悬浮培养红豆杉细胞中影响细胞生长和紫杉醇产量若干因素的研究进展

综述了悬浮培养红豆杉细胞生长状态、植物生长调节因子、糖分、氨基酸、无机盐、ｐ Ｈ值及光照等因素对细胞悬浮培养生产紫杉醇的作用,为探索生产紫杉醇的最适条件和大规模细胞培养（生产紫杉醇）提供理论依据     

南方红豆杉细胞悬浮培养动力学研究

考察了南方红豆杉悬浮培养细胞生长的动态变化，以及各种理化因子对细胞生长和紫杉醇生产的影响。实验结果表明：紫杉醇的积累与细胞生长不表现为部分相关性，在生长的延迟期紫杉醇积累量最高，达到0.1873mg/g。     

红豆杉细胞聚集体悬浮培养生产紫杉醇

建立了中国红豆杉(Taxuschinensis)细胞聚集体两步法悬浮培养生产紫杉醇的培养体系.红豆杉细胞于含LH1g/L,NAA0.1mg/L,2,4-D0.5mg/L及6-BA0.8mg/L的细胞聚集体形成的培养基中生长并形成聚集体,10d后转入生产培养,较大细胞聚集体的生物量比和紫杉醇产量分别较对照组提高了53.7%和82.1%;提高细胞聚集体的生物量比能显著增加紫杉醇产量.四种基本培养基中B5最适合诱导细胞聚集体的形成.生长培养12d后细胞悬浮培养物按1∶1(体积比)直接转入生产培养对细胞生长、细胞聚集体和紫杉醇形成最有利.在100μmol/L茉莉酸甲酯作为诱导子下本体系紫杉醇产量较对照组提高了一倍.     

东北红豆杉细胞悬浮培养研究

东北红豆杉（Taxus cuspidata sieb et zucc)幼茎诱导的愈伤组织经多次继代培养，选择生长旺盛，紫杉醇含量高的愈伤组织进行细胞悬浮培养，建立了东北红豆杉细胞悬浮系，同时，对影响愈伤组织进行细胞悬浮培养，建立了东北红豆杉细胞悬浮系，同时，对影响愈伤组织继代培养及细胞悬浮培养的条件进行了研究，确定了适合愈伤组织生长的条件以及影响细胞悬浮培养的主要因素。     

红豆杉细胞在反应器中培养动力学的研究

应用气升式生物反应器及搅拌式生物反应器悬浮培养红豆杉细胞,得到细胞生长和紫杉醇合成动力学曲线.经过反应器动力学的比较,结果表明红豆杉细胞较适于在机械搅拌式反应器中培养.     

固定化微环境对南方红豆杉细胞生长

研究了固定化微环境对南方红豆杉细胞生长和紫杉醇合成的影响，结果表明：固定化细胞停滞期缩短，细胞膜脂氧合酶活性和脂过氧化产物含量远远高于悬浮细胞，同时苯丙氨酸解氨酶活性显著增加，微环境溶液内紫杉醇含量与悬浮细胞有显著性差异. 研究表明固定化微环境能促进红豆杉细胞紫杉醇含量增加但对细胞膜脂产生了过氧化.     

稀土和氮源对南方红豆杉细胞生长及紫杉醇积累的影响

研究稀土和氮源在 B5培养基上对南方红豆杉细胞悬浮培养时的影响 .结果表明 :在所研究的 3种稀土元素中 ,1× 1 0 - 5mmol/L的 Yb Cl3,最利于细胞生长和紫杉醇的积累 ,紫杉醇含量达1 .3 46mg/L.氮源总浓度 (包括 NH4 +和 NO3- )为 2 7mmol/L,NH4 +和 NO3-比例为 2 /2 5 ,有利于南方红豆杉细胞生长和紫杉醇的合成 .     

