反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＣＲ１）性的方法,提高化疗效。本采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡ＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＾＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的     

VP—16诱导的鼻咽癌细胞亚系多药耐受表型的研究

经ＶＰ－１６大剂量短暂冲击加递增低浓度诱导方法建立了鼻咽癌耐药细胞亚纱ＬＣＥ／ＶＥ,用ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＭ免疫荧光法检测了耐药基因ＭＲＰ和ｍｄｒ１在ｍＲＮＡ水平和蛋白质水平的表达,并用ＭＴＴ法测定了ＬＣＥ／ＶＰ对９种化疗药物的敏感试验,结果发现ＬＣＥ／ＶＰ细胞几ｍｄｒ１在ｍＲＮＡ水平均有表达,且前明显高于后,蛋白质水平的表达情况与ｍＲＮＡ水平相一致,ＬＣＥ／ＶＰ对９种化疗药物中的６种药物敏感程     

乙型肝为病毒（HBV）DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游,重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达,用纯化后的重组质粒直接注射用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼细内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体,ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合。     

乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游．重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达．用纯化后的重组质粒直接注射到ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体．ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

日本脑炎病毒（JEV）内蒙古分离株M73—1E基因的5′端？…

根据国外报道的ＪＥＶ（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）基因组全序列,针对ＪＥＶ Ｅ基因５′端设计合成一对特异引物,以日本脑炎病毒内蒙古分离株Ｍ７３－１ＲＮＡ为模板,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增,获得３６６ｂｐ的ＪＥＶ Ｅ基因ｃＤＮＡ片段。将此片段重组于质粒ｐＵＣ１９中,并转化大肠杆菌ＤＨ５α,经ＰＣＲ扩增,酶切及序列分析,结果表明ＪＥＶ Ｍ７３－１ ５′端１２６个核苷酸序列与ＪＥＶ日     

用PCR法检测人巨细胞病毒DNA

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测患者尿液中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ．结果表明，自行设计合成的引物位于ＨＣＭＶ基因组早期蛋白基因区，经ＰＣＲ仪扩增一段长４３０ｂｐ的特异序列片段，对正常人基因组ＤＮＡ或其它疱疹病毒ＤＮＡ无交叉反应．此法可检测出少至１０－１６ｇ（０．１ｆｇ）的病毒ＤＮＡ．通过对３５份尿液标本的检测，比较ＰＣＲ法和组织培养法的检测结果完全一致     

中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因的克隆及序列分析

根据小ＲＮＡ 病毒科（ Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ） 中病毒ＲＮＡ 所具有的结构特征, 采用ｍＲＮＡｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｃａｂｒｏｏｄ ｖｉｒｕｓ ＣＳＢＶ） 的ＲＮＡ, 并以之为ｃＤＮＡ合成的模板． 依据小ＲＮＡ病毒科中的脊髓灰质炎病毒结构蛋白基因序列设计了一对引物ＶＰ５和ＶＰ３ , 通过ＰＣＲ 扩增获得预期大小约为１ １００ ｂｐ的ＤＮＡ 片段, 将此片段克隆到ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体上并直接测序． 序列分析表明, 该片段为中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因, 与意蜂幼虫囊状病病毒结构蛋白基因序列的同源性为８６－８ ％ , 与之对应氨基酸序列的同源性高达９３－４ ％ ． 该病毒株为一种新型的蜜蜂囊状幼虫病病毒株     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。     

马铃薯卷叶病毒中国分离株外壳蛋白基因及其上游先导序列的cDNA克隆和序列分析

按照马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）核苷酸序列，针对ＣＰ基因及其上游基因间隔区全长约０．８ｋｂ的区段设计合成两个特异性引物，以马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）的ＲＮＡ为模板，反转录合成ＣＤＮＡ第一条链，再经ＰＣＲ扩增合成ｃＤＮＡ，将ＣＤＮＡ克隆于ｐＵＣ１９质粒．限制性酶切分析和核苷酸序列测定表明克隆的ＰＬＲＶ－Ｃｈ外壳蛋白（ＣＰ）基因及其上游基因间隔区的全长ＣＤＮＡ共８２４个核苷酸，与国外报道的４个ＰＬＲＶ分离株的核苷梳序列相比具有高度同源性．ＰＬＲＶ的外壳蛋白基因序列与其上游基因间隔区相比保守性更强．     

中国人P型铜转运ATP酶基因突变的初步研究

应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及测序等方法分析了１４１便ＷＤ患者ＡＴＰ７Ｂ基因第７、９及１４外显子的部分ＤＮＡ序列改变，通过对患者ＤＮＡＴ下沉人ＤＮＡＲＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳带迁移作对比分析，发现在１４１例患者中第７、９及１４外显子ＰＣＲ扩增产物迁移异常才分别为４例、６例和４０例，依据ＤＮＡ物单链构聚与分子电泳迁移的关系，提示该组病人中ＡＴＰ７Ｂ基因第７、９和１４外显子的突变率     

