角倍蚜总RNA提取方法的比较及优化

采用Trizol法及试剂盒柱提法提取角倍蚜若虫及成虫总RNA,通过紫外分光光度法(OD260/OD280、OD260/OD230)及琼脂糖凝胶电泳检测,对所提取RNA的纯度、浓度及完整性进行了分析.结果表明,采用常规样品量两种方法提取的RNA均降解严重,分析认为角倍蚜富含内源性RNase.通过大幅降低样品量,优化提取步骤,缩短提取时间,有效消除了RNA降解现象.采用Trizol法获得了纯度高、完整性好的RNA样品,电泳显示清晰的28S、18S及5S三条带;试剂盒柱提法获得的RNA呈现较为特殊的带型,没有常规的5S条带,而在750bp～1 000bp之间有一明显条带.     

山羊干扰素RNA的提取及鉴定

应用Trizol法从山羊子宫内膜中提取RNA,根据已获得的山羊IFN基因序列设计并合成引物,采用RT-PCR技术进行IFN基因的扩增。结果表明,所提取的RNA经琼脂糖凝胶电泳呈现出28S r RNA、18S r RNA 2条清晰的条带,其OD260/OD280值为1.91,RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致,说明所提取的RNA纯度高、无降解,可进一步用于干扰素的分子生物学研究。     

样品保存温度和时间对总RNA提取的影响

目的:保障提取总RNA质量的前提下探索一种保存样品的适宜方法。方法:Trizol法(试剂盒)提取缺血复灌后肾组织总RNA。缺血45分钟后再灌注的大鼠肾脏,按照不同保存方法将样品分成四组,第一组液氮处理后立即提取总RNA;第二组-20℃冻存1天后提取总RNA;第三组-20℃冻存1周后提取总RNA;第四组液氮处理后1周后提取总RNA,然后检测各组RNA含量。结果:第一组RNA含量最多,第三组提取总RNA的含量最少。结论:提取总RNA的肾组织样品最佳保存方法是获得组织后立即提取总RNA,或者经液氮处理后保存在-20℃,一周后仍可获得较多含量的总RNA。     

山药总RNA不同提取方法的比较研究

为提取高质量的山药总RNA,以铁棍山药茎段为材料,采用Trizol法、RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法、改良CTAB法和试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提取RNA的完整性,并用超微量分光光度计分析RNA的纯度.结果显示采用Trizol法难以提RNA,RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法提取效果不理想,存在DNA和蛋白质污染,而用改良CTAB法和试剂盒法提取到的总RNA纯度高、完整性好,其中,改良CTAB法较试剂盒法价格便宜,但提取过程较烦琐.因此,应根据实验需要选择CTAB法或试剂盒法提取铁棍山药总RNA.本结果对其他品种山药或富含多糖多酚类物质植物的RNA的提取也具有一定借鉴意义.     

香花槐各组织总RNA提取方法的改良和优化

为探索香花槐各组织总RNA提取的最佳方法,以实验苗圃中的香花槐为实验材料,在比较了Trizol试剂法和常规CTAB法的基础上,建立了香花槐不同组织的最适提取方法.改良CTAB法利用高质量浓度的β-巯基乙醇和合适质量浓度的聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)来防止RNA提取过程中多酚的氧化,然后增加苯酚/氯仿抽提次数来去除香花槐叶片和茎皮过多蛋白质.改良Trizol试剂法在根皮中加PVP研磨成白色粉末,可以有效地防止反应液褐化.各组织优化方法经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取的总RNA的28S、18S条带清晰明亮,无降解;其A260nm/A280nm值为2.0,表明提取的总RNA质量较好.     

白术根茎的总RNA提取方法的比较

探讨提取白术根茎总RNA的最优方案。以新鲜白术的根茎为实验材料,采用三种方法提取其根茎总RNA。用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测RNA样品完整性,用RT-PCR方法验证RNA质量。用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒的方法,获得了完整性最好、质量最高的总RNA样品。提取白术根茎总RNA的三种方法中,多糖多酚植物总RNA提取试剂盒的方法最理想。     

沙葱总RNA的提取与质量分析

以沙葱种子和沙葱幼叶为材料,分别用RNAiso Plus试剂法、RNAiso Plus醋酸钠改进法、CTAB-异丙醇法、CTAB-LiCl法4种不同的方法提取沙葱总RNA,经琼脂糖凝胶电泳,采用紫外分光光度法测定总RNA纯度并进行RT-PCR检测.结果表明,沙葱不同组织总RNA提取的最优方法有所不同.采用CTAB-LiCl法能有效地提取出沙葱种子高质量、完整性好而且无胶状不溶物的RNA,没有明显的蛋白和基因组DNA的污染.采用RNAiso Plus醋酸钠改进法能有效地去除沙葱幼叶中多糖的干扰,所提取的RNA条带清晰,完整性好,是沙葱幼叶总RNA提取的有效方法.     

