5种白蚁基因组DNA随机扩增多态性研究

采用RAPD（Random amplified polymorphic DNA)技术对尖唇异白蚁（Heterotermes aculabialis)、黄肢散白蚁（Reticulitermes flaviceps)、扩头散白蚁（R.ampliceps)、细颚木鼻白蚁（Stylotermes angustignathus)和陇南树白蚁（Glyptotermes longnanensis)等5种白蚁的基因组DNA多态性进行了初步分析。在所用的20个随机引物中有4个引物能扩增出稳定的带型,5种白蚁6个群体共扩增出43条带,均为多态性片段;同一种类不同群体和同一群体不同品级间存在一定程度的多态性,但种间扩增片段差异显著大于种内差异。以UPGMA方法将扩增片段分布和共享度数据矩阵进行聚类分析,所得结果支持我国异白蚁属与散白蚁属合并的观点。     

草鱼基因组随机扩增多态性引物及多态性位点的筛选

为了建立草鱼基因组DNA多态性分析的指标体系,应用RAPD技术,从180条10碱基随机引物中筛选出了31条能扩增出多态性DNA片段的引物。用这31条多态性引物共扩增出了327条重复性好、带型清晰、分辨率高的谱带。扩增产物的片段大小范围在400—2000bp之间。单一引物扩增条带为5—14条。用这些多态性引物在草鱼基因组DNA中检测到了93个多态性位点,并对这些多态性位点上的等位基因频率进行了统计分析。这31条多态性引物和所检测到的93个多态性位点初步为草鱼基因组的多态性分析提供了可靠的分析指标体系。     

RAPD分子标记技术在高粱抗丝黑穗病研究中的初步应用

实验采用7050B(抗病)与TX622B(感病)杂交的F2感性个体的DNA及高粱丝黑穗病3073(抗病)、3049(感病)为试材.采用CTAB法提取高粱总DNA,用RAPD分子标记技术对其扩增的多态性及差异性图谱进行分析.实验结果如下:通过对电泳电压、电泳时间及点样量的筛选,建立并优化了RAPD-PCR琼脂糖凝胶检测系统;筛选了90个RAPD引物,其中30个引物扩增出清晰的多态性谱带,用这30个引物对3073(抗病)、3049(感病)2种试材进行抗丝黑穗病基因的初步分析,有11个引物扩增出多态性谱带.     

常用近交系小鼠微卫星DNA多态性的分析研究

摘要：目的用微卫星引物对常用近交系小鼠进行遗传监测和DNA多态性分析。方法通过Genome Database选 取位于小鼠不同染色体上的15个微卫星位点,应用PCR扩增技术对近交系小鼠C57BL／J、DBA／2、C3H、BALB／e、 129、FVB、SCID进行微卫星DNA多态性的分析。结果15个微卫星位点除D8Mitll3、D13Mit88无扩增条带外,其 余13个微卫星位点引物对七种近交系小鼠均有稳定扩增,同一品系不同个体之间表现为单态性;不同品系个体之 间表现为多态性。结论所用微卫星位点具有信息含量高、分布广、扩增稳定、高度多态性的特点,各位点PCR的 稳定扩增,依其DNA多态性的特点来判定各品系间的遗传差异,是一种准确客观、方便快速的遗传监测方法。     

安徽省毫州地区黄牛群体遗传多样性研究

利用随机扩增多态DNA技术对安徽省毫州地区黄牛种群进行了DNA多态性检测,以期了解该地区黄牛群体的遗传变异,进而探讨分子遗传标记在家畜小群体保种方案中的应用.计算了多态性引物在个体间的平均带纹等位片段频率、平均带纹等位片段杂合度和遗传多样性指数,并作分子亲缘关系聚类分析.该地区黄牛种群扩增等位基因片段的遗传杂合度比较高.     

