从脐血单个核细胞诱导树突状细胞

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪分析细胞表面标志 CD83及 HLA- DR。发现用 GM- CSF+TNF-α+IL - 4可获得 ( 3 6 .79± 3 .1 5 ) % CD1 a+ 细胞 ,LPS可使 CD83及 HLA- DR的比例从 ( 0 .5 7± 0 .5 6 ) %及 ( 40 .2 7± 6 .3 3 ) %分别升至 ( 3 2 .79± 1 2 .90 ) %及 ( 95 .5 2± 3 .45 ) %。实验证明脐血单个核细胞作为另一种主要来源 ,经特定细胞因子诱导可生成大量 DC,并能通过 LPS刺激 DC成熟     

元宝枫叶黄酮抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活的作用

 探讨枫叶黄酮对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞株BV-2细胞炎性因子释放的抑制作用.用LPS刺激BV-2细胞构建炎症模型,采用免疫荧光双标和RT-PCR方法检测不同浓度枫叶黄酮(5,10,15μmol/L)对细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)、细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)、炎性信号蛋白核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白与mRNA的表达变化.结果发现:不同浓度的枫叶黄酮在翻译水平和转录水平上明显抑制了LPS诱导的细胞炎性蛋白酶iNOS和COX-2,细胞炎性因子TNF-α和IL-1β与炎性信号蛋白NF-κB的上调.上述结果表明枫叶黄酮可通过调控LPS诱导的小胶质细胞株BV-2细胞炎性因子释放从而抑制小胶质细胞激活,发挥抗神经炎症的作用.     

野漆树苷对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用及机制探究

目的:探究野漆树苷(Rhoifolin,RHO)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型释放炎性因子的影响,并探讨其作用机制.方法:用脂多糖(0.5μg·mL~(-1))刺激体外生长良好的RAW264.7细胞24h建立体外细胞炎症模型,以MTT法测定不同浓度RHO对RAW264.7细胞的毒性作用,用Griess试剂法检测一氧化氮(Nitric Oxide NO)的含量,RT-PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α),白介素1β(Interleukin-1β,IL~(-1)β),白介素6(Interleukin,IL-6)的含量,采用Western Blot法检测MAPK信号通路中相关蛋白的含量.结果:与空白对照组相比,在LPS诱导下,RAW264.7细胞分泌致炎因子NO,TNF-α,IL~(-1)β,IL-6(P0.01);与模型组相比,25~100μmol·L~(-1)的RHO可明显下调LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎症因子NO,TNF-α,IL~(-1)β和IL-6(P0.05,P0.01),并呈现良好的剂量依赖关系;野漆树苷还不同程度的抑制了Erk和JNK激酶的磷酸化.结论:RHO可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,减少炎症因子NO分泌,抑制TNF-α,IL~(-1)β和IL-6mRNA的合成,抑制JNK/SAPK及Erk信号通路可能是其抗炎作用机制之一.     

阿奇霉素-苦木注射液联用对炎症细胞因子释放影响的体外研究

实验研究阿奇霉素与苦木注射液体外联合用药对前炎症因子NO、TNF-α抑制作用的影响.采用脂多糖(LPS)体外刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264. 7,刺激细胞释放TNF-α、NO前炎性因子.采用MTT法评价细胞毒性; Griess法检测培养液上清中NO含量;ELISA试剂盒法检测TNF-α含量;金正均法计算Q值进行药效联用评价.结果表明阿奇霉素联合苦木注射液在10～200μg/m L浓度范围内可明显抑制LPS诱导巨噬细胞RAW264. 7释放的炎性因子TNF-α、NO,并呈现良好的剂量依赖关系.阿奇霉素联合苦木注射液对炎症因子NO具相加抑制作用,对炎症因子TNF-α具协同抑制作用.     

威灵仙不同提取部位对脂多糖诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS和TNF-α表达的影响

研究了威灵仙不同提取部位对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS和TNF-α分泌的作用.通过ELISA方法检测25、50、100μg/mL的威灵仙不同提取部位对LPS(1μg/mL)诱导RAW264.7细胞产生NO、iNOS和TNF-α的影响;实时定量PCR方法检测威灵仙不同提取部位对LPS诱导iNOS和TNF-α基因表达的影响.结果表明,LPS能够明显诱导RAW264.7细胞产生NO、iNOS和TNF-α,威灵仙不同提取部位(25、50、100μg/mL)均能抑制其活性和基因表达,并呈现明显的剂量依赖性,其作用强弱依次为威灵仙乙酸乙酯部位、石油醚部位、正丁醇部位和水部位.因此得出,威灵仙不同提取部位的抗炎作用效果不同;抑制炎症因子的分泌和释放可能是威灵仙发挥抗炎作用机制之一.     