湘文一号抗虫棉幼叶总RNA提取技术研究

棉花抗虫Bt基因克隆技术第一步就是从抗虫Bt基因特异性表达的幼叶中提取总RNA,基因的表达可以在RNA产生的不同阶段进行调控,纯化完整的总RNA是进行基因表达研究和从cDNA克隆新基因的基础.对比分析了CTAB-licl法、改良异硫氰酸胍一步法、Trizol一步法和试剂盒提取方法4种RNA提取技术,经琼脂糖凝胶电泳谱带结果检验和紫外分光光度计检测,发现前2种方法很难提取到理想的RNA,而后2种提取的RNA完整性较好,但用RNA Out试剂盒提取的RNA更加适用于反转录cDNA.     

从福尔马林固定的癌组织中提取RNA的方法

目的:寻求从福尔马林固定的癌组织中提取RNA的合理方法.方法:运用Trizol法从福尔马林固定的胃癌组织中提取RNA,用分光光度计测定RNA的产量和纯度;通过RT-PCR对不同长度的管家基因-actin进行扩增.结果:100 bp和300 bp的-actin均能顺利扩增出特异性条带,500 bp的-actin未能扩增.结论:用Trizol法从福尔马林固定的癌组织中提取RNA是可行的;进行RT-PCR时应尽量设计小片段引物(100~300 bp)以获得更好的扩增效果.     

运动员骨骼肌组织提取总RNA的新方法

为了寻求一种从微量组织中高效又简便的提取骨骼肌总RNA方法,实验对常用RNA提取方法Trizol法进行了改进和简化,提取的总RNA质量进行了电泳和光密度值检测.实验结果显示,运动员微量骨骼肌组织提取的总 RNA 28S、18S和5S三条带清晰可见, RT-PCR 扩增的β-actin 参照基因条带具有特异性,说明该方法从微量组织可有效、简便地提取骨骼肌总 RNA,提取总 RNA 的得率和纯度均符合分子生物学进一步实验要求,为运动相关基因的分子生物学调控机制等研究提供了一定的方法参考.     

中国高原和日本平原65～74岁老年人血脂及血糖的比较研究

目的:比较世居青海高原和日本平原老年人群血脂及血糖的异同,分析其社会学影响与干预对策.方法:以189名世居青海高原和日本平原65~74岁老年人群为研究对象,抽取晨空腹静脉血5ML分别对高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)及血糖(Glu)等指标进行检测分析.结果:HDL-C日本男子显著高于中国男子(P0.01),日本女子高于中国女子,但无显著性差异(P0.05);T-Cho日本男女均低于中国男女,但无显著性差异(P0.05);TG日本男子低于中国男子,无显著性差异(P0.05),而日本女子显著低于中国女子(P0.01).Glu日本男女均高于中国男女,有显著性差异(P0.01和P0.05).结论:青海高原地区老年男女HDL-C总体低于日本老年男女,而T-CHO和TG高于日本老年男女;Glu日本老年男女高于中国老年男女.说明日本老年男女在动脉粥样硬化、冠心病等的发生率方面较中国老年男女低,且日本老年男女在体力劳动和体育锻炼等方面可能较中国老年男女强.     

见血清止血作用研究

为明确民间药见血清的止血有效部位,采用毛细玻管法及载玻片法观察见血清醇提部位对小鼠凝血时间的影响;采用断尾法观察其对小鼠出血时间的影响.实验结果显示:毛细玻管法和载玻片法中,见血清醇提部位高、低剂量均能显著缩短小鼠的凝血时间,与空白对照组比较有显著统计学差异(P<0.01,P<0.05);断尾法中,见血清醇提部位高、低剂量均能显著缩短小鼠出血时间,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);见血清醇提部位具有止血功效.     