利用RAPD标记技术对刺槐属（Robinia）种间亲缘关系的分析

用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对刺槐属(Robina)内5种植物进行基因组DNA多态性分析.共选用22个10 bp随机引物扩增出212个DNA片段,进行种间遗传关系分析.片段大小在100～2 200 bp之间,其中多态性谱带为183条,多态率为86.3%;利用UPGMA进行遗传距离计算的结果表明,刺槐、毛刺槐和香花槐分属刺槐属的三个种,红花刺槐和龙槐是刺槐的变型.首次在DNA水平上证明香花槐为刺槐属的一个独立种,且与毛刺槐的亲缘关系较近.为刺槐属植物亲缘关系和系统分类建立了新的分子学证据.     

长豇豆品种资源的RAPD分析

从30个随机引物中筛选出23个有效引物,共得到140条多态性带.实验平均每个引物扩增6.13条带,多态性条带数为6.09条.平均每个品种显示多态性扩增带64.35条(变幅为26~82),其变异系数为15.62%;平均每条带出现的品种次数为18.39个(变幅为1～39),频率为0.46(变幅为0.30~0.98),其变异系数为71.45%.品种间RAPD扩增带数目有别,其位点变异更大,说明供试品种间DNA序列存在不同程度差异,为根据DNA指纹有效判别品种间遗传差异提供了可能性.根据长豇豆品种DNA分子RAPD系统树图,可将长豇豆品种分为5个品种群,可弥补根据形态性状异同来判别品种的不足,揭示了由于自然和人工选择可遗传性状变异积累、地理隔离歧化和人工杂交强化基因重组等共同作用而形成的品种基因组差异的现实,也启示着品种亲缘关系确定和品种选择选配在成功改良品种中的重要性.     

晋产北柴胡试管植株的RAPD分析

以植物组织培养技术建立的9种晋产北柴胡(Bupleurum chinense DC.)试管植株为材料,用CTAB法提取北柴胡试管植株叶片的总DNA,以随机引物进行非特异性扩增,计算了遗传相似系数与遗传距离,并进行了聚类分析.从20条随机引物中挑选出3条扩增条带清晰、重复性好的引物OPC-8、OPD-8和OPE-10,共检测出22条DNA谱带,其中多态性条带18条(占82%).结果表明,9种北柴胡试管植株间均存在不同的遗传差异,根据绘制的聚类图可将9种不同类型的北柴胡聚类为4组.说明RAPD多态性分析从分子水平上一定程度反映出不同类型晋产北柴胡之间的遗传多态性.     

松属树种种苗鉴定中AFLP指纹技术的研究

AFLP(扩增片段长度多态性)标记技术是高效而可靠的标记技术之一，特别对于那些基因组序列信息很少的物种更为有效。笔对基因组较大的松属树种的AFLP实验程序进行了优化，提供了松树树种AFLP分析中DNA酶切、引物连接、预扩增及选择性扩增的优化实验程序。结果显示．预扩增反应中利用选择碱基数不同的预扩增引物(E/M 1，E／M-2)制备的模板对后续的选择性扩增结果没有显影响；在选择性扩增反应中，对碱基数目选择进行了细致的优化．分别测试了15个E-3M-3引物组合，6个E 4/M 3引物组合及15个E 3/M 4引物组合。对于有相同选择碱基数的引物．扩增结果随选择碱基的组合不同而有较大差异。据总的扩增结果发现，选择碱基增加时．扩增谱带数明显减少，谱带清晰度增加，即当选择碱基增加到E引物末端时(M十4／E 3)，大多数引物组合的扩增谱带数要比选择碱基增加到M引物末端(E 3/M 4)的引物组合扩出的谱带数少且带型清晰。总体来看，E 4/M 3的引物组合比较适合于松属树种的AFLP分析。笔还利用单株树种子的胚乳组织对AFLP标记的遗传方式进行了研究，在所用的两个引物组合获得的标记中，约有30％左右的分离标记．分离标记中偏分离比例约为6％。另外．选用3个松属树种对选出的14个AFLP引物组合进行的验证显示，这些组合在不同种间均获得了较好的扩增结果．说明在不同松属树种中筛选出的引物组合可以为其它松属树种AFLP分析引物组合的选择提供借鉴。     

