生物素-链霉亲和素系统压电传感实时响应特性研究

生物素与链霉亲和素之间具有高度亲合力和高度特异性,将其用于压电传感研究,反映出了生物素-链霉亲和素系统的压电传感实时响应特性.分别讨论了体系pH对生物素与链霉亲和素吸附行为的影响,链霉亲和素包被浓度、包被时间、结合反应时间等因素对生物素-链霉亲和素结合实验的影响以及结合反应的特征.结果表明,pH=7.4时以100 μg/mL链霉亲和素包被8 h后效果最好;结合反应中,生物素的浓度在0.11～1.65μg/mL范围内,传感器的响应频率值与溶液浓度成线性关系.     

利用生物信息学数据及工具合成表达链霉亲和素基因

目的:人工合成表达链霉亲和素基因,制备链霉亲和素磁珠复合物用于核酸分离.方法:利用NCBI、BCM等提供的生物信息及软件工具,将链霉亲和素蛋白的基因进行密码子优化,并分割成互为重叠的小片段寡聚核苷酸链,采用化学和酶促合成相结合的方法合成编码链霉亲和素蛋白基因.将纯化的链霉亲和素通过偶联剂与带羧基的磁粒共价结合,用于快速...     

表面等离子体共振免疫传感的放大检测研究

表面等离子体共振免疫传感器是一类相对新型的免疫检测技术。将链霉亲和素-生物素系统用于表面等离子体共振免疫传感的信号放大,实时检测了人免疫球蛋白G(hIgG)的蛋白浓度。发生免疫反应的传感片和生物素化抗体反应后,传感片表面的一层生物素分子随后与链霉亲和素-生物素化抗体复合物中的链霉亲和素的活性位点发生亲和反应,从而使传感片表面特异健合的物质质量显著增加,大大提高了免疫检测的灵敏度和检测限。免疫反应经放大后,可检测0.005～10μg/mL浓度区间内的hIgG。     

梧桐花粉主要变应原的分离纯化

以离子交换和凝胶过滤层析对梧桐花粉变应原进行分离和纯化,采用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法（BSA-ELISA）测定其抗原活性,得到两个具高活性的单一变应原组分PT13和PT53。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它们的分子质量分别为20ku和18ku。     

基于蓝光光盘/光驱技术的生物分子嵌入式检测系统与仪器的研发

针对蓝光技术的数字化分子检测方法存在的结果分析依赖于电脑、不适用于现场应用的问题,开展了采用嵌入式开发技术的定量检测系统及仪器的研发。通过嵌入式系统移植、光盘质量诊断软件移植和数据处理程序开发,实现了生物光盘的自动化数据分析和设备的小型化与集成化。通过在蓝光光盘表面设计墨点阵列实验,横向分辨率达到100μm,表明了该检测系统的可行性。通过制备生物素-链霉亲和素的生物光盘,利用本系统实现了链霉亲和素的自动化定量检测,进一步验证了本系统的可靠性和用于生物分子检测的可行性。     

人骨肉瘤细胞适配体的早期筛选

目的体外随机合成单链寡核苷酸备选文库,以骨肉瘤U-2 OS完整细胞作为靶点,筛选出与其结合的高特异性、高亲和性单链DNA(ss DNA).方法将体外合成随机碱基序列的单链DNA文库与人骨肉瘤U-2 OS细胞相结合,收获与靶细胞结合的单链DNA,通过优化PCR条件进行大量扩增后,应用生物素-链霉亲和素亲和层析柱分离出正链DNA.结果以10,14以及18个循环时扩增ds DNA产物最理想;应用生物素-链霉亲和素磁珠分离法制备的正链ss DNA纯度高,可有效保证次级文库的筛选.结论应用Cell-SELEX技术可成功筛选早期ss DNA文库,为后续获得针对人骨肉瘤U-2 OS细胞的高特异性适配体奠定实验基础.     

黑啤中浑浊和泡沫蛋白性质初探

泡沫是啤酒的重要特征,泡沫蛋白是构成啤酒泡沫的骨架,泡沫蛋白的含量和性质在一定程度上决定了啤酒泡沫的质量。啤酒是一种成分复杂的胶体溶液,其稳定性较弱,啤酒在贮藏中极易产生浑浊沉淀,浑浊蛋白是构成啤酒浑浊的重要成分之一。以黑啤为原料,根据SDS-PAGE原理,按浓缩胶5%,分离胶12%,浓缩电压75V,分离电压120V,分离时间3h,分析啤酒泡沫蛋白和浑浊蛋白的分子量范围。结果表明:啤酒泡沫蛋白的分子量为42.4k Da和14.1 k Da,啤酒浑浊蛋白的分子量分别为47.72k Da、42.08k Da、36.57k Da、32.44k Da、28.02k Da,两者蛋白的分子量之间有一定交集。为进一步分析啤酒中浑浊活性蛋白与泡沫蛋白的相关性提供基础数据。     

