沙田柚各器官特异蛋白质的研究

利用SDS-PAGE对沙田柚(Citrus grandis var.Shatinyu Hort.)的茎、叶、花萼、花瓣、花药、花柱和子房的可溶性蛋白质进行比较分析,检测到茎中的分子质量31.0 ku,叶中的56.0 ku,花药中的59.0 ku,58.0 ku, 44.0 ku,37.2 ku,36.0 ku,35.5 ku,33.0 ku,21.0 ku,15.4 ku,花柱中的43.0 ku, 38.5 ku,子房中的33.5 ku的蛋白质分别为各器官的特异蛋白质.对茎、叶、花药、花柱的全蛋白质进行IEF-SDS-PAGE双向电泳分析结果也确定了相应于各自SDS-PAGE上特异蛋白质带的特异斑点,而且,SDS-PAGE图谱上的一条蛋白质带在IEF-SDS-PAGE双向图谱上呈现等电点不同而分子质量相同的几个斑点.各器官的蛋白质含量以花药的最高,花萼的为最低.     

沙田柚花柱S-糖蛋白的分离及鉴定

采用层析和电泳相结合的技术,分离和鉴定沙田机花柱中与自交不亲和相关的蛋白质,结果表明：自交沙田柚花柱蛋白质提取液的３５％（ＮＨ４）２ＳＯ４盐析级分,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０层析,可得２个峰,其中峰Ⅰ具有抑制自交花粉管生物的活性,峰Ⅰ含２种蛋白质,且均为糖蛋白,蛋白质Ａ相对分子质量为３２．１０ｋｕ,等电点为ｐＨ７．２;蛋白质Ｂ相对分子质量为２５．１２ｋｕ,等电点为ｐＨ６．４．峰Ⅰ还具有核酸酶活性     

沙田柚WRKY转录因子的克隆与序列分析

利用高通量测序技术对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序,差异分析得到沙田柚WRKY转录因子的序列。该基因的全长序列为1 178bp(GenBank accession No.KU173833),含有993bp的开放阅读框(ORF)可编码330个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为37.00ku,理论等电点为5.79。与未授粉的花柱相比,沙田柚异花授粉1、2、3d花柱中WRKY转录因子基因的表达量(RPKM)分别为5.67、26.04、17.08;而自花授粉1、2、3d花柱中WRKY转录因子基因的表达量(RPKM)分别为15.67、14.96、3.89。氨基酸序列分析表明,该氨基酸序列与甜橙、金桔的同源性分别为98%、97%。系统进化分析发现沙田柚WRKY转录因子与甜橙、金桔的亲缘关系很近,属于一个分支。     

蝴蝶兰花发育相关基因pPI9的克隆与表达分析

为研究具有复杂而特异花型的蝴蝶兰花发育的分子机制,利用RT-PCR方法从蝴蝶兰花瓣总RNA中分离出834 bp长的cDNA片断.序列分析表明,该cDNA片断与拟南芥的PI基因有60%的同源性,命名为pPI9.它包含一个开放阅读框,具有编码24.5 ku蛋白质的能力.推导的氨基酸序列中,N端包含一个完整的MADS盒,C端有明显的PI基序.半定量PCR结果表明该基因只在植株的生殖器官中表达,而在营养器官中不表达,推测其可能参与花形态建成过程的调节.     

云芝漆酶同工酶的分离纯化及酶学性质

采用DEAE-Sephrose Fast Flow和Sephadex G-100两步柱层析,得到2种漆酶同工酶,分别命名为LccA和LccB.以ABTS为底物在适当条件下与酶带反应呈绿色谱带鉴定出漆酶谱带.LccA的纯化倍数和回收率分别为53.88和7%,LccB的纯化倍数和回收率分别为208.21和29%.用SDS-PAGE测定两漆酶的分子量分别为64.2 ku和60.7 ku;LccA和LccB的最适作用温度分别是40℃和50℃;最适反应pH值为3.5和4.0;其N-末端部分氨基酸序列为AIGPK和GIGPV,与其他真菌漆酶相比显示很高的同源性,以ABTS为底物的Km值分别为68.96μmol/L和76.92μmol/L.Cu2 对两同工酶都有明显的激活作用,Fe2 ,Ag 完全抑制两同工酶的活性.     

