压印光刻中高精度莫尔对准方法的研究

针对分步压印光刻工艺中多层套刻的高精度对准问题,提出一种应用斜纹结构光栅副实现x、y、θ三自由度自动对准的方法.光栅副分为4个区域,应用光电转换器阵列检测光栅副相对移动所引起的莫尔信号变化,通过电路系统处理可同时得到在平面x、y、θ三自由度的对准信号.驱动环节采用直线电机和压电驱动器作为宏微两级驱动,其分辨率分别为0.2μm和0.1nm,在激光干涉仪全程监测下,与控制系统一起构成闭环系统实现自动对准定位.实验结果表明,在多层压印光刻工艺中,实现了压印工作台步进精度小于10nm的高精度定位要求,使整个对准系统的套刻精度小于30nm.因此,应用这种莫尔对准方法可以获得较高的对准精度,同时能够满足压印100nm特征尺寸套刻精度的要求.     

北京地区实验用小型猪设施环境因子检测与评价

目的检测北京地区实验用小型猪设施环境因子控制状况,为制定北京市实验用小型猪环境设施等级标准提供基本数据。方法GB14925-2001附录A～H规定的检测方法。结果普通环境小型猪设施5个,7次静态检测,3次动态检测。屏障环境小型猪设施3个,3次静态检测。检测指标包括温度、相对湿度、工作照度、动物照度、噪声、气流速度、换气次数、落下菌、空气洁净度、压力梯度、氨浓度(动态)等环境因子。检测结果基本控制在GB14925-2001要求范围内。结论北京地区实验用小型猪设施环境控制基本符合国家标准的要求,现在没有小型猪普通环境及屏障环境的国标与地标,但且忽略了小型猪不同生长阶段对环境因子的特殊要求。     

仙台病毒抗原的制备及初步应用

目的纯化和制备仙台病毒(Sendai Virus,SeV)抗原,初步应用于间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫印迹(Western-blot)试验对SeV抗体进行检测。方法通过鸡胚尿囊腔及BHK-21细胞增殖法培养增殖SeV,低温冻融去除细胞碎片后,用差速离心及超声破碎法纯化并制备SeV抗原,以SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定;优化确定间接SeV-ELISA抗原的最佳包被浓度,对比检测间接免疫荧光试验(IFA)初筛小鼠SeV阳性血清,同时用Western-blot检测法进行特异性验证。结果用BHK-21细胞培养增殖的SeV,病毒滴度HA为1∶128,SeV抗原的电泳纯度达80%;确定SeV-ELISA抗原最佳包被浓度为2.5μg/mL时,测得小鼠SeV抗体ELISA与IFA的阳性符合率为100%,并由Western-blot检测法得到了证实。结论通过BHK-21细胞增殖和差速离心及超声破碎法制备的SeV抗原,可用于ELISA及Western-blot法对小鼠SeV抗体的检测,进而验证了SeV具有较强的抗原特异性及蛋白活性。     

三种垫料的生物学安全性评价

目的观察杨木、玉米芯、松木三种垫料物质对大、小鼠体质量、血生化、脏器及脏器系数的影响。方法昆明小鼠60只,雌雄各半,随机分为3组,每组20只,分别使用杨木、玉米芯、松木垫料。Wistar大鼠60只,雌雄各半,随机分为三组,每组20只。分别使用杨木、玉米芯、松木垫料。动物饲养4周后取血测定血生化指标ALT、TP、ALP、LDH、T-SOD、ADH,处死测定脏器重量计算脏器系数。结果 1）体质量结果：与杨木组比较,松木组雄性小鼠的体质量有显著性的降低,P〈0.001。与玉米芯组比较,松木组雄性大鼠自第三周开始体质量降低,P〈0.05。2）血生化结果：小鼠：与杨木组比较,玉米芯组雄性谷丙转氨酶有极显著性升高,P〈0.001;松木组雌性乳酸脱氢酶有显著性降低,P〈0.01;松木组和玉米芯组雌性小鼠活力乙醇脱氢酶有显著性降低,P〈0.001,P〈0.05。大鼠：松木组雄性乙醇脱氢酶与杨木组比较有显著性升高,P〈0.01。3）脏器重量结果：小鼠：与杨木组比较,松木组雄性肝有极显著性降低,P〈0.01,脑有显著性降低,P〈0.05,肾有显著性升高,P〈0.05;玉米芯组雄性动物肾有显著性升高,P〈0.05,肾上腺有显著性降低,P〈0.05,睾丸有显著性升高,P〈0.05。大鼠：玉米芯组肝脏与杨木组和松木组比较有显著性升高P〈0.001,P〈0.05;松木组肾脏和脑与杨木组比较有极显著性升高,P〈0.01,P〈0.01;松木组前列腺与玉米芯组比较有显著性升高,P〈0.05,与杨木组比较有极显著性升高,P〈0.01。4）脏器系数结果：小鼠：与杨木组比较,松木组雄性肝脏、脑系数有显著性降低,P〈0.01,P〈0.05,松木组和玉米芯组雌性肾脏、雄性睾丸系数有显著性升高,P〈0.01。大鼠：玉米芯组雄性肝脏与杨木组比较有极显著性增大,P〈0.001。结论杨木垫料是较好的小鼠实验动物垫料,玉米芯垫料可作为备选产品,松木垫料应慎用。     