葛根芩连汤煮散颗粒与传统汤剂煎煮效率比较研究

为对比研究葛根芩连汤煮散颗粒与其传统汤剂的煎煮效率,采用单因素试验法,以不同煎煮时间点煮散颗粒和传统汤剂煎液中葛根素的煎出量和其干膏收率为指标,用综合加权评分法对煎煮效率进行评价,并绘制煎煮曲线.结果表明:煎煮5～60 min过程中,煮散颗粒的煎出效率均高于同时间点传统汤剂的煎出效率,且两者之间均具有极显著性差异.结论:本试验表明煮散颗粒具有节省药材与时间的优点,为煮散颗粒后续开发提供试验基础.     

牡蛎提取物对运动大鼠血清和骨骼肌LDH活性及LA的影响

目的：探讨灌喂牡蛎提取物对大强度运动训练大鼠运动能力与血清和骨骼肌LDH活性及LA含量的影响．方法：实验动物随机分为对照组、运动组、牡蛎＋运动组（牡蛎组）,每组10只．对照组不进行运动训练,其余两组大鼠进行游泳训练,每周训练6天,共9周．9周后检测大鼠力竭游泳时间、血清和骨骼肌LDH活性及LA含量．结果：牡蛎提取物能明显提高大鼠运动能力,延长力竭时间,与运动组比较呈显著性差异（P〈0．05）．牡蛎组大鼠血清LDH活性和BLA含量均低于运动组,而骨骼肌LDH活性高于运动组,但LA也低于运动组（P〈0．05）．对照组大鼠血清和骨骼肌LDH活性和LA含量与牡蛎组比较均无显著差异（P〉0．05）．运动组大鼠血清和骨骼肌的LA含量均高于对照组和牡蛎组（P〈0．05）;运动组大鼠血清LDH活性高于对照组和牡蛎组,而骨骼肌LDH活性低于对照组和牡蛎组（P〈0．05）．结论：灌喂牡蛎提取物能提高大鼠的运动能力,具有较好的抗疲劳效果．     

蒙药敖其日奈日勒嘎治疗类风湿关节炎的临床研究

目的：通过临床试验研究,客观评价蒙药敖其日奈日勒嘎治疗类风湿关节炎的临床研究.方法：将72例类风湿关节炎患者随机分为治疗组和对照组,治疗组用MTX＋蒙药敖其日奈日勒嘎治疗,对照组用MTX治疗.治疗中观察临床症状、体征和试验前后各行一次手的正位片（治疗前）检查以及血常规、肝功能、肾功能检查.结果：（1）治疗组的显效率为6.06%,总有效率为90.91%,对照组显效率为0%,总有效率为81.82%,两组间无显著性差异（P〉0.05）（.2）两组的生化检查结果的改变,两组无显著差异（P〉0.05）,但治疗前后自身对照,两组的RF有显著差异（P〈0.01）,治疗组CRP有显著差异（P〈0.01）,两组的ESR两组无显著差异（P〉0.05）,对照组CRP两组无显著差异（P〉0.05）（.3）对照两组治疗后各症侯好转情况：治疗前后每组各症侯自身对照疼痛程度,压痛程度,晨僵时间P〉0.05两组无显著差异,晨僵,关节屈伸不利等症状的好转（P〈0.05）有显著差异,肿胀程度、肿胀数、压痛数等症状的好转,治疗组优于对照组（P〈0.01）（.4）敖其日奈日勒嘎对人体血象、肝肾功能无明显不良反应.结论：蒙药敖其日奈日勒嘎对类风湿关节炎的治疗有效,两组的总有效率相仿,但治疗晨僵、关节屈伸不利、肿胀程度、肿胀数、压痛数等症状方面蒙药敖其日奈日勒嘎＋MTX组优于MTX组.     

丹参多酚酸盐对冠状动脉内支架置入术后患者血清脂联素与抵抗素的影响

目的：研究丹参多酚酸盐对冠状动脉内支架置入后患者血清脂联素与抵抗素的影响.方法：将70例行冠状动脉内支架置入术的患者随机分为治疗组和对照组.对照组采用常规治疗方法进行治疗,治疗组在常规治疗基础上加用丹参多酚酸盐治疗,观察支架置入前、支架置入后24h及7d血清血清脂联素与抵抗素水平的变化.结果：治疗前两组患者血清脂联素与抵抗素水平无显著差异（P〉0.05）;两组患者血清脂联素水平于术后24h、术后7d均呈明显升高趋势（P＜0.05）;治疗组清脂联素水平于术后24h、术后7d均明显高于对照组（P＜0.05）.两组患者血清抵抗素水平于术后24h、术后7d均呈明显减低趋势（P＜0.05）;治疗组血清抵抗素水平于术后24h、术后7d均明显低于对照组（P＜0.05）.结论：丹参多酚酸盐可能通过降低抵抗素、升高脂联素发挥其抗炎、抗动脉粥样硬化作用,对冠脉内支架置入后患者发挥心血管保护作用.     