植物内生真菌来源的倍半萜对LPS诱导细胞炎症反应的抑制作用

目的:探究马铃薯内生真菌次生代谢产物中新型倍半萜类化合物TA的抗炎作用.方法:脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型,通过测定细胞存活率、细胞NO的产生量、细胞内活性氧(ROS)水平,细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放量、一氧化氮合成酶(iNOS),环氧合酶(COX-2)蛋白表达量,从而评价化合物TA的抗炎活性.结果:化合物TA对细胞无毒性,可剂量依赖性地抑制LPS刺激产生的NO,降低ROS水平,减少细胞炎症因子TNF-α和IL-1β的产生及下调iNOS,COX-2蛋白的表达量.结论:马铃薯内生真菌次生代谢产物中新型倍半萜类化合物TA具有显著的抗炎活性.     

金花茶叶醇提物对LPS导致RAW炎症的保护作用

考察金花茶叶醇提物对内毒素(LPS)刺激腹腔巨噬细胞(RAW264.7)后细胞炎症的保护作用.通过噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度金花茶叶醇提物作用下细胞的存活率;通过Griess法检测金花茶叶醇提物对LPS刺激后RAW264.7细胞NO释放量;通过酶联免疫吸附法检测炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6含量;通过蛋白免疫印迹法检测NF-κB p65的表达量.MTT结果显示,LPS及不同浓度的金花茶叶醇提物均未对细胞存活率产生明显影响(P0.05).3、10、30、100μmol/L的金花茶叶醇提物均可以明显减少LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放(P0.05).100μmol/L的金花茶叶醇提物可以明显减少LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的释放(P0.001).10、30、100μmol/L的金花茶叶醇提物均可以明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白表达(P0.05).金花茶叶提取物对内毒素导致的腹腔巨噬细胞炎症具有一定的保护作用,其作用机制可能与NF-κB通路相关.     

硫酸化茯苓多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

研究硫酸化茯苓多糖(SP)对脂多糖(LPS)诱导的体内外小鼠巨噬细胞氧化损伤的影响.体外实验中,制备小鼠腹腔巨噬细胞,加入不同质量浓度(0~100mg/mL)的SP和1mg/mL的LPS诱导剂,24h后检测细胞活力、一氧化氮(NO)、超氧阴离子自由基(O-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.体内实验中,42只ICR小鼠随机分为空白组、模型组和预防组,采用腹腔注射法连续给药7天后收集腹腔巨噬细胞,检测多种生化指标.实验结果表明:LPS可降低巨噬细胞的活性,增加O-2的释放和NO、TNF-α的分泌;SP能够显著降低NO的水平,提高巨噬细胞抗O-2的活力,对于TNF-α的含量没有显著影响.SP可有效地改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的氧化损伤作用.     

两种方法建立大鼠骨性关节炎模型中软骨细胞变化比较

为了比较常规手术法及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)干预法构建大鼠骨性关节炎模型的差异,探寻骨性关节炎前期动物研究中简捷有效的模型建立方法。通过选取36只SPF级SD大鼠雄性随机分为健康对照组(control group)、假手术组(sham-operated group)、手术组(operated group)和TNF-α干预组(TNF-αgroup),4周后取材,培养提取的各组原代软骨细胞,采用MTT比色法检测不同处理后对软骨细胞活力的影响;红胞调之原位检测(TUNEL)法检测软骨细胞凋亡率;蛋白印迹法(western blot)检测炎症因子MCP-1、MMP9及ICAM1的表达水平变化。结果表明:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测提示经各组不同方法处理后软骨细胞活力未见明显改变,TUNEL法检测结果提示:各组之间相比较统计分析后,与对照组比较,手术组和TNF-α干预组软骨细胞凋亡率较高(P 0. 01),手术组和TNF-α干预组两者之间无显著差异(P 0. 05);与假手术组相比,手术组和TNF-α干预组处理后,软骨细胞凋亡率显著升高(P 0. 01);对照组与假手术组、手术组和TNF-α干预组之间分别比较,软骨细胞凋亡率无明显变化(P 0. 05)。Western blot结果表明:分别与对照组和假手术组相比较,手术组和TNF-α干预组软骨细胞MCP-1、MMP9及ICAM1表达水平增高(P 0. 01),手术组和TNF-α干预组之间各指标改变无统计学差异(P 0. 05)。可见给予TNF-α干预可促使软骨细胞凋亡率及炎症因子指标增高,其对软骨细胞的影响与手术组相似,可成为一种简捷有效的大鼠骨性关节炎模型建立方法。     