RAPD技术在罗汉松性别辨别中的应用

部分植物（包括不少濒危物种）是雌雄异株，且在非花期仅凭形态学特征难以辨别其性别；这给品种改良、植物保护工作都带来了麻烦，以罗汉松（Podocarpus macrophyllus(Thunb.)D.Don)、短叶罗汉松（Podocar、pus macrophyllus Var.maki Endl）为具体实验材料，就RAPD技术在植物性别判断方面进行了尝试，在筛选了340种随机引物后，发现其中23种引物的产物有良性的多态性；最终筛选到了可以扩增出与性别相关的特异性条带的引物P20，在这基础上对表现出多态性的RAPD产物进行了UPGMA聚类分析，观察到各样本在遗传多态性上，性别间的差异大于变种与原种间的差异，同时还对单引物、双引物的RAPD结果进行了对比。     

马氏珠母贝与解氏珠母贝的随机扩增多态DNA分析

用OPM组20种碱基随机引物对采自海南洋浦的马氏珠母贝（Pincada martensii）和解氏珠母贝（P.chemmitri）天然群体进行RAPD分析,其中6种引物扩增有效,这6种引物对马氏珠母贝和解氏珠母贝的总扩增带数分别为52条和58条。每一引物的扩增带数为3～16条,同一引物对两种贝类的扩增带数不同（OPM19B除外）,对两贝类的扩增带型也有较大差异。群体内的各个个体（实验个体为10个）RAPD扩增带谱全部呈多态,表明在同一群体中,各个体存在着明显的个体特征带,由于样品数量及引物数均少,2种贝类各自种群的共同特征尚未能确定。     

5种瓢虫酯酶同工酶种间及种内变异的比较研究

采用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳的方法分析了５种瓢虫、异色瓢虫４个型及七星瓢虫个体的酯酶同工酶．结果表明，种间的酶谱差异明显，每个种都有自己独特的谱型，彼此易于区分；异色瓢虫型间的主带酶谱相似，但总酶带数差异较大；七星瓢虫个体间的酶谱差异较小．     

茄子雄性不育株和可育株的胞质DNA和核DNA差异分析

以茄子(Solanum melongenaL)雄性不育株“正兴1号”(S)和可育株(F)的总DNA为模板,对60个随机引物进行了筛选,找到5个其RAPD(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)扩增产物在茄子雄性不育系和对照材料间存在稳定差异的引物．将该5个引物同时扩增总DNA、核DNA和线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)．以总DNA为模板时得到多态性片段9个,以核DNA为模板时得到5个,以mtDNA为模板时得到9个．以总DNA为模板时得到的9个扩增片段中,有5个在总DNA和mtDNA中同时出现,而在核中没有出现,即认为来自mtDNA,这5个片段中,有4个来自可育株,1个来自不育株,说明不育株和可育株在mtDNA上存在差异;有4个片段同时出现在以总DNA和核DNA为模板的扩增中,但在以mtDNA为模板的扩增中却没有出现,认为是来自核DNA,这4个片段中,有3个来自不育株,一个来自可育株,说明可育株和不育株在核DNA上也存在差异．结果初步表明：新发现的茄子雄性不育可能是核质相互作用所引起．     

六种蝗虫基因组DNA多态性的RAPD标记研究

运用随机扩增多态 DNA技术对斑翅蝗科 Oedipodidae中三属六种蝗虫基因组DNA进行了多态性比较 ,共扩增出 2 2条特异性片断 ,分子量大小为 650～ 1 990 bp之间 ,并根据各种间片段共享度构建了 UPG聚类关系图 .研究结果表明 ,大垫尖翅蝗和甘蒙尖翅蝗的片段共享度为 0 .375;红翅皱膝蝗和鼓翅皱膝蝗的片段共享度为 0 .2 86;亚洲小车蝗和黄胫小车蝗的片段共享度也为 0 .2 86     