近交系小鼠微卫星DNA引物的筛选和Tm值优化研究

目的通过对近交系小鼠微卫星引物的筛选和Tm值优化研究,以探索小鼠DNA多态性检测方法。方法随机选用32对位于小鼠不同染色体的微卫星引物,用PCR扩增方法对常用C57BL/6、C3H、BALB/c、DBA/2、129、FVB及SCID近交系小鼠DNA多态性进行扩增和电泳分析,并对其中25对引物的Tm值进行优化。结果 25对引物可稳定扩增,2对引物在不同品系小鼠间表现为单态性,23对引物在不同品系间呈多态性,10对引物呈显著多态性(3～4个态性)。结论所筛选和优化的25对微卫星引物,对不同品系小鼠DNA可稳定扩增,其电泳结果具有较高的DNA多态性,可反映不同品系小鼠的遗传概貌。     

大鼠细小病毒KRV株培养方法的建立

目的 建立用大鼠胶质瘤细胞系( Rat glial cell line C6)替代大鼠原代胚细胞(Primary rat embryo cells,RE)来 培养大鼠细小病毒（Kilham Rat Virus,KRV）的方法。方法 将500 TCID50 KRV培养物接种到75T-C6细胞培养瓶 中（ 细胞接种量为2×105/mL）, 培养过夜, 待细胞病变CPE达++～+++时, 分别用免疫荧光(FITC)鉴定所培 养病毒的特异抗原,用血球凝集试验(HA)测定培养物上清的效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,最后用96孔 板培养法测定KRV的TCID50。结果 KRV在接种到C6细胞的第4～5天, 细胞发生明显的病变,CPE可达++++, FITC鉴定呈KRV抗原阳性, 病毒的培养上清中HA效价为1:5 120,测序结果表明, 该病毒序列与NCBI中KRV序 列同源性达98％ , 确定为KRV。收获的KRV的TCID50为104.6/0.1 mL。结论 通过对C6细胞系培养KRV方法 的标准化和对所培养病毒的一系列鉴定表明,用大鼠胶质瘤细胞系可以替代大鼠原代胚细胞系进行大鼠细小病毒 的培养。     

C57BL/6J胚胎冷冻小鼠的遗传监测和分析研究

目的用生化标记和微卫星检测法观察近交系C57BL/6J小鼠胚胎冷冻后的遗传质量是否发生改变。方法采用国标(GB/T 14927.1-2008)生化标记基因检测法对4只玻璃化冷冻、解冻移植后获得的C57BL/6J F1代小鼠的13个生化位点进行预检测,再根据微卫星DNA多态性的遗传监测方法进行多态性分析。结果4只玻璃化冷冻后移植获得的C57BL/6 F1代小鼠的遗传概貌与国标(GB/T 14927.1-2008)中的14个生化位点完全一致;并与本文作者已建立"几种常用近交系小鼠微卫星DNA多态性的分析研究"的遗传监测结果完全相符。结论玻璃化冷冻法(EFS40,straw)对C57BL/6J冷冻胚胎小鼠的遗传物质并未造成影响,其遗传特性保持稳定,是可行的小鼠胚胎冷冻方法。     

液相色谱法测定大鼠血清中IgG的研究

目的建立一种用于测定大鼠血清中IgG的液相色谱法。方法根据被分析物质的性质,以HI-Trap Protein G柱为分离柱,以磷酸盐缓冲液和甘氨酸盐酸缓冲液为流动相,采用梯度洗脱方式,选择0.8mL/min流速,检测波长为280nm。结果浓度在0.5～1.5mg/mL浓度范围内IgG与峰面积呈良好的线性关系,以信噪比为10计算最低检测浓度为0.31mg/mL,平均回收率为90.5%。结论试验结果表明该方法可行,快速简便,准确可靠。     

实验动物垫料质量标准控制指标的探讨

垫料能吸附水分及动物的排泄物,维持笼内和动物本身的清洁卫生,是能影响实验数据和动物健康的关键环境因子。应用适宜的垫料对实验动物标准化和保证实验动物质量有着重要作用。本文就实验动物垫料的原材料选择、质量控制指标及其灭菌与存储几个方面进行探讨。