脉孢霉纤溶酶的酶学性质研究

研究了脉孢霉纤溶酶的部分酶学性质,确定该酶由双亚基组成,亚基分子量分别为30000Da、15500Da,等电点为7.9±0.2,最适作用pH值为7.4,最适作用温度为50℃,在pH6.6～9和32～42℃时较稳定。     

人尿中IgG的时间分辨荧光免疫分析法：以铕标记链亲和素…

利用铕标记链亲和素作为标记物，建立了固相抗体竞争性的人尿中ＩｇＧ的时间分辨荧光免疫分析法，标准曲线范围０．６２５－４０．０ｍｇ．Ｌ。     

文冠果降血压肽的制备及其活性研究

以文冠果蛋白为研究对象,采用酶解法制备文冠果蛋白酶解肽,并对其体外抗高血压活性进行研究。以水解度为指标确定酶解条件。蛋白水解物经超滤得到分子量为1k Da,1~5 k Da和5 k Da 3个区段的多肽组分,测定其对血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)的抑制率。最佳酶解条件为:底物质量浓度40g/L,加酶量8%(质量分数)(碱性蛋白酶),酶解时间175 min,酶解温度55℃和酶解p H 9.0,此条件下水解度最高为22.97%;3种多肽组分中1k Da的ACE抑制率最高为83.43%,其半抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)为0.394 mg/m L。文冠果蛋白酶解多肽具有显著的体外抗ACE活性,可作为降血压肽的开发原料。     

基于GO-AuNPs@Ru(bpy)_3~(2+)的无标记型癌胚抗原电化学发光适配体传感器

纳米金(AuNPs)与联吡啶钌(Ru(bpy)_3~(2+))通过静电作用形成AuNPs@Ru(bpy)_3~(2+)纳米复合物.将该复合物组装在氧化石墨烯(GO)纳米片上,形成了可用于电化学发光检测的基底材料GO-AuNPs@Ru(bpy)_3~(2+).利用链霉亲和素(SA)分子可与4个生物素(biotin)分子相结合且二者的亲和力高的特点,再与识别元素相结合,实现了信号的放大.基于以上两点,利用适配体构建了无标记型适配体传感器,实现了癌胚抗原的灵敏检测.传感器的线性范围在1.0fg/L~10.0pg/L之间,检出限为0.4fg/L.将该方法成功应用于人血清样品中癌胚抗原的测定,RSDs不大于8.3%,回收率在80.0%~108.0%之间.     

Isochorismate synthase is required to synthesize salicylic acid for plant defence.

Salicylic acid (SA) mediates plant defences against pathogens, accumulating in both infected and distal leaves in response to pathogen attack. Pathogenesis-related gene expression and the synthesis of defensive compounds associated with both local and systemic acquired resistance (LAR and SAR) in plants require SA. In Arabidopsis, exogenous application of SA suffices to establish SAR, resulting in enhanced resistance to a variety of pathogens. However, despite its importance in plant defence against pathogens, SA biosynthesis is not well defined. Previous work has suggested that plants synthesize SA from phenylalanine; however, SA could still be produced when this pathway was inhibited, and the specific activity of radiolabelled SA in feeding experiments was often lower than expected. Some bacteria such as Pseudomonas aeruginosa synthesize SA using isochorismate synthase (ICS) and pyruvate lyase. Here we show, by cloning and characterizing an Arabidopsis defence-related gene (SID2) defined by mutation, that SA is synthesized from chorismate by means of ICS, and that SA made by this pathway is required for LAR and SAR responses.     

Decrement of catalase mRNA level after salicylic acid treatment

Using the barley catalase cDNA as a probe, the effects of salicylic acid (SA) on catalase activity and gene expression have bene studied. The data indicated that higher than 3.0 mmol/I, SA inhibited catalase activity to a large extent and Northern blot analysis demonstrated that the decrease in catalase activity coincided with a decrease in its mRNA level. The important role of SA in plant systemic acquired resistance (SAR) and its possible mechanism are discussed.     