BHK21细胞悬浮培养的驯化和质量评价

目的:将贴壁培养型BHK21细胞驯化成适合口蹄疫疫苗生产的无血清全悬浮培养型细胞.方法:引进贴壁培养型BHK21细胞,通过改变培养液和降低血清的方法进行悬浮培养的驯化,对驯化得到的悬浮培养型细胞进行生物学检定.结果:引进的BHK21细胞低血清驯化培养22代可悬浮生长,用无血清培养基培养10代后形态趋于稳定生长变快.贴壁和悬浮细胞均有致瘤性,对口蹄疫病毒敏感,适应生物反应器高密度培养,且没有外源物污染.结论:驯化的BHK21细胞可用于口蹄疫疫苗的研究和生产.     

细胞悬浮培养制备紫杉醇的研究进展

紫杉醇具有很强的抗癌活性,药用价值很高.综述了生物合成、微生物发酵和细胞悬浮培养制备紫杉醇的研究进展,重点阐述细胞培养过程中外植体的选取、培养基的组成和诱导因子等对紫杉醇产率的影响.     

紫杉醇生物合成与营养物质消耗的相关性

为利用现代生物技术生产紫杉醇,研究细胞悬浮培养过程中紫杉醇的生物合成,研究了细胞生长与培养液中主要营养物质的消耗情况。在Gamborg'sB5培养液中加入诱导子,对本实验室诱导筛选出的东北红豆杉B10细胞进行悬浮培养。结果发现,在诱导子的作用下,细胞内紫杉醇的含量在4d内大幅度提高,其中主要是促进了紫杉醇的两种前体化合物向紫杉醇的转化;细胞内高含量紫杉醇影响细胞的生长,可以采用两段培养法来提高紫杉醇的产量;同时,培养液中蔗糖、氮、磷、钾、镁等主要营养物质的消耗与紫杉醇的生物合成也存在密切的联系。     

几种释放因素对紫杉醇合成与释放的影响

比较研究了几种释放因素对红豆杉细胞生长和紫杉醇合成与释放的影响,结果表明,在中国红豆杉细胞悬浮培养过程中,在细胞生长对数期（14d)加入φ＝5％二甲亚砜及0．2mol/L甘露醇,能显著提高紫杉醇的合成及释放,紫杉醇总产量达到16mg/L,在细胞生长在对数期（14d)加入0．04mol/L氯化钠时,紫杉醇总产量达到7．3mg/L,在细胞生长对数期（14d）加入2mg/L硫酸铈铵时,紫杉醇总产量达到24mg/L。     

种子细胞的生长时相和紫杉醇生产的关系研究

处在生长周期不同时相的红豆杉细胞作为种子细胞,接入含来自红豆杉树皮的真菌诱导子的生产培养其中,紫杉醇的生产和种子细胞的生长时相有明显的对应关系。来自对数生长后 稳定前期的细胞,胞内紫杉醇分别为２６．８μｇ．ｇ＾－１和５８．１μｇ．ｇ＾－１;来自稳定后期的细胞对诱导子反应最敏感,     

中国红豆杉悬浮细胞固定化培养生产紫杉醇

对海藻酸钠包埋法固定中国红豆杉悬浮细胞的条件进行研究,建立了一套合适的固定化操作条件,即海藻酸钠浓度为３０ｇ／Ｌ,聚乙烯醇（ＰＶＡ）浓度为８０ｇ／Ｌ,ＣａＣｌ２浓度为２０ｇ／Ｌ,包埋密度为０．２ｋｇ／Ｌ,接种密度为０．１ｋｇ／Ｌ．在此基础上,对中国红豆杉细胞固定化培养的培养基进行了优化,结果表明,从红豆杉树皮中分离出的真菌培养物作为诱导物能限制细胞生长,且明显促进紫杉醇合成,并诱导紫杉醇分泌到培养液中．在培养基中适量地添加前体亦能提高紫杉醇的产量．对红豆杉细胞固定化培养中紫杉醇合成与分泌进行了动力学研究．     