荔枝R基因同源序列的克隆与分析

根据已知植物抗病基因（R基因）编码的蛋白质NBS保守区设计特异简并引物，对荔枝的基因组DNA进行体外扩增，获得了一条大小约500bp的扩增谱带；回收该特异扩增带并进行克隆，筛选若干阳性克隆进行测序，共获得5个片段的序列。同源性比较发现，该5个片段均属于NBS－LRR类抗病基因同源序列（RGA），与已知R基因相应区段的氨基酸序列一致性为13.5%-45.9%。这些RGA既可进一步用于筛选荔枝的抗病候选基因，同时也可以作为分子标记，用于荔枝遗传图谱的构建。该研究表明R基因同源克隆技术可望成为荔枝抗病基因克隆和基因组研究的重要手段。     

热激对温敏不育水稻花粉育性与花药蛋白质组分的影响

高温敏核不育水稻培矮64S在热激（38℃）条件下花粉母细胞减数分裂期花药蛋白质组分与其可育条件（22℃）下的相比较,表现出明显差异：在相对分子量大于97．4ku,97．4ku-14.4ku及小于14．4ku三个区域内共新增加了3条蛋白质带,在相对分子量为97．4ku-14.4ku范围内有7条蛋白质带明显加强。在热激激（38℃）处理后,与湘晚籼2号相比较,培矮64S亦表现出了6条蛋白质带的变化：即在相对分子量大于97．4ku和小于14.4ku两区域内共新增加了3条带,而在相对分子量为97．4ku-14.4ku之间则缺失了3条带;但培矮64S在可充分温度（22℃）下的蛋白质组分扫描图谱则与湘晚籼2号在可育的38℃下蛋白质组分扫描图谱基本一致。因此培矮64S在不育温度（38℃）条件下所引起的花药蛋白质组分的变化可能会使某些酶系统发生改变,以致花粉的正常的生长发育和新陈代谢不能很好地进行,最终导致花粉败育。     

人类Neuritin cDNA的克隆和表达

从人胎脑cDNA文库筛选出一条1618bp的cDNA。此cDNA含有一个426bp的最大开放阅读框,编码一个142个氨基酸的蛋白质,预测分子质量为15.3ku。与目前数据库中序列比较,该cDNA与鼠neuritin基因同源性达98％。多组织Northern blot分析显示neuritin在脑组织高度表达。neuritin cDNA的读框片段正确插入到pQE40表达载体中,获得了预期的表达产物,并初步得到了其纯化蛋白。     

短裙竹荪菌丝体糖蛋白DdGP-3P3纯化及性质研究

短裙竹荪菌丝体经热水抽提，乙醇分级沉淀，级分3经DEAE－Cellulose柱层析纯化得到短裙竹荪菌丝体糖蛋白DdGP-3P3。经测定该糖蛋白为均一组分，相对分子质量为113KDa，红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰，含有β－型糖苷连接键。β－消去反应测定，该糖蛋白中糖和蛋白质的连续键为O－型糖肽键。纸层析和气相层析分析得知DdGP-3P3含有D－葡萄糖（D－glucose)、D-甘露糖（D－Mannose)和D－半乳糖（D－galactose)，其摩尔比为2．01：1．00：1．23。氨基酸分析表明它含有16种氨基酸。     

水稻黑条矮缩病毒基因组第九组分cDNA的克隆及序列分析

从我国发病的玉米材料中提取水稻黑条矮缩病毒,抽提病毒RNA,利用RT-PCR等手段,获得了病毒基因组第九组分（S9）cDNA克隆。序列分析结果表明：S9全长1900bp,含有2个不重叠的ORF,编码蛋白的分子质量分别为39.9,24.2ku,与日本株S9核苷酸序列同源性为89%,与意大利株MRDV S8同源性为86%。     

50 ku keratin-like protein and -microtublin coexist in higher plant cells

IF-like proteins have been obtained from suspension cells of Nicotiana tabacum by selective extraction. Western blot analysis shows that the major components of IF-like proteins are 6 keratin-like proteins of 64, 58, 55, 54, 50 and 45 ku. Specially the 50 ku protein also reacts with polyantibody against microtublin. Two-dimensional gel electrophoresis shows that the 50 ku protein is composed of two different proteins and their amino acid sequences have been determined. Part of the sequence of one protein is identical to that of -microtublin and the other protein's sequence has no significant homologue, which should be a new sequence-unknown protein. These results suggest that 50 ku keratin-like protein and -microtublin coexist in higher plant cells, and that may lead to the phenomenon of co-distribution of IF and microtuble in plant cells.     

水稻黑条矮缩病毒基因组组分10编码的外壳蛋白基因的克隆及表达

从我国山东发病的玉米材料中提取水稻黑条矮缩病毒 ,抽提病毒RNA ,经RT PCR ,克隆了编码外层外壳蛋白的基因组组分 10 (S10 )的cDNA ,并进行了序列测定 .与已报道的日本株和湖北等地的S10进行了序列同源性比较 .结果表明 ,与日本株的同源性为 92 % ,与湖北等地的同源性在 97%～ 98%之间 .将该序列构建到pGEX 3X表达载体中 ,经IPTG诱导 ,表达了分子质量约为 76ku的GST融合蛋白 .经亲和层析纯化和Western印迹分析 ,证实了该基因以可溶性的GST融合蛋白形式在原核中表达 .     

