一株鸡副粘病毒的分子特性研究

应用RT-PCR技术对新城疫病毒(NDV) Y98株的F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定,并与多株已报导的NDV参考株相应片段进行序列比较,经遗传基因进化树分析后,首次报道了基因Ⅶ型NDV分离株在中国大陆的存在.     

新城疫病毒F 蛋白七肽重复序列（HR）三螺旋HR212蛋白的抗体抑制病毒和细胞融合

膜融合是囊膜病毒侵染过程中的一个关键步骤,新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)中两个高度保守的七肽重复序列—HR1和HR2是病毒膜融合过程中的重要功能结构域,在膜融合不同时期表现出不同的构象,因此可能是产生中和抗体反应的潜在的靶目标．作者曾发现HR2多肽和稳定的三螺旋蛋白HR2-HR1-HR2(HR212)能够抑制新城疫病毒(NDV)与细胞的融合．文中证实HR212蛋白在家兔中能引发很强的免疫反应,所产生的抗体可识别HR1和HR2多肽序列,并能抑制NDV和鸡红细胞的血凝反应,以及抑制病毒和细胞的融合．研究结果说明NDV HR212复合体在作为病毒和细胞融合的抑制物的同时,所产生的抗体也可以阻断病毒的侵染．     

近十年中国新城疫病毒F蛋白氨基酸变异分析

为了研究近十年来中国发现的新城疫毒株的致病性,我们选取2000—2011年间在中国发现的主要为Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ5种基因型的NDV,对其F蛋白氨基酸变异情况进行了分析．结果表明：中国的新城疫病毒的不同基因型的F蛋白氨基酸均出现了不同的变异,不同基因型相同的位点也发生了变异,这些变异造成新城疫病毒的爆发流行．因此,本文为研究NDVF蛋白与其致病性的关系提供了理论依据．     

NDV核心抗原重组杆状病毒转移载体的构建

F和HN蛋白是新城疫病毒(NDV)中两种具有抗原性的表面糖蛋白．对NDV中国强毒株F48E8的F和HN基因进行了全长核苷酸序列分析．F基因的长度为1662bp，编码553个氨基酸，糖基化位点与已知的其他株系的位点相同；HN基因全长1904bp，编码571个氨基酸，其中第5个糖基化位点(第500～502个氨基酸)由NPT突变成NPV．为了便于在杆状病毒中表达，将F和HN基因的核心抗原区通过PCR扩增，并成功地克隆进杆状病毒转移栽体中，为利用杆状病毒表达系统生产抗新城疫病毒的基因工程疫苗打下基础．     

新城疫病毒HB92株NP基因序列测定和分析

对NDV HB92株NP基因进行了序列测定和分析．结果显示，NDV HB92株NP基因全长1744个核苷酸，开放阅读框共1470个核苷酸，编码489个氨基酸；与其他10株NDV NP基因核苷酸同源性为88．3％～99．1％，氨基酸同源性为91．0％～98．9％；但HB92株与其亲本株QV4的核苷酸和氨基酸同源性只有90．3％和95．0％，不如与弱毒和中毒株的高；系统进化分析表明，HB92株与弱毒和中毒株的进化关系更近．以上结果表明，HB92株NP基因在序列上已远离无毒株而趋于向弱毒和中毒株进化．     

新城疫病毒TL1株P、NP、L蛋白基因表达载体的构建及鉴定

将新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM-Teasy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,命名为pCI-P、pCI-NP、pCI-L,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确.纯化后的重组质粒单独转染BHK-21细胞,经间接免疫荧光试验检测到了P、NP、L蛋白的表达.新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因的克隆成功,为即将进行的新城疫病毒的反向遗传操作奠定了基础.     