大鼠疑核对内毒素炎症反应的影响及机制研究

为了探究大鼠疑核(NA)在炎症反应中的作用,选取大鼠腹腔注射内毒素(LPS)的方法来构建大鼠炎症模型,同时电损毁左、右侧的NA,采用免疫组织化学技术和酶联免疫(ELISA)实验技术,检测NA中即刻早期基因(Fos)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素4(IL-4)的含量。结果表明:与对照组相比,LPS炎症组NA、迷走神经背核(DMV)、孤束核(NTS)中Fos和GFAP的表达具有显著的统计学意义,血清中TNF-α和IL-4的含量有明显的增大趋势;与假损毁左侧NA组相比,被损毁左侧NA组LPS炎症大鼠血清中IL-4以及TNF-α的水平具有显著统计学意义,同时大鼠NTS中的Fos的表达量明显增加;与假损毁组相比较,损毁右侧NA组血清中细胞因子TNF-α的含量没有显著变化,而IL-4含量显著增大,DMV和NTS中的Fos和GFAP表达也无明显变化;NA参与了LPS炎症反应,并通过左侧NA减少抗炎细胞因子的产生,增加促炎细胞因子的产生;右侧NA减少抗炎细胞因子产生,而对促炎细胞因子无调节作用,左右两侧NA在炎症反应中的作用可能有所差别。     

轮环藤碱对小胶质细胞活化的抑制作用研究

考察了轮环藤碱对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞过度活化的抑制作用.培养BV2小鼠小胶质细胞系,以脂多糖(1μg/mL)激活小胶质细胞,同时给予不同浓度的轮环藤碱(0.1～10μmol/L)处理细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率,Griess法测定细胞释放一氧化氮(NO)水平,酶联免疫吸附分析实验(ELISA)检测细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的水平.进一步在无细胞体系中考察了轮环藤碱对NO的直接清除能力;以及对DPPH、羟自由基(·OH)、过氧亚硝酸根离子自由基(ONOO~-)和超氧阴离子(·O_2~-)自由基的清除作用.结果表明,轮环藤碱可显著抑制LPS激活的小胶质细胞释放NO及三种炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α),且对细胞存活率无明显影响;此外,轮环藤碱对NO、DPPH、·OH、ONOO~-和·O_2~-自由基均具有显著清除能力.综上,轮环藤碱可能对小胶质细胞过度激活引起的神经炎性相关疾病具有潜在的防治作用.     

西洛他唑对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞分泌TNF-α的影响及机制探讨

目的研究西洛他唑对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞分泌TNF-α的影响,探讨西洛他唑对单核细胞的炎症调控作用。方法体外培养人THP-1单核细胞,分为对照组(A组)、LPS组(B组)、西洛他唑组(C组)、西洛他唑+SQ22536组(D组),C组和D组加入LPS刺激24 h。应用ELISA法检测各组细胞培养上清TNF-α水平,并测定各组细胞内c AMP浓度。结果西洛他唑能抑制LPS刺激的人THP-1单核细胞分泌TNF-α,同时升高细胞内c AMP浓度。结论西洛他唑可抑制LPS刺激的人THP-1单核细胞分泌TNF-α,这种作用可能与升高细胞内c AMP浓度有关。     

芹菜素对RAW264.7细胞增殖、分泌NO和吞噬功能的影响

为研究芹菜素(Apigenin,AP)对RAW264.7细胞增殖、分泌一氧化氮(nitrogen monoxidum,NO)和吞噬功能的影响,首先培养RAW264.7细胞至细胞对数生长期,然后MTT法检测不同浓度(25、50、100、150和200μmol/L)的AP对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的RAW264.7细胞增殖的影响,再用Griess试剂盒检测上述浓度AP对LPS刺激的RAW264.7细胞分泌NO的影响,并用荧光微球检测其吞噬功能的变化.结果显示25-200 μmol/LAP显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞的增殖,并明显抑制LPS刺激的RAW264.7细胞分泌NO,同时明显抑制LPS刺激的RAW264.7细胞的吞噬功能(P<0.01),且呈剂量依赖关系.故在一定浓度范围内,AP显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞增殖、分泌NO和吞噬功能,故有望通过进一步研究将其开发成为免疫调节药物.     

黄芪多糖对脂肪细胞释放肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-6的影响

目的:探讨黄芪多糖对脂肪细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的抑制作用及机制.方法由3T3-L1细胞诱导分化成熟的脂肪细胞随机分为实验组和对照组.实验组脂肪细胞以0.1g·L-1黄芪多糖培养基干预,对照组脂肪细胞普通培养基培养.ELISA法测两组脂肪细胞及培养基中TNF-α、IL-6蛋白的含量,及逆转录-聚合酶链反应检测两组脂肪细胞TNF-α蛋白和IL-6蛋白mRNA水平.结果实验组脂肪细胞及培养基中TNF-α、IL-6蛋白的含量低于对照组(P=0.000),而且实验组脂肪细胞TNF-α蛋白和IL-6蛋白mRNA水平低于对照组(P=0.000).结论:黄芪多糖可抑制脂肪细胞释放炎症细胞因子,控制脂肪组织的慢性炎症反应.     