纤维素酶液中β-葡萄糖苷酶的分离纯化

通过(NH4)2SO4分级沉淀、HiPrep 26/10 Desalting脱盐柱、Source15Q阴离子交换柱、Source 15 S阳离子交换柱、HiTrap 16/60 Sephacryl S 200 HR凝胶过滤等技术,分离纯化3种来源里氏木霉、黑曲霉、里氏木霉与黑曲霉混合纤维素酶液中的β-葡萄糖苷酶。结果表明,经SDS PAGE电泳鉴定均为电泳纯,测得黑氏木霉、黑曲霉单独培养β-葡萄糖苷酶相对分子质量分别为68、129 ku,而混合菌培养分离得到两种β-葡萄糖苷酶分子质量大小分别为66.2、134 ku。与单独培养的β-葡萄糖苷酶相似。3种来源的β-葡萄糖苷酶经多步分离纯化后的纯化倍数分别为37.25、40.21、30.12,酶活回收率分别为20.1 2%、23.21 %、28.56 %。     

拓展基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪的检测范围

选用多壁碳纳米管(CNT)作为基质辅助激光解吸电离化飞行时间(Matrix-assisted laser desorption ionization/time of flight,MALDI-TOF)质谱仪的基质,对分子量小于0.8 ku的小分子化合物进行检测,克服了MALDI-TOF MS中的基体干扰,适合进行小分子分析.实验先在正离子模式下检测氨基酸及其衍生物,在正电场条件下清晰地观察到样品的碱金属加合峰[M K] 和[M Na] 分子离子峰,几乎看不到加氢的离子峰[M H] .又在负离子模式下以CNT作为基质对氨基酸样品进行质谱分析,得到单一[M-H]-负的分子离子峰,所得到的谱图几乎没有背景干扰,信噪比高.结果证实在负离子模式下可以方便快捷地进行氨基酸检测,从而拓宽了MALDI-TOF MS的应用范围.     

乙醇酸氧化酶底物诱导实验

乙醇酸氧化酶底物诱导实验徐杰（华南师范大学生物技术研究所广州５１０６３１）关键词乙醇酸氧化酶；底物诱导；６６ｋｕ蛋白中图分类号Ｑ９４６．５我们用改进后的方法，即粗蛋白在柱层析前加人适量的ＦＭＮ，硫酸铰质量分数分布范围改为１５％一２５％，其余按［１１纯...     

产微球茎菌琼胶酶基因的克隆及生物信息学分析

以琼脂为唯一碳源的培养基分离出一株产琼胶酶的海洋菌株AG1,16S rRNA基因序列分析显示,该菌株为产微球茎菌（Microbulbifer sp.）。以菌株AG1的基因组为模板,使用琼胶酶特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pMD18-T载体后进行测序。结果显示,克隆基因的大小为1302 bp,预测编码含有433个氨基酸残基的蛋白质。对该蛋白质进行生物信息学分析,结果表明,该蛋白质序列与来自耐热微泡菌（Microbulbifer thermotolerans）的琼胶酶氨基酸序列相似性为100%,预测本研究克隆的基因编码琼胶酶。该琼胶酶的理论分子质量大小为48.2 ku,理论等电点为5.42。采用同源建模法建立Microbulbifer sp.AG1琼胶酶的三维结构,富含β-折叠。     

偏磷酸使蛋白溶液发生凝聚的理论探讨

指出外加强酸能使蛋白溶液发生凝聚是因为破坏了纤维蛋白质高级结构的氢键，使蛋白质结构变得松散，水化能力降低，粘度增大。偏磷酸溶液中存在大量电荷高、分子量大的多聚体，能有效地中和掉蛋白质胶粒表面的电荷，破坏胶粒表面的水化膜，使蛋白胶粒凝聚而沉淀。     

50 ku keratin-like protein and β-microtublin coexist in higher plant cells

IF-like proteins have been obtained from suspension cells of Nicotiana tabacum by selective extraction. Western blot analysis shows that the major components of IF-like proteins are 6 keratin-like proteins of 64, 58, 55, 54, 50 and 45 ku. Specially the 50 ku ptotein also reacts with polyantibody against microtublin. Two-dimensional gel electrophoresis shows that the 50 ku protein is composed of two different proteins and their amino acid sequences have been determined. Part of the sequence of one protein is identical to that of β-microtublin and the other protein's sequence has no significant homologue, which should be a new sequence-unknown protein. These results suggest that 50 ku keratin-like protein and β-microtublin coexist in higher plant cells, and that may lead to the phenomenon of co-distribution of IF and microtuble in plant cells.