唐古特大黄细胞悬浮培养中的生理生化特性

目的 初步研究液体培养条件下唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.)细胞的生理生化特性.方法 以唐古特大黄子叶为材料,诱导和筛选愈伤组织,进行细胞悬浮培养.测定了细胞悬浮培养过程中的细胞生长、pH值和总蒽醌累积的动态变化,并研究了水杨酸(SA)对细胞生长和总蒽醌累积的影响.结果 培养细胞生长周期36d;细胞的增殖曲线呈"S"形;其培养液pH值先下降后回升;细胞中总蒽醌累积规律也呈"S"形曲线,在培养的第30天,细胞中总蒽醌可达到最大值.SA对细胞的生长和总蒽醌累积有影响,0.1mg/L和1.0mg/L SA促进细胞的生长和总蒽醌的积累.结论 细胞悬浮培养过程中的总蒽醌累积和细胞生长呈正相关性.     

中国红豆杉悬浮细胞培养动力学的研究

考察了中国红豆杉悬浮细胞培养中细胞生长的动态变化，培养基中主要营养成分的消耗，细胞的氧消耗速率，以及次级代谢产物紫杉醇的生产状况。实验结果表明，细胞比生长速率为０．１２９／ｄ，紫杉醇的积累与细胞生长呈部分相关在，培养静止期达到高峰。     

伊贝母细胞悬浮培养的研究

研究了伊贝母细胞悬浮培养过程中接种量、培养方式和激素浓度对细胞生长的影响；测得细胞生长周期为１９～２４ｄ；分析了培养液的ｐＨ、蔗糖浓度、电导率和Ｄｏ变化的原因。鉴定了悬浮培养细胞中含有生物碱，其总生物碱和西贝素含量均高于栽培鳞茎。     

胀果甘草细胞的悬浮培养

切取胀果甘草(Glycyrrhiza inflate)无菌苗的子叶、下胚轴和根段外植体进行愈伤组织的诱导和悬浮细胞培养,建立了胀果甘草细胞悬浮培养体系,测定了悬浮培养细胞的生长曲线,并且研究了接种量、条件培养和激素组合对胀果甘草悬浮细胞生长的影响.结果表明子叶来源的愈伤组织最适合作为胀果甘草细胞悬浮培养的起始培养物;悬浮培养的最佳接种量为 35 g/L;条件培养基的最佳用量为总培养体积的1/3;最适合胀果甘草悬浮细胞生长的培养基是附加了 NAA 1.0 mg/L + KT 0.5 mg/L 激素组合的 MS 培养基.     

不同培养方式的红豆杉细胞悬浮培养比较研究

进行了批式培养与补料批式培养下的细胞生长及紫杉醇合成动力学比较研究，并优化了红豆杉细胞补料批式培养条件。在批式培养过程中紫杉醇合成在24d达到最大，为4.3mg/L。补料批式培养延长了细胞的生长时间，大幅度提高了细胞干重及紫杉醇的含量。培养条件优化后，最高紫杉醇含量达至11.3mg/L。     

不同光照对丹参悬浮细胞的生长和生理效应

以丹参幼嫩叶片为材料诱导和筛选愈伤组织,进行细胞悬浮培养.初步探讨了在光照和黑暗条件下,悬浮培养的丹参细胞生长和生理生化特性.结果表明：不同光照条件下,丹参悬浮培养细胞的生长周期均为30 d,细胞增殖率曲线呈“S”形;可溶性蛋白质含量、POD活性、SOD活性均在不同时间出现两个峰值,其变化趋势与细胞的生长势呈正相关.光照有利于丹参细胞悬浮培养,最佳继代培养时间为18 d到21 d,最佳收获期可延迟一周.     

光照对长春花悬浮细胞的生长和生理效应

以长春花幼嫩叶片为材料诱导和筛选愈伤组织,进行细胞悬浮培养.初步探讨了在光照和黑暗条件下,悬浮培养的长春花细胞生长和生理生化特性.结果表明:在光照条件下,长春花悬浮培养细胞生长周期均为27 d,细胞增殖率曲线呈"S"形;其生长势与可溶性蛋白质含量和SOD、POD活性呈现一定相关性.光照对长春花细胞的悬浮培养是有利的,最佳收获期为18 d到21 d.