中国部分地区新城疫病毒的分子流行病学研究

选取1994年以来从中国部分地区分离的8株新城疫病毒（NDV）野外毒株,用反转录聚合酶链式反应（RT－PCR）技术扩增其F基因重要的功能区片段,同时进行克隆和序列测定,构建NOV的遗传进化树,分析其遗传关系。结果表明：所分离的毒株在分裂位点的氨基酸顺序均相当于NOV的强毒株。通过遗传进化树分析表明8株分离株中有7株为基因Ⅶ型新城疫病毒所引起的新城疫在国内呈流行趋势。     

羊口疮病毒新疆野毒株SHZ1 B2L和F1L基因的克隆及遗传进化分析

为了研究羊口疮病毒(ORFv)新疆野毒株的遗传进化情况,参照GenBank公布的ORFv B2L和F1L基因序列,设计特异性引物,对ORFv SHZ1新疆野毒株B2L和F1L基因进行PCR扩增,克隆、测序后进行遗传进化分析。结果表明:新疆野毒株SHZ1与GenBank公布的不同地域的17个流行株相比,B2L基因核苷酸同源性为97.28%～98.86%,推导氨基酸同源性为88.65%～90.50%;F1L基因核苷酸同源性为94.56%～97.07%,推导氨基酸同源性为93.82%～95.88%。基于B2L基因的遗传进化树分析发现,SHZ1株B2L基因与我国现用疫苗株B2L基因亲缘关系较近;而基于F1L基因的遗传进化树显示,SHZ1株与意大利分离株的亲缘关系最近。本研究提示ORFv SHZ1株可能是国外流行株与疫苗株重组后产生的一个变异株。     

新城疫病毒分子生物学研究进展

新城疫是由新城疫病毒引起的极易传染的毁灭性疾病.由于该病发病急、致死率高,对养禽业的发展构成了严重威胁,所以被世界动物卫生组织（OIE）定为A类烈性传染病.本文概述了新城疫病毒的基因结构与功能及基因分型等问题.     

湖南省鸽新城疫病毒的分离与鉴定

用SPF鸡胚从疑似鸽ND病鸽群中分离到一株病毒,根据HA、HI及病毒中和试验结果表明该分离毒为鸽NDV。其生物学特性ICPI为1.38,IVPI为1．0,MDT为99．8h,表现出与鸡NDV不同的生物学特性。     

鸡新城疫水－油－水型活性复乳的研制和免疫研究

水－油－水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）型活性复乳是将油包水初乳（Ｗ／Ｏ）进一步分散在水相中经过二次乳化，使用时并配以新城疫弱毒疫苗联合制成。采用透析法测定复乳的形成率分别为９５．０％，８９．３％，８８．０％和８４．４％，雏鸡免疫后４ｄＨＩ抗体即明显升高，井持续２个月以上；对育成鸡的加强免疫持续期达１４个月，滴鼻或肌注攻毒全保护，证实新城疫Ｗ／Ｏ／Ｗ活性复乳已达到实用要求。     

鸡新城疫水-油-水型活性复乳的研制和免疫研究

水－油－水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）型活性复乳是将油包水初乳（Ｗ／Ｏ）进一步分散在水相中经过二次乳化，使用时并佤以新城疫弱疫苗联合制成，有杉透析法测定复乳的形成率分别为９５．０％，８９．３％，８８．０％和８４．４％，雏鸡免疫后４天ＨＩ抗体即明显升高，并持续２个月以上，对育成鸡的加强免疫持续期达１４个月，滴鼻或肌注攻毒全保护，实新城疫Ｗ／Ｏ／Ｗ活性复乳已达到实用要求。     

Feasibility Study of Aluminum Hydroxide Sol as Adjuvant to Prepare Stable Vaccine Using Newcastle Disease Virus as a Model

Aluminum hydroxide sol (consisting of aluminum hydroxide nano-particles) prepared by a hydrothermal method was used as nano-aluminum adjuvant adsorbed the inactived Newcastle disease virus (NDV). The zeta potential of aluminum hydroxide colloidal particles,the inactivated NDV and the nano-aluminum adjuvant NDV are +48.16 mV,?13.8 mV and +39.97 mV,respec-tively. The nano-aluminum adjuvant vaccine was transparent and stable without precipitate,whereas the conventional aluminum ad-juvant vaccine was turbid and a white precipitate was visible soon. The hemagglutination inhibition (HI) titers of the nano-aluminum adjuvant group were generally higher than those of the conventional aluminum group except the titer on day 29. The results show that the nano-aluminum adjuvant has better stability and higher levels of antibodies for a longer time than the conventional aluminum adjuvant.     