带HSV－tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用．在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ,ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％．四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９,ＬＡＸ,ＳＰＣ,ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性．另Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞都有一定杀伤作用,但杀伤效果有很大差别;就Ａ５４９而言,ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７～８倍．此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”,即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后,后者也明显地遭到杀伤．     

蜂毒肽前体蛋白cDNA的克隆及序列分析

从蜜蜂（Ａｐｉｓｍｅｌｌｉｆｅｒａ）毒腺中提取总ＲＮＡ,通过ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到了蜂毒肽前体蛋白的ｃＤＮＡ。扩增产物克隆到ｐＴ７Ｂｌｕ－Ｔ载体,再进一步将插入片段酶切连接到ＰＵＣ１１８载体上,构建了与β－半乳糖苷酶部分序列相融合的蜂毒肽前体蛋白表达体并转化大肠杆菌ＪＭ１０９。     

西瓜种植物RAPD分析影响因子的研究

以西瓜种内的１２个品种（系）为模板ＤＮＡ,研究了影响ＲＡＰＤ扩增效果的因素。结果表明,模板ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、随机引物、Ｍｇ２＋浓度以及ＰＣＲ反应程序在ＲＡＰＤ分析中都具有重要的作用。根据以上因子的研究结果,建立了适合西瓜种植物的ＲＡＰＤ分析的技术体系：１０μＬ反应液中,模板１０ｎｇ／１０μＬ,引物０５μｍｏｌ／Ｌ,ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８３）５０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＢＳＡ５００μｇ／ｍＬ,ＭｇＣｌ２２５ｍｍｏｌ／Ｌ,ＴａｑＤＮＡ０６Ｕ／１０μＬ,ｄＮＴＰｓ２００μｍｏｌ／Ｌ,１０％蔗糖４００和１ｍｍｏｌ／Ｌ甲酚红。     

应用聚合酶链式反应检测犬细小病毒

将具有犬细小病毒病典型症状的病犬肠溶物经ＳＤＳ－酚裂解法提取总ＤＮＡ,并以此ＤＮＡ为模板,通过人工合成的两条２０ｍｅｒ引物进行ＰＣＲ扩增,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白ＶＰ２基因中间１／３区段,ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳,试验结果表明：用ＰＣＲ扩增检测犬细小病毒具有良好的特异性,应用该方法检测的２７份病犬肠溶物样品块获得了预计长度的ＤＮＡ片段（５３１ｂｐ）,而健康犬的肠溶物样品ＰＣＲ结果为     

一种家猪基因组PCR—RAPD反应体系的建立

以家猪血样为ＤＮＡ提取材料 ，建立了用改进方法提取ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ－ＲＡＰ 分析的最佳条件，获得稳定而理想的ＰＣＲ－ＲＡＰＤ扩增结果。     

三种不同方法检测鸡马立克氏病毒的效果比较

研究比较了核酸斑点杂交技术、多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增和病毒分离技术在检测ＭＤＶ中的效果和相关性，试验结果表明：以ＰＣＲ扩增Ｉ型ＭＤＶ１３２ｂｐ重复序列或以此序列标记的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ探针进行Ｄｏｔ－ＤＮＡ分子杂交检测ＭＤＶ，均具有较好的效果，灵敏度比常规病毒分离高近万倍，其特异性较强，并能快速鉴别ＭＤＶⅠ型毒，使诊断时间缩短了许多。     

中国鹅5个品种随机扩增多态DNA(RAPD)分析

目的 用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术分析中国鹅的５个品种一皖西白鹅、太湖鹅、浙江白鹅、四川白鹅和狮头鹅的随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）。方法 从３４个１０－寡核苷酸随机引物中筛选出的１４个引物对每一品种的总基因组ＤＮＡ进行了单引物ＰＣＲ扩增,结果 ５个品种共扩增出１７４个ＤＮＡ片段,其中４８个（占２７．６％）在５个品种间表现多态性,根据扩增ＤＮＡ片段的异同计算了各品种间的遗传距离指皖西白鹅和     

GHRP—scu—PA—32K突变体的构建,表达及纯化产物的部分性 …

在ｓｃｕ－ＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变,在Ｎ端紧接Ｌｅｕ＾１以前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ）,构建了ＧＨＲＰ－ｓｃｕ－ＰＡ－３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ＾－细胞。筛选到的稳定表达株在无 清培养基的表达量为５８０ＩＲ／（１０＾６细胞．２４ｈ）。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为一蛋     

小鼠B7—1cDNA克隆,测序,表达及其抗瘤效应的初步探讨

用反转录ＰＣＲ的方法,从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞中扩增出Ｂ７－１ｃＤＮＡ后,插入ｐｃＤＮＡ３质粒中构建成小鼠Ｂ７－１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤ－ｍＢ７．１,经酶切鉴定和序列分析证实此表达载体中插入的Ｂ７－１ｃＤＮＡ的序列与献报道一致。