108例.结果 CagA抗体阳性检出率对照组为30%,慢性浅表性胃炎组阳性率为61.96%,慢性萎缩性胃炎组阳性率为63.33,十二指肠溃疡组阳性率为68.00%,胃溃疡组阳性率为74.07%.胃十二指肠疾病患者CagA阳性总检出率为66.02%,与对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05).结论胃十二指肠疾病Hp阳性感染者中CagA抗体阳性总检出率明显高于对照组,提示CagA抗体阳性感染与胃十二指肠疾病密切相关;两组胃炎患者CagA抗体阳性检出率明显高于对照组,提示CagA抗体阳性感染与胃炎密切相关;胃十二指肠溃疡患者CagA抗体阳性检出率明显高于对照组,提示CagA抗体阳性感染与消化性溃疡密切相关.     

对淋巴球脉络丛脑膜炎病毒抗体检测方法的研究

本文就检测淋巴球脉络丛脑膜炎病毒抗体(简称LCM)的方法作了比较,共采用ELISA、IFA、EIA以及IAHA等方法,表明ELISA法为最敏感,检测率最高。我们对1982～1987年来自国内21个省市共2824只小鼠检测了LCM抗体,发现有十三个省市的实验鼠群有该抗体,(61.9％)。其中以山东的阳性率为最高(90％)。