半胱胺对鸡十二指肠中肥大细胞数量的影响

84只1日龄小公鸡,分为四组,分别为对照组、新城疫弱毒疫苗免疫组(ND组)、饲喂半胱胺的试验组(CS组)以及饲喂半胱胺后,再用新城疫弱毒疫苗进行消化道粘膜的试验组(CN组).应用甲苯胺蓝染色技术研究了十二指肠中肥大细胞数量的变化.结果显示:新城疫疫苗首免后第三周,CN组十二指肠中肥大细胞数量比ND组明显增加(P0.01);首免后第五周,各试验组十二指肠中肥大细胞的数量均比对照组多,尤其是CN组,可能因为个体差异较大,各组间并无显著差异.本试验的结果提示,肥大细胞的数量可能反映了消化道粘膜的免疫水平.     

以减毒猪霍乱沙门菌为载体的抗O型口蹄疫病毒重组活菌苗在家兔体内免疫应答的初步研究

将含有口蹄疫病毒疫苗基因的真核表达质粒pBO1经过中间宿主鼠伤寒沙门菌LB5010修饰后,电转化到减毒的猪霍乱沙门菌C500中,构建成抗O型口蹄疫病毒的重组活菌苗pBO1／S．cho．血清凝集实验验证,筛选到的转化菌仍然具有猪霍乱沙门菌的血清学特性,即具有免疫原性．采用口服方式免疫家兔,检测重组菌在家兔体内诱导的免疫应答．家兔免疫后8周,分离脾脏T细胞,检测T细胞增殖情况．结果显示,口服DBO1／S．fho的家兔T细胞在FMDV特异性抗原的刺激下有明显的增殖反应,刺激指数SI〉11;免疫后2周和8周分别取家兔静脉血,用液相阻断ELISA法检测血清中针对FMDV的特异性抗体,pBO1／S．cho组家兔产生的抗体效价为1／32。     

鸡新城疫病毒HN蛋白多表位抗原的表达与免疫原性研究

有效抗原及表位的预测和筛选是疫苗研究的基础,在对鸡新城疫病毒HN蛋白抗原表位预测的基础上,对多表位抗原进行表达与免疫原性测定。根据生物信息学表位预测方法获得的家禽新城疫病毒抗原表位,利用PCR技术合成基因,构建pBVIL1-HN重组载体,转化大肠杆菌HB101,进行基因工程表达;经纯化蛋白后免疫小鼠,抗体滴度用酶联免疫吸附方法测定,确定抗原的免疫原活性。结果表明,多表位抗原基因经测序结果正确,融合基因在大肠杆菌得到高效表达,电泳纯融合多表位抗原经三次免疫得到抗血清,抗体滴度为1：8000。鸡新城疫病毒HN蛋白多表位抗原得到高效表达,且具有良好的免疫原性。     

新城疫病毒TL1株的分离鉴定及部分生物学特性研究

新城疫是引起很多禽类发病并致死的一种烈性传染病．本研究通过对内蒙古分离株TL1株应用SPF鸡胚传代、电镜形态学观察、HA及HI试验、毒力鉴定、血凝解脱及血凝素热稳定性试验、动物感染试验等进行了研究。发现TL1株属于新城疫病毒强毒株,血凝素热稳定性较差,属快速血凝解脱型．     

Antibodies against analogous heptad repeat peptide HR212 of Newcastle Disease Virus inhibit virus-cell membrane fusion

Membrane fusion is a key step in enveloped virus entry. Highly conserved heptad repeat regions (HR1 and HR2) of Newcastle disease virus (NDV) fusion protein (F) are critical functional domains for viral membrane fusion. They display different conformations in the membrane fusion states and are viewed as candidate targets for neutralizing antibody responses. We previously reported that an analog of heptad repeat peptides HR2-HR1-HR2(HR212) and HR2 could inhibit NDV induced cell-cell membrane fusion. Here, we show that HR212 can induce the production of highly potent antibody in immunized rabbits, which could recognize full length peptides of both HR1 and HR2, and inhibit NDV hemagglutination and NDV entry. These suggest that either HR212 or its antibody could be an inhibitor of virus-induced cell-cell membrane fusion.