山羊草四个组高分子量麦谷蛋白亚基组成分析

利用SDS-PAGE技术对山羊草属18个种的46份材料进行高分子谷蛋白亚基电泳分析．18个种各电泳出2～5条带，共有24种不同的电泳条带，26种不同的麦谷蛋白亚基类型，每个种有1～3种类型．山羊草与小麦的麦谷蛋白亚基存在着较大的差异，山羊草属中各种间在高分子量麦谷蛋白亚基组成与其亚基的电泳迁移率方面也存在广泛差异．     

富钾植物DNA导入早稻变异后代的RAPD分析

应用花粉管通道法和浸种法将两种富钾植物空心莲子草和商陆DNA导入到不同的水稻品种中,结果在其后代产生了广泛的变异,并从中筛选出耐低钾的变异材料。应用PCR技术对其中耐低钾的4个变异材料进行了RAPD分析。结果表明,所用100个随机引物中有7个引物在受体和变异后代间扩增出了多态性产物。后代和受体的相似系数均在90%以上,而与供体的相似系数只有6%以下,其中有三个引物的扩增产物中出现了供体的特异性带。这说明空心莲子草和商陆DNA导入水稻后确实引起了水稻基因组结构的变化,同时也为变异后代所发生的生物学性状的改变提供了直接的分子证据。     

新疆主要梨品种亲缘关系的分子标记分析

为了分析新疆主要梨品种间的亲缘关系，从160个随机十聚体引物中筛选出12种RAPD引物分析18份材料，共扩增133条带，平均每个引物扩增约11条带，其中14条带为所有材料的共有带，有119个多态位点(占89．47％)，Nel相似系数在0．5～0．723，用PHYLIP构建UPGMA、NJ树，认为：1)对选用的形态学经典分类已较明确的新疆梨、白梨、砂梨、西洋梨、秋子梨，RAPD数据完全与其相符；2)几个芽变间高度相似；3)杂种新梨1号与砀山梨、杂种新梨6号与香梨、杂种早酥梨与苹果梨分别并类；4)苹果梨独立于供试的5个种之外，建议将该品种上升为种一级阶元；5)库尔勒香梨归属于新疆梨。     

林木RAPD分析及实验条件的优化

随机扩增多态分子标记是目前林木遗传研究中使用最为广泛的一种分子标记,作者对影响ＲＡＰＤ实验的因素进行了分析和探讨,确定了一针对林木进行ＲＡＰＤ分析的实验程序。根据该程序,可以快速确定ＲＡＰＤ实验的理想条件,获得ＲＡＰＤ反应的良好重复性。     

萱草属野生资源遗传距离和多态性分析

以萱草属的9个野生种和1个变种为材料,应用ISSR-PCR分子标记技术,对野生种间的亲缘关系和多态性进行了研究.从123条ISSR通用引物中筛选出了10条扩增产物清晰且多态性高的引物,对实验样本进行扩增,共产生了218条条带,多态率为100%,野生种间遗传多态性丰富.采用TFPGA数据分析软件,计算出Nei's相似系数和遗传距离,构建亲缘关系树状聚类图.野生种之间的遗传距离为0.0187～0. 4941,种间遗传差异明显.其中,北黄花菜与黄花菜的遗传距离最小,矮萱草与黄花萱草之同的遗传距离最大.亲缘关系聚类图显示各种被聚为4组:北黄花菜、黄花菜、萱草、小萱草、重瓣萱草为一组;西南萱草、折叶萱草和小黄花菜聚为另一组;黄花萱草和矮萱草各为一组.因此,矮萱草与其他种间亲缘关系最远;黄花萱草其次;黄花菜与北黄花菜亲缘关系最近;萱草、小萱草、重瓣萱草亲缘关系接近;西南萱草与折叶萱草、小黄花菜亲缘关系接近.