红景天苷对LPS诱导大鼠心肌损伤的保护作用及机制研究

研究红景天苷(Salidroside)对脂多糖(LPS)致大鼠心肌损伤的保护作用及机制。雄性清洁级SD大鼠50只,随机分组,分为对照组(NS)10只、LPS模型组(10 mg/kg)10只、红景天苷小剂量(Sal 5 mg/kg)组10只,红景天苷中剂量(Sal 20 mg/kg)组10只,红景天苷大剂量(Sal 50 mg/kg)组10只。腹腔注药后6 h测定左心室收缩压(LVSP)、左心室内压上升及下降最大变化速率(±dp/dtmax)等心功能指标。采用ELISA法和Western blot法测定TNF-α、Toll样受体4和核因子κB蛋白表达。结果显示:与对照组比较,LPS可明显抑制大鼠左室功能,显著增加大鼠心肌TNF-α、TLR4和NF-κB的表达。而与模型组比较,红景天苷可剂量依赖性地下调心肌TLR4、NF-κB及TNF-α表达,改善大鼠左室功能。可见,红景天苷对LPS诱导的大鼠心肌损伤具有一定的保护作用,其机制与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎症信号转导通路密切相关。     

迷走复合体和迷走神经在炎症反应中的可塑性

为了探究炎症反应过程中孤束核-迷走神经背核-迷走神经的可塑性变化,实验分内毒素脂多糖(LPS)组和对照组2组,LPS组大鼠股静脉注射LPS,对照组大鼠股静脉注射同体积的生理盐水,测定迷走神经放电频率、血压、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平以及孤束核和迷走神经背核内Fos阳性神经元表达情况。结果表明:LPS注射后,迷走神经放电频率明显增大,血压虽有降低但不明显;与对照组相比,LPS组神经放电频率明显增大,血清TNF-α水平显著升高,孤束核和迷走神经背核的Fos表达均显著增强,说明迷走神经和孤束核、迷走神经背核参与了炎症反应。     

白介素-10对TNF-α介导血管平滑肌细胞增殖的影响

观察重组人白介素 10 (rhIL_10 )对肿瘤坏死因子 (TNF_α)刺激的离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果显示 ,TNF_α对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL_10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响。在TNF_α刺激下 ,低至 10ng mL的rhIL_10可明显抑制血管平滑肌细胞的生长 (P <0 0 5 )。     

2型糖尿病患者性别、肥胖对血中RBP4和TNF-α的影响

目的:检测不同性别2型糖尿病患者正常体重组和肥胖组的血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,探讨两者与体脂,糖类、脂类代谢,胰岛素敏感性等的相关性.方法:采用HOMA-IR评价各组胰岛素敏感性,测定受试者的体重指数(BMI),腰臀比(WHR),检测空腹状态下血清RBP4、TNF-α、血糖、HbA1c、血脂和胰岛素水平.结果:超重或肥胖者,RBP4及TNF-α浓度均比体重正常者高;男性RBP4浓度均比女性高,TNF-α浓度无性别差异.RBP4与TNF-α显著正相关.Pearson相关分析:不论性别,血清RBP4和BMI、WHR、TG及HOMA-IR均有显著正相关(P<0.05).而TNF-均与腹内型肥胖、脂代谢有关,TNF-α     

中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制.方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20 μL/mL)孵育4 h后, 加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合Sytox Green染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放.结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α 5种细胞因子的产生, 抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生.结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用.     

人参皂苷Rb1通过抑制NF-κB信号通路减轻了大鼠佐剂性关节炎

本研究旨在探讨人参皂苷Rb1对佐剂性关节炎(AIA)大鼠的保护作用及机制.AIA大鼠腹腔注射给药Rb1,连续给药14 d,观察大鼠足肿胀、关节病理及血清炎症细胞因子水平.并通过体外实验检测Rb1对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α及IL-6水平的影响,进一步评估Rb1的抗炎作用.Western blot检测关节滑膜及RAW264.7细胞中NF-κB信号通路相关蛋白表达,阐明Rb1抗RA作用机制.结果显示,Rb1显著减轻AIA大鼠足肿胀和关节破坏,降低血清TNF-α、IL-1β及IL-6水平并抑制LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α及IL-6水平.Western blot显示Rb1下调关节滑膜p-IκBα及p-p65的表达,上调RAW264.7细胞IκBα的表达.以上结果提示,Rb1对AIA大鼠具有保护作用,与抑制关节滑膜中NF-κB信号通路的激活有关.