金川多肋牦牛乳成分的ICP-OES、GS-MS分析

通过分析金川多肋牦牛乳的营养成分,为种质遗传特性及乳品加工研究积累资料.随机选取金川牦牛、麦洼牦牛泌乳期母牛各30头,采用ICP-OES测定乳矿物质含量,GS-MS测定脂肪酸含量,乳成分测试仪测定乳常规成分.结果显示:金川多肋牦牛乳常规成分的非脂固、蛋白质、密度、乳糖显著高于麦洼牦牛(P0.01);金川多肋牦牛乳矿物质元素与麦洼牦牛差异不显著;脂肪酸中硬脂酸、亚油酸、油酸含量高于麦洼牦牛(P0.05或P0.01).金川多肋牦牛乳部分成分指标优于麦洼牦牛,具有一定特异性.     

18-β甘草次酸抑制KCl对大鼠脑中动脉的收缩作用

为讨论缝隙连接阻断剂18β—GA在脑血管收缩反应中的可能作用。采用压力肌动图技术,在急性分离的Wistar大鼠的大脑中动脉（直径〈300μm）,观察18β—GA干预前后不同浓度的收缩剂KCl对血管直径的影响。结果显示,KCl可以浓度依赖性的引起脑中动脉收缩,且30～80mmol／L引起的收缩与血管静息状态下的直径相比具有统计学差异（P〈0．05,n=7）。18βGA也可浓度依赖性的引起脑中动脉收缩,且10～100〉mol／L引起的收缩与未加药前相比具有统计学差异（P％0．05,n=8）。预灌流18β—GA（100／amol／L）后,50～80mmol／L KCl引起血管收缩幅度减小,拟合曲线下移,且差异具有统计学意义（P〈0．05,n=7）。由此可知：18B—GA可抑制KCl对脑血管的收缩作用,提示细胞问缝隙连接参与脑血管收缩活动。     

猴耳环消炎颗粒治疗急性咽炎52例临床观察

目的：观察猴耳环消炎颗粒治疗急性咽炎的，临床效果。方法：随机选取102例急性咽炎患者，其中52例选为治疗组，给予口服猴耳环消炎颗粒；另50例选为对照组。对比分析两组之间的疗效差别。结果：治疗组治愈率明显高于对照组（P〈0．05），但两组总有效率之间并无统计学上的差异（P〉0．05）。结论：猴耳环消炎颗粒在治疗急性咽炎上有良好的临床效果     

马来酸依那普利叶酸片对伴H型高血压急性脑梗死患者的影响

目的通过观察马来酸依那普利叶酸片对伴H型高血压急性脑梗死患者的影响,探讨发现叶酸对伴H型高血压的急性脑梗死的治疗作用及其预后的影响。方法选择100例急性脑梗死患者随机分为治疗组和对照组各50例,治疗组给予马来酸依那普利叶酸片(依叶)10 mg/0.8 mg,1次/d治疗;对照组给予马来酸依那普利片10 mg,1次/d治疗;其它用药两组相同。分别于治疗前、治疗后1 w和2 w测量血压水平,治疗前、治疗后2 w和4 w检测血浆Hcy水平,并进行神经功能缺损评分。结果治疗前两组间血压水平、血浆Hcy水平、神经功能缺损评分无显著性差异(P0.05);治疗后1 w和治疗后2 w治疗组血压均在正常范围,而对照组仍偏高,两组间差异有统计学意义(P0.05)。治疗后2 w和4 w两组间血浆Hcy水平比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗组血浆Hcy水平明显低于对照组。治疗组与对照组组内不同时间点间神经功能缺损评分差异均有统计学意义(P0.05)。治疗前最高,随后逐渐降低;治疗组2 w和4 w与对照组神经功能评分比较差异有统计学意义(P0.05),治疗组神经功能缺损评分低于对照组。结论马来酸依那普利叶酸片能有效地控制伴H型高血压急性脑梗死患者的血浆Hcy及血压水平,改善脑梗死的预后。