水杨酸对锦绣杜鹃叶片中PAL、PPO及POD活性的影响

用不同浓度的水杨酸（SA）处理锦绣杜鹃植株,分析不同的SA处理时间杜鹃叶片苯丙氨酸解氨酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）等主要防御酶活性的变化。结果表明：水杨酸处理杜鹃叶片可明显诱导PAL、PPO、POD等防御酶活性的提高,其中50～100μg／mL浓度的SA对诱导杜鹃PAL、PPO、POD酶的活性影响最为显著,但受SA诱导的影响各不同,主要是在对防御酶活性的提高和表达时间上存在着差异,其中PAL受SA诱导后,活性提高最大,持续时间最长。     

松梢枯病防治新技术及其机理研究

水杨酸和多效唑预处理可以减轻湿地松梢枯病的发生、水杨酸的效果尤佳。病原孢子萌发试验证明，多效唑具有抑菌或杀菌作用，而水杨酸对病原孢子萌发及菌丝生长均无抑制作用。因此认为水杨酸处理后是通过增强湿地松的抗性来抑制梢枯病的发生。经水杨酸和多效唑处理后，嫩梢中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性明显上升。ＳＯＤ在湿地松抗梢枯病上可能起积极作用。较高浓度的水杨酸及阿斯匹林引起嫩梢苯丙氨酸解氨酶（ＰＡＬ）活性下降。说     

调控物质浸种对NaCl胁迫小麦幼苗生长抑制的缓解效应

研究了调控物质赤霉素(GA3)、矮壮素(CCC)、多效唑(MET)、脯氨酸(Pro)、黄腐酸(FA)和水杨酸(SA)浸种对NaCl胁迫下小麦幼苗株高、总根长、根活力、POD活性、MDA含量、脯氨酸含量及叶绿素含量的影响.结果表明,所试调控物质均表现缓解NaCl胁迫伤害的效应,其中CCC、MET、SA和Pro的效应更为明显.     

水杨酸对豌豆种子萌发的影响

以食荚豌豆--青荷9号的种子为材料,用10-200mg/L的水杨酸分别浸种12h和36h,观察豌豆种子萌发情况及其萌发过程中种子内可溶性糖和可溶性蛋白质含量及淀粉酶的活性.结果表明,用10-50mg/L水杨酸浸种12h及10mg/L水杨酸浸种36h对豌豆种子的萌发无显著抑制作用,且可提高种子的发芽指数.当水杨酸浓度增大,浸种时间延长时则抑制豌豆种子萌发.用水杨酸处理后种子内可溶性糖和可溶性蛋白质含量及淀粉酶活性的变化同种子的萌发趋势相似.     

UV-B预处理对拟南芥uvr8-2突变体响应干旱胁迫的影响

以拟南芥uvr8-2突变体植株为材料,研究UV-B预处理对植株响应干旱胁迫的影响以及植物激素在此过程中的作用.实验结果表明:从形态观察到生理指标,UV-B预处理显著提高了拟南芥uvr8-2突变体的干旱适应性,与野生型Ler的结果一致;UV-B预处理显著提高了拟南芥uvr8-2突变体抗氧化酶SOD、POD、CAT活性,抗氧化酶基因POD和CAT的表达量,以及植物激素ABA、JA、SA的质量分数,降低了细胞膜受损程度.由此推测:UV-B预处理诱导uvr8-2植株的干旱适应性中存在一条不依赖于UVR8的信号转导途径,即通过增加植物逆境响应激素ABA、JA和SA的质量分数,调控抗氧化酶基因CAT和POD表达和增强抗氧化酶活性,从而缓解干旱胁迫下拟南芥的叶片萎焉、相对含水量下降等现象.     

玉柏石松中甾体化合物对体外培养成骨细胞活性的影响

为研究玉柏石松中甾体化合物豆甾烷-3-酮-21-羧酸（SA）对体外培养小鼠成骨细胞系MC3T3-E1活性的影响,用Alamar Blue法检测了成骨细胞增殖率,碱性磷酸酶试剂盒检测了细胞中碱性磷酸酶活性,茜素红染色检测了成骨细胞矿化水平,荧光定量PCR检测了成骨细胞骨分化相关基因的表达.结果显示：8μmol/L和16μmol/L的SA处理细胞8 d能抑制成骨细胞碱性磷酸活性;处理细胞16 d能提高骨细胞矿化水平.SA抑制成骨早期分化相关基因（Runx-2和Osterix）的表达,促进骨基质蛋白OPN和骨重建相关转录因子（Jun-D,Fra-1和Fra-2）的表达.故SA具有促进骨折愈合的成骨活性,可能通过促进相关转录因子表达,骨折断面旧骨的吸收和骨基质钙化等方式完成.     

化学保鲜剂对马蹄莲切花抗氧化酶活性的影响

以马蹄莲切花为试材,研究含水杨酸（SA）的保鲜剂与含AgNO3和6-BA的2种传统保鲜剂对切花抗氧化酶活性的影响．结果表明：在整个瓶插过程中,所有处理的SOD活性变化的趋势均呈M型,经保鲜剂处理的各组均能在后期保持较高的SOD活性;经保鲜剂处理的各组CAT和POD的活性也有不同程度的提高,且保持在较高水平的时间也比较长．这说明3种化学保鲜剂能在一定程度上减轻活性氧对马蹄莲切花的破坏,但以0．5％蔗糖＋0．1Ca（NO3）,＋50mg／LSA最优．